LABORATORIO Y DIAGN

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LABORATORIO Y DIAGNÓSTICO EN VIH

• DRA. SILVIA ARREDONDO D.
• MEDICO INMUNOLOGO-CLINICO
• HOSPITAL REGIONAL DE TALCA

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VIH

• El VIH es un virus de la familia de los
  lentivirus.
• Existen dos tipos de virus VIH-1 y VIH-2, que son
  muy similares pero tienen diferencias genéticas.
• Se ha demostrado que son virus altamente
  complejos tanto a nivel estructural como en su
  evolución.
• Los VIH-1 se clasifican en tres grupos distintos
  (M,N,O), el más importante es el grupo M que se
  subdivide en 9 subtipos de la A a la K. En
  América del Norte, Central y Sudamérica predomina
  el grupo B.
• La variabilidad de estos virus se expresa en
  nuevas formas recombinantes que pueden generar
  una mayor resistencia a la TARV.

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VIH
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GENERALIDADES

• El diagnóstico de la infección VIH, sólo puede
  establecerse mediante análisis por métodos de
  laboratorio.
• Los exámenes orientados a establecer el
  diagnóstico se pueden clasificar en métodos
  indirectos y directos.
• Desde punto de vista del seguimiento y del
  pronóstico de la infección VIH, y del SIDA,
  también es necesario el apoyo del laboratorio.
• El laboratorio también es de gran utilidad en el
  diagnóstico de enfermedades oportunistas que
  presentan los portadores de VIH.

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(No Transcript)
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PRUEBAS SEROLOGICAS

• Detección de anticuerpos anti VIH-1, su
  presencia reflejan estado de portación actual.
• Se realiza mediante pruebas de screening, las que
  si resultan positivas luego son confirmadas por
  test de mayor especificidad.
• La seropositividad se define mediante la
  reactividad repetida a las pruebas de screening
  (2 TEST positivos) confirmados posteriormente con
  una prueba confirmatoria.

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TEST DE SCREENING Y CONFIRMACIÓN
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TEST DE SCREENING

• El método más utilizado es el enzimoinmunoanálisis
  (EIA), existiendo técnicas de primera , segunda
  y tercera generación dependiendo del origen de
  los antígenos virales.
• Sensibilidad de las técnicas actuales alcanza un
  99 .
• Los EIA de tercera generación son los utilizados
  en la actualidad por su mayor sensibilidad y
  especificidad.
• Existen también pruebas de detección rápida
  basadas en principios de aglutinación y las de
  inmunoadherencia (dot-blot), siendo menos
  especificas que las anteriores.
• En la actualidad además se dispone de kit que
  permiten detectar ambos tipos de virus VIH (1 y
  2).

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TEST CONFIRMATORIOS

• El Western blot es el más utilizado en la
  confirmación de los resultados obtenidos por
  screening.
• El WB, permite distinguir contra que antígenos
  virales se dirigen los anticuerpos de la muestra
  a estudiar.
• Existen diversos criterios de positividad de
  acuerdo a diferentes instituciones que los han
  definido, la OMS en reunión de expertos en 1990
  recomendó la presencia de al menos 2 bandas de la
  envoltura .El resto de los patrones se considera
  indeterminado.
• Las limitaciones del WB son la complejidad de la
  técnica, su alto costo, la necesidad de personal
  altamente especializado. Además la variabilidad
  de la reactividad de las bandas (
  gp160,gp120,p24, p17 y la gp41). También existe
  diferente valor predictivo diagnóstico la
  existencia de las diferentes bandas. Las bandas
  de proteínas de la envoltura son las más
  especificas con bajo de falsos ()

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CAUSAS DE WB INDETERMINADO PARA VIH-1

• Infección por VIH-2.
• Seroconversión para el VIH-1.
• Pacientes en estadios muy avanzados de la
  enfermedad.
• Niños nacidos de madres seropositivas.
• Individuos africanos infectados.
• Reactividad inespecífica.

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PRUEBAS SUPLEMENTARIAS

• Inmunoanálisis de tipo lineal (LIA).
• RIPA.
• Antigenemia (medición de p24), que permite el
  diagnóstico durante la primoinfección, en hijos
  de madres VIH(), monitorización de respuesta a
  TARV en algunos portadores, identificación de
  individuos seropositivos con elevada
  infectividad.
• Cultivo viral.
• PCR (detección de ácidos nucleicos ).

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CAUSAS DE PCR () EN INDIVIDUOS SERONEGATIVOS
PARA VIH

• Período de ventana antes de la seroconversión.
• Contaminación de laboratorio.
• Secuencias exógenos de tipo retroviral.
• Secuencias endógenas retrovirales o no.
• Hipogamaglobulinemia.
• Infección por virus defectivos o incompletos.
• Infecciones por variantes poco o no replicativas.
• Serorreversión por disfunciones en el sistema
  inmunitario.

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CAUSAS DE PCR (-) EN INDIVIDUOS SEROPOSITIVOS
PARA EL VIH

• Transmisión pasiva ( materno-fetal,
  transfusiones, etc.)
• Mutaciones críticas en la región analizada.
• Presencia errática de la secuencia estudiada.
• Baja sensibilidad de la prueba.
• Error técnico.
• Anticuerpos con reactividad cruzada en pacientes
  con LES, FQ, post vacuna antiinfluenza (sólo en
  estos casos no hay infección VIH).

