Actualit

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Actualités virologiques des tests de dépistage
VIH

• Séminaire Départemental sur le dépistage de
  linfection à VIH dans les Alpes-maritimes
• 26 Novembre 2007

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Évolution de la situation
IP début des HAART
AZT
Inhibiteur de fusion
Autres inhibiteurs De RT
Anti Intégrases
Anti CCR5
1985
1996
2007
gt 73 décès
gt 65 survivants
Début du dépistage Pas de traitement Intérêt
prévention
Avec lévolution des traitements et des
techniques Intérêt individuel par une prise en
charge précoce
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Évolution de la situation

• Le cadre du dépistage a été organisé
• pour apporter un soutien lors du rendu du
  résultat
• pour délivrer des messages de prévention
• Counseling avant et après la réalisation du test
• Faut- il changer le paradigme du dépistage ?

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Pour mémoire

• Des succès
• Sécurité transfusionnelle
• Prévention de la transmission mère-enfant
• Prévention de la transmission du VIH au cours des
  soins
• Prévention de la transmission par partage de
  matériel dinjection parmi les usagers de drogue
• Mais
• Risque dun  optimisme thérapeutique 
  conduisant à un relâchement de la prévention
• Augmentation des pratiques sexuelles à risque
  chez les homosexuels
• Retard au dépistage

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Accès aux soins et au dépistage
Année de diagnostic du SIDA
Source INVS 31/12/2006
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Surveillance virologique liée à la déclaration
obligatoire de séropositivité
F. Barin
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Etat des lieux du dépistage au laboratoire

• Techniques disponibles
• Réalisation du dépistage

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Techniques disponibles au laboratoire

• Tests de dépistage ELISA
• Test de confirmation Western Blot
• ou test apparenté (immunoblot)
• Tests rapides

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Technique ELISA

• Méthode Immunoenzymatique permet la mise en
  évidence des anticorps spécifiques anti-VIH
  présents dans le sang périphérique
• Prélèvement sérum
• Durée de la technique 30mn à 2h.30 selon les
  techniques
• Technique en microplaque automatisable ou sur
  automate gérable en  unitaire 
• Lecture des résultats mesure spectrophotométriqu
  e
• Plusieurs générations de tests ELISA
• 1 génération lysat viral purifié
• 2 et 3 générations protéines recombinantes ou
  de synthèse
• Meilleure spécificité
• 4 génération détection combinée de lAntigène
  P24
• protéine du HIV1 correspondant aux particules
  et aux protéines virales libres présentes dans le
  sang périphérique

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Plaque ELISA
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Automate de sérologie
 Architect 
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Performances des tests ELISA homologués

• Détectent les AC anti-VIH1 et anti-VIH2
• Les antigènes utilisés pour fabriquer ces tests
  sont les plus représentatifs possibles de
  lensemble des souches virales en circulation
• Très bonne sensibilité 100 chez les sujets en
  phase chronique dinfection
• Spécificité 98,75 à 99,75
• toute technique ELISA peut produire des
  réactions faussement positives

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Tests rapides

• Tests immunologiques à lecture visuelle
  réalisables sans appareillage sophistiqué
• Prélèvement sérum, plasma, sang total
• test rapide sur la salive sensibilité moins
  bonne
• Réponse en 15 à 35 mn
• Détectent les Anticorps anti-VIH1 et anti-VIH2
• Réactions non spécifiques possibles, dues à
  dautres facteurs que linfection VIH
• Moindre sensibilité que les tests ELISA au moment
  de la primo-infection

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Tests rapides
Bande témoin de la réaction
Bande HIV
Test Détermine
Négatif Positif
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Test de confirmation

• Confirme la spécificité antigénique des anticorps
  détectés en ELISA
• Le test utilisé classiquement est le Western Blot
• On peut également utiliser un immunoblot avec des
  protéines recombinantes et des peptides
  synthétiques
• Bandelette de nitrocellulose sur laquelle les
  principaux antigènes viraux sont séparés et
  disposés en bande
• Lorsque les AC correspondants sont présents dans
  le sérum réaction Ag/Ac et visualisation de la
  bande
• Des critères de positivité ont été définis (OMS)
  

