STERILISASI MEDIA NUTRISI

1
STERILISASI MEDIANUTRISI

• Oleh
• Dr. Hadi Ismono., dr., M. Kes

2
Methode Sterilisasi
Pemanasan Basah
Autoclaf
Dgn Bacterisida
Oven
Methode Sterilisasi
Pemanasan Kering
Flaming
Air Mendidih
Gelombang Pendek
3
Pengertian

• Steril
• Bebas dari segala macam bentuk kehidupan
• Sterilisasi
• Membebaskan tiap benda/substansi dr semua
  kehidupan dlm bentuk apapun.
• Desinfeksi
• Mematikan / menyingkirkan mikroorganisme yang dpt
  menyebabkan infeksi

4
Next

• Fungsi
• Untuk mengisolasi mikroorganisme dan mendapatkan
  biakan murni
• Praktek
• Alat, bahan, media, dll.

5
FAKTOR-FAKTOR YANG MEMPENGARUHI STERILISASI DAN
DESINFEKSI

• 1. Hidrasi (Pengurangan cairan dalam tubuh)
• Hidrasi berperan dalam proses denaturasi
  koagulasi oleh panas (kalor).
• Koagulasi berlangsung baik bila protein pd
  bakteri cukup mengandung air.

6

• 2. Pengaruh Suhu
• Semakin rendah suhu yg digunakan semakin lama
  waktu yg diperlukan utk membunuh mikroorganisme
• Sifat mikrobisida dr bahan kimia pd umumnya mjd
  makin efektif bila dibuat semakin hangat

7

• 3. Konsentrasi tidak boleh terlalu pekat
• Bila konsentrasi disinfektan melampaui
  konsentrasi (misal gt1 pd fenol), maka
  peningkatan daya disinfeksi semakin berkurang

8

• 4. Oligodinamika
• Mrpk aktivitas yg diperlihatkan logam berat dlm
  jmlh yg sangat sedikit dimana dapat menghambat
  pertumbuhan mikroorganisme di sekitar logam tsb

9

• 5. Disinfektan
• Keefektifan disinfektan, memp sifat al
• Memp sifat mikrobisida yg sempurna dlm waktu
  beberapa menit, paling lama 1 jam
• Tidak merusak bahan
• Tidak hilang keaktifannya oleh bahan dr luar
• Stabil dlm penyimpanan
• Mudah didapat dan tdk mahal

10
Cara-cara Sterilisasi

• FISIK
• Pemanasan
• Sinar gelombang pendek (radiasi)
• Sinar-X, Sinar UV, Sinar Gamma
• KIMIA
• Menggunakan Bahan kimia
• MEKANIK
• Saringan / filter

11
Metode sterilisasi

• Ada 2 cara sterilisasi
• Pemanasan basah digunakan pada kebanyakan media
  perbenihan karena mengandung air
• Pemanasan kering digunkan untuk alat-alat dari
  gelas, alat-alat dari metal, kertas pembungkus
  barang yg tidak mengkerut oleh panas, minyak,
  waxes dan powder

12
Metode sterilisasi

• a. Pemanasan Basah
• Prinsipnya adalah dengan cara mengkoagulasi atau
  denaturasi protein penyusun tubuh mikroba
  sehingga dapat membunuh mikroba.

13

• Uap bertekanan (autoklaf)
• Digunakan untuk sterilisasi alat gelas
• Waktu yang dibutuhkan untuk sterilisasi larutan
  suhu 121ºC
• Uap jenuh ini dapat menghancurkan spora bakteri
  yang tahan pemanasan.

14
Autoclav
Tekanan uap air Temperatur Waktu sterilisasi
0 1000C -
10 1150C 45 menit
15 1210C 18 menit
30 1340C 3 menit
15
Autoklav
16

• Pemanasan dengan bakterisida
• Digunakan untuk sterilisasi larutan berair atau
  suspensi obat yang tidak stabil dalam autoklaf.
• Larutan yang ditambahkan bakterisida dipanaskan
  pada suhu 100ºC selama 10 menit di dalam pemanas
  air
• Bakterisida yang digunakan 0,5 fenol 0,5
  klorobutanol 0,002 fenil merkuri nitrat 0,2
  klorokresol.

17
Metode Sterilisasi

• b. Pemanasan Kering
• Prinsipnya adalah protein mikroba pertama-tama
  akan mengalami dehidrasi sampai kering.
  Selanjutnya teroksidasi oleh oksigen dari udara
  sehingga menyebabkan mikrobanya mati.

