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Caractérisation dun mutant Non pathogène de
Botrytis cinerea
UMR 217, Laboratoire de Pathologie Végétale INA /
PG - INRA - Paris VI
Projet B. cinerea Martine Boccara (Prof Paris
VI) Marie-Christine Soulié (MC Paris VI) Caroline
Kunz (MC Paris VI)
Collaborations A. PUGIN, INRA Dijon C. LEVIS,
INRA Versailles
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Obtention de mutants altérés dans leur pouvoir
pathogène
Méthode Mutagénèse insertionnelle
aléatoire (plasmide pAN7-1)
Résultats Collection de 1577 transformants 19
transformants altérés dans leur agressivité (913
testés) Un seul transformant non-pathogène A336
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Caractérisation du mutant A336
1. Phénotype in planta Non pathogène Provoque
des mini-nécroses
2. Croissance in vitro Idem Bd90 (souche
sauvage) sur différents milieux à pH 5 Réduite à
pH gt 6 Pas de conidie ni de sclérote
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Caractérisation du mutant A336 (suite)
3. Analyse moléculaire et génétique La mutation
est monogénique La mutation nest pas étiquetée
4. Analyse biochimique A336 produit peu ou pas
dacide oxalique Co-ségrégation entre le
caractère NP et l incapacité à acidifier le
milieu
5. Analyse d expression de gènes Comparaison
des EST entre A336 et Bd90 Collaboration avec
C. LEVIS, INRA Versailles
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Analyse moléculaire et génétique de la mutation
de A336
1. Southern blot Mise en évidence dune seule
insertion du plasmide pAN7-1
2. Analyse génétique de la mutation croisement
A336 X SAS405 et analyse de cinq
asques Ségrégation 11 du PP Ségrégation 11 de
l insertion de pAN7-1
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A336 est un mutant - non-pathogène -
mini-nécroses - pousse mal à pH élevé - acide
oxalique
Clonage du gène pléiotrope non étiqueté clonage
par complémentation clonage positionnel Séquen
çage du génome de B. cinerea
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Pourquoi A336 est-il non pathogène?
A336 provoque des mini-nécroses HR? Bd90
provoque une zone fluorescente à linterface
partie saine - macération HR?
Govrin et Levine 2000 B. cinerea déclenche une
réaction dhypersensibilité (mort cellulaire) ce
qui facilite la colonisation de la plante. Le
champignon nécrotrophe se sert du mécanisme de
défense de la plante pour être pathogène.
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Hypothèse La HR produite lors de  linteraction
entre A336 et son hôte est efficace pour stopper
la maladie
A336 ne peut plus se protéger contre les AOS (à
vérifier)
HR
in vitro A336 produit une activité élicitrice
comme Bd90 en collaboration avec A. PUGIN et
B. POINSSOT, INRA Dijon
Acide oxalique supprime le burst oxydatif