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ALGORITMO DE DIAGNÓSTICO DE INFECCIÓN VIH EN
INDIVIDUOS SIN RIESGO
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ALGORITMO DE DIAGNÓSTICO DE INFECCIÓN VIH EN
INDIVIDUOS CON RIESGO
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EL LABORATORIO EN EL SEGUIMIENTO Y PRÓNOSTICO DE
LA INFECCIÓN VIH

• Existen exámenes específicos para establecer el
  pronóstico y clasificación de los pacientes VIH
  (), (Carga viral y recuento de LTCD4()) y
  otros que se solicitan en la primera consulta que
  serán de utilidad en el seguimiento del paciente
  y de las enfermedades oportunistas que puedan
  aparecer (que se listan a continuación)
• Los exámenes generales nos permiten conocer la
  situación basal del paciente en relación a otras
  infecciones latentes, dislipidemias,
  alteraciones metabólicas, cáncer, etc..

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PRUEBAS COMPLEMENTARIAS QUE DEBEN REALIZARSE A
PACIENTES VIH()
HEMOGRAMA Y VHS SI 3-6 MESES 2 A 3 MESES
PERFIL BIOQUIMICO SI 3 A 6 MESES 2ª 3 MESES
PERFIL LIPIDICO SI 3 A 6 MESES 2 A 3 MESES
ACIDO ÚRICO SI 3 A 6 MESE 2 A 3 MESES
AMILASA Y LIPASA SI 3 A 6 MESES 2 A 3 MESES
ORINA COMPLETA SI 3 A 6 MESES 2 A 3 MESES
RX TORAX SI SP SP
ECG SI SP SP
PPD IDEAL SI SP SP
SER. VIRUS HEPATITIS B Y C SI NO NO
SER. TOXOPLASMA GONDII SI SP SP
SER. CMV. SI SP SP
VDRL SI SP SP
PSD SI SP SP
COPROCULTIVO SI SP SP
LT CD4() SI 3-6 MESES 2-3 MESES
CARGA VIRAL VIH SI 3-6 MESES 2-3 MESES
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LT CD4 ()

• La cifra de LTCD4() de sangre periférica
  corresponde aproximadamente a un 2 de los LT CD4
  () totales.
• Varían durante el día, y día a día, la
  variabilidad usando métodos automatizados es de
  un 2 a 5 .
• Se utiliza actualmente para su determinación la
  citometría de flujo (FACS).
• Los errores se originan por la demora en el
  procesamiento y tienden a aumentar por unión
  inespecífica de los anticuerpos en las muestras
  congeladas.
• Se requieren a lo menos 2 determinaciones de
  LTCD4() si se debe tomar una decisión
  terapéutica en los portadores y para su
  clasificación.

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SITUACIONES QUE ORIGINAN ALTERACIÓN EN LOS
LTCD4()

• Ejercicio intenso ? LTCD4().
• Variaciones diurnas aumenta en 50-150 células en
  el día.
• Tabaquismo ? por efecto de la nicotina.
• Corticoides ? linfocitos totales y CD4().
• Bazo aumenta en pacientes esplenectomizados,
• en los cirróticos con hipertensión portal
  disminuyen.
• En las mujeres embarazadas disminuyen los
  LTCD4() en el tercer trimestre.
• En los procesos inflamatorios agudos sean o no
  infecciosos disminuyen los CD4().

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CARGA VIRAL

• Consiste en la detección por medio de la
  amplificación de las secuencias de ácidos
  nucleicos del ARN del VIH.
• Se logra su detección gracias al avance que ha
  experimentado la biología molecular.
• Su detección ha permitido demostrar la
  modificación que realiza la TARV sobre la
  historia natural de la infección VIH.
• Depende del método empleado y la capacidad de
  detectar mínimas cantidades de ARN del virus.
• Se expresa en copias de ARNv /ml .
• Posee las principales características se un buen
  marcados de laboratorio Sensibilidad,
  especificidad, valor predictivo positivo y
  negativo y reproducibilidad.

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PROPIEDADES DE LA CARGA VIRAL

• La CV plasmática es la resultante del equilibrio
  dinámico entre los distintos compartimientos
  virales.
• El descenso de la CV luego del inicio de la TARV
  consta de tres fases ( LTCD4() infectados
  productivos), (macrófagos tisulares, y otros
  reservorios del virus)(incierto).
• Son reproducibles.
• No existe equivalencia directa entre los
  diferentes métodos utilizados comercialmente.

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INDICACIONES CLINICAS Y USO DE CV
INDICACIÓN CLÍNICA INFORMACIÓN USO
SD. Compatible con infección aguda VIH Establece el diagnóstico cuando la prueba de anticuerpos es negativa o indeterminada Diagnóstico
Valoración inicial de una infección VIH recientemente diagnosticada CV basal Apoya decisión en conjunto con CD4() de iniciar o no tratamiento
Control de pacientes VIH() sin TARV Cambios de la carga viral ídem
Luego de 4 semanas del inicio o cambio de TARV Valoración inicial de eficacia de TARV Decisión de continuar o cambiar esquema
Control c/3-4 meses en pacientes con TARV Duración del efecto antiretroviral Decisión de continuar o cambiar TARV
Acontecimientos clínicos o disminución significativa de LTCD4() Asociación con CV variable o inestable ídem
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muchas gracias