18
Udara panas oven

• Digunakan untuk sterilisasi alat gelas (tabung
  reaksi, petri, pipet), alat bedah (gunting, kapas
  alat suntik)
• Suhu sterilisasi yang digunakan adalah 170ºC
  selama 1 jam, 160ºC selama 2 jam, 150ºC selama 3
  jam.

19
Flaming

• Dengan jilatan api thd jarum, mulut tabung
  biakan, kaca objek, kaca penutup
• Benda2 tsb dijilatkan pd api bunsen tanpa
  membiarkannya memijar

Bunsen
20
Air mendidih

• Digunakan untuk sterilisasi alat bedah seperti
  jarum.
• Hanya dilakukan dalam keadaan darurat.
• Dapat membunuh bentuk vegetatif mikroorganisme
  tetapi tidak sporanya.

21
Sterilisasi gelombang pendek

• Sterilisasi dengan radiasi
• Menggunakan
• Udara panas Oven, 170-180 derajat C, selama 2
  jam
• Uap panas Otoklaf, 121 derajad C, 1-2 Atm.,
  15-30 Menit.
• Prinsipnya Radiasi menembus dinding sel dengan
  langsung mengenai DNA dari inti sel sehingga
  mikroba mengalami mutasi.
• Digunakan untuk sterilisasi bahan atau produk
  yang peka terhadap panas
• Ada dua macam radiasi yang digunakan gelombang
  elektromagnetik (sinar x, sinar ?) dan arus
  partikel kecil (sinar a dan ß).

22
INDIKATOR STERILISASI

• Ada 2 cara yg biasa digunakan
• Indikator kimia
• Indikator spora

• Indikator kimia
• Diletakkan di tengah dari bahan yang hendak di
  disterilkan (bagian yang paling dingin), mis
  bag paling bawah dari chamber
• Brownes sterilizer controlo tube
• Berisi satu larutan yg berwarna merah berubah
  menjadi hijau bila dipanasi
• Bahan ini harus disimpan di bawah 200C ? Mencegah
  perubahan warna prematur
• Digunakan secara rutin

23

• 2. Adhesive tape (Bowie Disk Autoclav tape test)
• Untuk mengetahui/mengukur penetrasi dari uap air
  bersama-sama dengan tes lain

• b. Indikator Spora
• Spora bakteri kering diletakkan diantara bahan
  yang disteril dan setelah proses tsb diperiksa
  viabilitasnya
• Bacillus stearothermophilus ? satu termophilic
  bacteria dpt tumbuh pd suhu 55 600C yg dipakai
  sbg tes
• Sporanya dapat dirusak pada suhu 1210C pada 12
  menit

24
Sterilisasi KIMIA

• Desinfektan
• Desinfeksi adalah membunuh mikroorganisme
  penyebab penyakit dengan disinfektan (antiseptik)
• Ada 2 istilah
• Desinfektan dan Antiseptik

25

• Macam-macam desinfektan yang digunakan
• 1.Alkohol
• Etil alkohol atau propil alkohol digunakan untuk
  mendesinfeksi kulit.
• Alkohol yang dicampur dengan aldehid digunakan
  dalam bidang kedokteran gigi untuk mendesinfeksi
  permukaan

26

• 2. Aldehid
• Glutaraldehid merupakan salah satu desinfektan
  yang populer pada kedokteran gigi
• Glutaraldehid 2 dapat dipakai untuk
  mendesinfeksi alat-alat yang tidak dapat
  disterilkan
• Larutan glutaraldehid 2 efektif terhadap bakteri
  vegetatif seperti M. tuberculosis, fungi, dan
  virus tidak akan mati dalam waktu 10-20 menit,
  sedang spora baru akan mati setelah 10 jam.

27

• 3. Biguanid
• Zat ini sangat aktif terhadap bakteri Gram()
  maupun Gram (-)
• Contoh Klorheksidin

28

• 4. Senyawa halogen.
• Hipoklorit dan povidon-iodin adalah zat oksidasi
  dan melepaskan ion halide.

29

• 5. Fenol
• Larutan jernih, tidak mengiritasi kulit dan dapat
  digunakan untuk membersihkan alat yang
  terkontaminasi.
• Sebagian besar bakteri dapat dibunuh oleh zat ini
• Banyak digunakan di rumah sakit dan laboratorium.

30

• Klorsilenol
• Klorsilenol merupakan larutan yang tidak
  mengiritasi dan banyak digunakan sebagai
  antiseptik
• Aktifitasnya rendah terhadap banyak bakteri dan
  penggunaannya terbatas sebagai desinfektan
  (misalnya Dettol).

