Nespecifick

1
Nespecifické složky bunecné imunity

• M.Prucha

2
Nespecifická imunita

• Vzájemná provázanost nespecifické prirozené a
  adaptivní specifické imunity
• Lymfatické orgány a tkáne
• Imunokompetentní bunky

3
Nespecifická imunita bunecná

• Fagocytující bunky (PMN a monocyty/makrofágy
• NK bunky Natural Killers
• Uplatnení virové, parazitární a plísnové
  infekce, protinádorová imunita
• Transplantace odvržení štepu hostitelem

4
Fagocytující bunky
5
Fagocytující bunky

• Schopnost fagocytózy
• Komplexní proces
• Chemotaxe, rozpoznání, pohlcení, zpracování,
  usmrcení a produkce látek s dalším pusobením

6
Technické vybavení fagocytu

• Adhezivní molekuly
• Receptory
• Enzymatický systém
• Cytoplasmatická granula s enzymatickou aktivitou
• Proteolytické enzymy

7
Fagocytóza a zánet

• Fagocytóza jako soucást komplexního procesu
  zánetu
• Zánet primárne kompenzacní fyziologický
  mechanismus
• Uvolnení kyslíkových radikálu a enzymu z granulí
• Poškozování okolních tkání

8
Fagocytóza a zánet

• Produkce zánetlivých mediátoru produktu
  metabolismu kys. arachidonové
• Prostaglandiny, leukotrieny, tromboxany
• Stimulace a regulace rozsahu a intenzity zánetu

9
LPS
Bakteriální lipopeptidy
LBP CD14
Bakteriální peptidoglykany
TLR4
TLR6
MYD88
TLR2
CpG motiv
TLR2
IRAK TRAF6 NIK IKK 1kB NFkB
Glykoproteiny parazitu
TLR9
DNA
Receptory pro komplement
Jádro
MHC II
IL-1, IL-12, TNF
B7, CD40
IL-6
10
Monocyto-makrofágový systém

• Monocyty a tkánové makrofágy, dendritické bunky
• Diferenciace monocytu na tkánové makrofágy a
  dendritické bunky
• Tkánová specificita makrofágu Langerhansovy bb-
  kuže, Kupfferovy bunky v játrech, plíce
  alveolární makrofágy, oligodendroglie

11
Monocyto-makrofágový systém

• Funkce zpracování a predkládání antigenu
  lymfocytum
• Nezbytný predpoklad k vyvolání specifické
  imunitní odpovedi
• Aktivace monocytu produkce cytokinu (aktivace
  specifických složek imunity a zprostredkování
  celkové reakce organismu IL-1, IL-6, TNF

12
Polymorfonukleáry

• Polocas rozpadu 12 hodin, množství 3-8x109/L
• Fagocytují neutrofily a eosinofily
• Neutrofily zastoupení v periferní krvi
  40-60, eo cca 3
• Reakce na insult vyplavování bunek
• Poškození vlastní tkáne

13
NK bunky

• Prirození zabíjeci
• CD 16/56, 5-20 lymfoidních bunek
• Hrubá granula v cytoplasme
• Protinádorová imunita, protivirová imunita
• Regulace zánetlivé odpovedi
• Perforiny

14
NK bunky

• Cytotoxická aktivita NK bunek
• Membránové interakce receptory NK a tercových
  bunek
• Solubilní faktory uvolnované z cytoplasmatických
  granulí
• Aktivita je zesilována pusobením cytokinu (IL-2)

15
Mastocyty

• Reakce na velice ruznorodé podnety fyzikální,
  chemické
• Lokalizace prevážne v podsliznicní tkáni
• Interakce membránových receptoru
• Aktivace pomocí IgE protilátek, toxiny baktérií,
  LPS, C systém

16
Mastocyty

• Uvolnování prozánetlivých cytokinu TNF
• Granula obsahují serotonin, histamin, kininy
• Po aktivaci produkce metabolitu kys. arachidonové
  leukotrieny, prostaglandiny

17
Bazofilní leukocyty

• Cirkulace v krevním recišti
• Obdobné vlastnosti mastocytum a stejné mechanismy
  aktivace
• Efektorové bunky casné fáze alergické reakce I.
  typu
• Exprese receptoru pro Fc fragment IgE

18
Erytrocyty

• Hlavní fyziologická úloha doprava O2
• Nemá bunecné jádro, není schopen syntézy DNA,
  RNA,proteinu, lipidu
• Vstupní brána virových a parazitárních patogenu
• Vysoký pocet prevyšuje pocet bunek
  imunokompetetních
• Velmi pestrý repertoiar povrchových molekul