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Western Blot
HIV2
HIV1
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Immunoblot pouvant remplacer le Western Blot
Test de confirmation et de différenciation HIV1
HIV2
Bandes témoins de la réaction
Bandes spécifiques du VIH1
Bandes spécifiques du VIH2
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Etat des lieux du dépistage au laboratoire

• Techniques disponibles
• Réalisation du dépistage

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Évolution des marqueurs virologiques au cours de
la primo-infection
Anticorps
ARN plasmatique
Seuil de détection des marqueurs
Antigène P24
J0 (contage)
Temps en jours
J12
J14-15
J20-21
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Délai de positivité des différentes techniques
J25-26 AC anti VIH par immunoblot
par test rapide
J 20-21 AC antiVIH par ELISA
ELISA 4 génération
J15-16 pic dAg P24
J12-14 ARN plasmatique Charge Virale
par technique de Biologie moléculaire
Fenêtre silencieuse
J0 contage
temps
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SOMMAIRE
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Diagnostic dinfection VIH chez ladulte

• Consentement obligatoire, confidentialité absolue
• Résultat rendu par un médecin recommandé
• Première étape dépistage
• 2 tests effectués en parallèle au moins un des
  2 doit être un ELISA
• ELISA de 4 génération les plus couramment
  utilisés
• Détection des AC anti-VIH1, anti-VIH2 et de
  lAntigène P24
• En cas de résultat positif ou discordant des 2
  tests
• Deuxième étape test de confirmation

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Au total
2 TESTS (dont au moins 1 ELISA AC
Ag) Négatifs Positifs ou discordants Résultat
test de confirmation Immunoblot Négatif
positif indéterminé
séropositivité probable -
Contrôle sur un 2 prélèvement 15 jours
plus tard confirmation sur 2
prélèvement 2 tests ELISA - Charge
virale si suspicion de primoinfection

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Place de la Charge Virale dans le dépistage

• Diagnostic moléculaire en transfusion sanguine
• Charge Virale et DNA proviral pour le diagnostic
  chez lenfant né de mère séro-positive
• Pas dutilisation de techniques de Charge Virale
  pour le diagnostic dinfection VIH chez ladulte
• Sauf cas particuliers de suspicion de
  primo-infection
• (après discussions avec le médecin prescripteur)

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Pratique des tests de dépistage à réévaluer
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Pratique des tests de dépistage à réévaluer

• Structures où réaliser le dépistage ?
• Un seul test de dépistage ?
• Tests rapides
• Doivent être évalués surtout pour une utilisation
  comme test unique
• Encadrement
• Un test de dépistage positif doit être confirmé
  par un Western Blot
• Détermination sur un nouveau prélèvement

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Le problème particulier des auto-tests

• Utilisation des tests rapides nentraîne pas
  lapprobation de leur utilisation en auto-test
  ( home-tests )
• Home-Tests
• Tests par auto-prélèvement à domicile et analyse
  en laboratoire
• Tests par auto-prélèvement à domicile et
  auto-analyse à domicile
• Problèmes liés à lutilisation de home-tests
  (auto-analyse)
• Erreurs de manipulation
• Solitude face au résultat
• Manque dexplication du résultat
• Démarche de soins
• Données épidémiologiques
• Risques de dérives ?
• Mais les auto-tests existent et sont achetables
  sur Internet.

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Le problème particulier des auto-tests
21.95 Euros
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Au total, le point de vue du virologue sur
lévolution de la pratique du dépistage

• Limites de la stratégie actuelle
• Il doit y avoir une évolution
• Mais.
• Encadrement reste nécessaire
• Évaluer les tests rapides surtout pour une
  utilisation comme test unique de dépistage
• Les tests rapides sont moins sensibles que
  lELISA en période de primo-infection
• Un test de confirmation par Immunoblot est
  nécessaire en cas de test de dépistage positif
• Test sur un nouveau prélèvement