31

• 7. Iodophor
• Untuk mendesinfeksi permukaan
• Zat ini harus dilarutkan baru setiap hari dengan
  akuades.
• Dalam bentuk larutan, desinfektan ini tetap
  efektif namun kurang efektif bagi kain atau bahan
  plastik.

32
Teknik Aseptik

• Segala tindakan / pekerjaan harus
  mempertimbangkan sterilitas

33
Laminar flow
34
(No Transcript)
35
(No Transcript)
36
Sterilisasi MEKANIK

• Digunakan bahan rusak pemanasan
• Filter
• Macam-macam filter yang dipakai
• Berkefeld, Chamberland filter
• Soltz filter dari asbes
• Glass filter
• Cellulose membrane filter

37
MEDIA

• Ialah bahan untuk menumbuhkan mikroba
• Macam
• Padat, ditambah pemadat
• Cair, tidak ditambah pemadat
• Semi Padat, 50 pemadat
• Susunan Air, Nitrogen, Karbon, dan faktor
  pertumbuhan

38
MEDIA PEMBIAKAN MIKROBIOLOGI

• Ose (lup inokulasi) merupakan alat dasar dalam
  praktikum mikrobiologi yang terbuat dari bahan
  tertentu seperti kawat platina, namun yang lebih
  umum digunakan di laboratorium pengajaran dan
  lebih murah harganya ialah kawat nikrom
  (nichrome) dengan diameter lingkaran pada ujung
  lup berkisar antara 2 sampai 4 mm.

Ose
LUP INOKULASI
39

• Mikroorganisme dibiakkan di laboratorium pada
  medium yang terdiri dari bahan nutrient. Biasanya
  pemilihan medium yang dipakai bergantung kepada
  banyak faktor, seperti apa jenis mikroorganisme
  yang akan dibiakkan.
• Pembiakan untuk pertumbuhan bakteri agar dapat
  tetap dipertahankan harus mengandung semua zat
  makanan suasana yang diperlukan oleh organisme
  tersebut. Faktor lain seperti PH, suhu, dan
  pendinginan harus dikendalikan dengan baik.

40

• Tipe media pembiakan berdasarkan bentuk dan
  konsistensinya
• Media Padat
• Yaitu media berbentuk padat yang mengandung agar
  1-1,5, contoh Nutrient agar dan Blood Agar

NUTRIENT AGAR
BLOOD AGAR
41

• Media Cair
• Yaitu media berbentuk cair yang tidak mengandung
  agar,
• contoh Nutrient Broth
• Media Semi Padat (semisolid)
• Yaitu media yang berbentuk padat pada suhu
  dingin, dan berbentuk cir bila suhu panas,
• contoh Sulfid Indol Motility (SIM)

42

• Berdasarkan kegunaannya
• Media Umum Digunakan secara umum dimana media
  ini dapat ditumbuhi oleh berbagai jenis
  mikroorganisme baik jamur maupun bakteri. Contoh
  Media dalam Erlenmeyer

43

• Media Selektif Media ini dipakai untuk
  menyeleksi mikrorganisme sesuai dengan yang
  diinginkan, jadi hanya satu jenis mikrorganisme
  saja yang dapat tumbuh dalam media ini atau hanya
  satu kelompok tertentu saja, misalnya media
  Salmonella atau Sigella dari makanan atau bahan
  lain.
• Contoh Manitol Salt Agar (MSA)

44
(No Transcript)
45

• Media Diferensial Media ini dipergunakan untuk
  menyeleksi mikrorganisme dimana dapat ditumbuhi
  berbagai jenis mikrorganisme tapi salah satu
  diantaranya dapat memberikan ciri yang khas
  sehingga dapat dibedakan dari yang lain dan dapat
  dipisahkan.
• Contoh Mc. Conkey Agar

46

• Media Enrichment Medium ini gunanya untuk
  menumbuhkan mikrorganisme untuk keperluan
  tertentu. Dibiakkan dalam medium ini supaya
  sel-sel mikrorganisme tersebut dapat berkembang
  dengan cepat sehingga diperoleh populasi yang
  tinggi. Kompossisi medium sangat diperlukan dan
  sangat menguntungkan bagi pertumbuhan sel
  mikrorganisme yang bersangkutan.
• Contoh Selenit-F Broth

47
NUTRISI

• Adalah merupakan bahan makanan mikroba
• Terbagi menjadi 2, yaitu
• Katabolisme adalah suatu peristiwa perubahan
  senyawa kompleks menjadi senyawa yg lebih
  sederhana.
• Anabolisme (Sintaksis) adalah suatu peristiwa
  perubahan senyawa sederhana menjadi senyawa yg
  lebih kompleks.