19
Erytrocyty - funkce

• Vychytávání komplexu antigen-protilátka
• Neutralizace chemokinu, zpomalení pohybu
  leukocytu v kapilárách, zvyšování jejich adheze
  na endotel
• Povrchové molekuly jsou receptory pro infekcní
  agens -
• Umožnují ukrývání infekcních agens pred výkonnými
  složkami imunity -
• Hemoglobin je zdrojem Fe pro bakterie -

20
Trombocyty

• Nejmenší krevní element
• Diferenciace z megakaryocytu
• Množství 150-320x109/L
• Zapojení do procesu homeostázy, , zánetlivé
  reakce
• Vyzrávání prostrednictvím cytokinu

21
Trombocyty

• Vnitrní výbava aktin a myosin
• Dva druhy sekrecních granulí
• Sekrecní produkce ADP a Ca
• Alfa granula von Willebranduv faktor
• Funkce krevní hemostáza, zánet
• Obrovské množství membránových molekul s
  adhézními vlastnostmi

22
Trombocyty funkce

• Homeostáza
• Adherence na poškozenou cévní stenu
• Tvorba trombu
• Adheze a agregace (receptory pro kolagen)
• Zánet terminální fáze zánetu uvolnování
  biologicky aktivních látek
• Aktivace bunecné složky zánetu

23
Fibroblasty

• Patrí mezi nejpocetnejší bunecné elementy
• Vysoce aktivní bunky
• Produkce proteolytických metaloproteináz a jejich
  inhibitoru
• Úloha v regulaci zánetlivé odpovedi
• TGFß stimuluje aktivitu fibroblastu
• Modulace proliferace a produkce mezibunecné hmoty

24
Fibroblasty proteinázy a jejich inhibitory

• Serinové proteinázy (neutrofilní elastáza,
  proteináza3, katepsin, tryptáza
• Inhibitori serinových proteináz alfa1 AT, alfa2
  makroglobulni
• Cysteinové proteinázy katepsiny B,H,C,L,S,K
• Inhibitori cysteinových proteináz - cystatiny

25
Fibroblasty proteinázy a jejich inhibitory

• Matrixové metaloproteinázy kolagenázy,
  gelatinázy, matrixin, membránové MMP
• Tkánové inhibitory matrixových metaloproteináz
• Kaspázy 1-12 (klícové složky apoptózy)
• Úloha v obranném zánetu
• Úloha v poškozujícím zánetu autoimunitní onem
  RA, RS

26
Cytotoxicita NK bunek

• Metodologická nárocnost
• Stanovení pomocí radioaktivne znaceného chromu
• Neradioaktivní metody kolorimetrické a
  mikroskopické nebo cytometrické metody

27
NK bunky cytotoxický test

• Cytotoxický test založený na uvolnování 51Cr
• Indukce NK bunek IL-2
• Príprava vhodné cílové bunky bunka infikovaná
  nebo nádorove zmenená
• Cílové bunky jsou kultivovány s Cr, který vstoupí
  do bunky
• Konstantní množství cílových bunek je pak
  inkubováno s populací efektorových bunek- NK
• Po 6 hodinách jsou odebrány vzorky a stanovena
  aktivita gama zárení

28
NK bunky cytotoxický test

• Musí být laborator schválená pro skladování a
  práci s radioaktivními látkami
• Vysoké nároky na pracnost, sterilitu prostor

29
NK bunky cytotoxický test

• Klinické aplikace
• Defekty v systému perforin/granzym B
• Herpetické infekce EBV
• Použití nesrážlivé krve a separované periferní
  mononukleární bunky
• Výzkum protiinfekcní a protinádorová imunita

30
Bazofilní leukocyty

• Cirkulace v krevním recišti
• Obdobné vlastnosti mastocytum a stejné mechanismy
  aktivace
• Efektorové bunky casné fáze alergické reakce I.
  typu
• Exprese receptoru pro Fc fragment IgE

31
Bazofily funkcní testy

• Precitlivelost na hmyzí jedy, potraviny,
  antibiotika
• Pri premostení 2 sousedních molekul IgE alergenem
  dochází k aktivaci bazofilu
• Exprese povrchového receptoru CD63 na bunecné
  membráne
• Prutoková cytometrie BAT basophil activation
  test
• CAST analýza mediátoru uvolnených procesem
  degranulace

32
Bazofily funkcní test

• Princip inkubace plné krve pacienta se susp.
  Alergenem, pozit. a negat. ko (anti IgE)
• Po inkubaci a lýze erytrocytu je merení provedeno
  pomocí prutokového cytometru nebo se stanoví
  koncentrace uvolnených mediátoru
• Dobrá klinická vypovídavost
• Rozhodování o dalším prubehu SIT

33
Eosinofily

• ECP eosinofilní kationický protein
• Granulární protein eosinofilu
• Marker aktivace eosinofilu
• Korelace se stupnem zánetu
• ECP je toxický pro parazity, zpomaluje krevní
  srážlivost
• Metoda stanovení chemiluminiscence