Vectores y su Origen

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Vectores y su Origen

• Plásmidos

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Qué es un Plásmido?

• El plásmido es una molécula circular de DNA que
  tiene una existencia independiente en la célula.
• Los plásmidos son muy abundantes en las
  bacterias, y mas escasos en las células
  eukariotas.
• Llevan en su seno varios genes, a menudo
  responsables de carácterísticas útiles para la
  célula. Por ejemplo, la capacidad para soportar
  concentraciones tóxicas de un antibiótico, como
  el cloranfenicol o la ampicilina.
• Estos genes se emplean para seleccionar aquellas
  células que tienen un plásmido de las que no lo
  tienen.
• La mayoría de los plásmidos tienen una secuencia
  que sirve como orígen de replicación. Esto le
  permite replicarse independientemente.
• Los plásmidos mas pequeños emplean la maquinaria
  celular para su duplicación y mantenimiento.
• Otros son capaces de integrarse en el cromosoma
  principal durante generaciones (episomas). Luego
  se pueden volver a escindir.

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Tamaño y número de copia

• El tamaño de un plásmido es variable. Pueden
  tener desde 1 kb hasta 250kb.
• Como vector, es deseable que su tamaño no
  sobrepase 10kb.
• Ejemplos
• PUC8 2,1kb E. coli
• ColE1 6,4kb E. coli
• F 95 E. coli

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Conjugación

• Los plasmidos se pueden clasificar en dos grupos
  conjugativos y no conjugativos.
• Los conjugativos tienen la capacidad de promover
  la conjugación.
• El plásmido F de E.coli es capaz de integrarse en
  el cromosoma. Cuando la conjugación tiene lugar
  en esta situación, parte del cromosoma se
  transfiere a la cepa F-. Ver animación.
• Solo los plásmidos conjugativos tienen la
  capacidad de ser transferidos en la conjugación.
  A veces, en presencia de un plásmido conjugativo,
  otro plásmido puede transferirse.

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Compatibilidad

• Plásmidos distintos pueden encontrarse en una
  misma célula. En E. coli se han descrito hasta
  siete tipos distintos coexistiendo en una célula.
• Sin embargo, para ello, tienen que ser
  compatibles. Algunos plásmidos se pierden
  rápidamente en presencia de otros, y por tanto,
  hay una serie de grupos de incompatibilidad.
• Las bases de la incompatibilidad no se entienden
  bien, pero parecen tener que ver con la
  replicación.