48
Bentuk Nutrisi

• Padat, mikroba holozoik Suatu mikroorganisme yg
  mengambil makanan nya dari mikroorganisme lain
  seperti bakteri atau ganggang (alga)
• ex Halobacterium tipe holozoik
• 2. Cair, Mikroba holofitik Cara bakteri
  menghasilkan makanan dg cara melakukan
  fotosintesis disebut jg organsme Autotrof
  (bakteri yg dapat menghasilkan makanan sendiri)
• ex bakteri nitrifikasi (bakteri tanah)
• Padat dicairkan dengan enzim ekstrasel

49

1. Suhu / Temperatur
2. Pengaruh pH
3. Pengaruh Kekuatan Ion Tekanan Osmotik
4. PotensialOksidasireduksi (Eh)

Faktor Fisik
Faktor faktor yg mempengaruhi nutrisi

• Air
• Pengaruh Konsentrasi Oksigen
• Garam2 Anorganik
• Mineral
• Sumber Nitrogen
• CO2
• Faktor Pertumbuhan

Faktor Kimia
50
FAKTOR KIMIA

• Air
• Kuman memerlukan air dalam konsentrasi tinggi
  (cukup) disekitarnya karena diperlukan bagi
  pertumbuhan dan perkembangbiakannya. Air
  merupakan pengantar semua bahan gizi yang
  diperlukan sel dan untuk membuang semua zat-zat
  yang tidak diperlukan. Selain untuk melancarkan
  reaksi-reaksi metabolik, air juga merupakan
  bagian terbesar protoplasma.
• 2. Pengaruh Konsentrasi Oksigen
• Kuman Anaerob Obligat
• Hidup tanpa O2, O2 justru toksis terhadap
  golongan ini.
• Kuman Aerob Obligat
• Tumbuh subur bila ada O2 dalam jumlah besar.

51

• Kuman Anaerob Fakultatif
• mampu tumbuh baik dalam suasana
• dengan / tanpa O2.
• Kuman Anaerob Aerotoleran
• tidak mati dengan adanya O2
• Kuman Mikroaerofilik
• hanya tumbuh baik dalam tekanan O2 yang rendah.

52

• 3. Garam-garam Anorganik
• diperlukan untuk mempertahankan keadaan koloidal
  dan tekanan osmotik didalam sel, untuk memelihara
  keseimbangan asam basa, sebagai bagian dari enzim
  atau sebagai activator

53

• 4. Mineral
• belerang (sulfur) H2S, Sulfat (SO4)
• fosfor-fosfat (PO4)
• activator enzim Mg, Fe, K dan Ca.
• 5. Sumber Nitrogen
• Sumber nitrogen yang umum dipakai oleh kuman
  diambil dalam bentuk NO3, NO2, NH3, N2 dan R-NH2
  (R-radikal organik).

54

• 6. CO2
• Diperlukan dalam proses-proses sintesa.
• Berdasarkan jenis sumber C yang diperlukan kuman
  dibagi dalam 2 golongan
• Kuman Autotrof (litotrof)
• adalah kuman yang hanya memerlukan air, garam
  inorganik dan CO2 sebagai sumber C bagi
  pertumbuhannya (energi yang diperlukan diperoleh
  dari cahaya atau oksidasi bahan-bahan kimia).
• - Kuman Autotrof Fotosintetik (Fotolitotrof)
  memperoleh energi dari cahaya.
• - Kuman Autotrof Kemosintetik (Kemolitotrof)
  memperoleh energi dari oksidasi substrat
  inorganik (Fe, S, NH3, NO2 ).

55

• Kuman Heterotrof (Organitrof)
• adalah kuman yang memerlukan C dalam bentuk
  senyawa organik (karbohidrat) berupa glukosa
  untuk pertumbuhannya (semua jenis kuman ini
  patogen terhadap manusia). Energi yang diperlukan
  diperoleh dari cahaya atau oksidasi senyawa
  organik.
• - Kuman Heterotrof Fotosintetik (Fotoorganotrof)
  memperoleh energi dari cahaya.
• - Kuman Heterotrof Kemosintetik (Kemoorganotrof)
  memperoleh energi dari oksidasi senyawa organik.

56

• 7. Faktor Pertumbuhan
• Banyak kuman heterotrof tidak dapat tumbuh
  kecuali diberikan faktor-faktor pertumbuhan.
  Substansi ini dimasukan dalam perbenihan dalam
  bentuk ekstrak ragi, darah, vitamin B komplek,
  asam amino, purin dan pirimidin.

57
TERIMA KASIH....