ODRE

1
ODREÐIVANJE SLOBODNIH LAKIH LANACA U SERUMU I
URINU

• Danica Matišic

2
KROHEM SKUPINAPododbor za laboratorijsku
hematologiju i morfologijuIMUNOKEMIJA D.
Matišic, V. Preden-Kerekovic
Ako na elektroforetskoj slici, najmanje 100x
ugušcenog urina, ne nalazimo suspektnu
monoklonsku vrpcu nalaz BJP smatramo negativnim
DIJAGNOSTICKI ALGORITAM ZA DEFINICIJU
MONOKLONSKOG PROTEINA
3
A.R. Bradwell Free Light Chain Assay
Razvoj Free Light Chain reagensa za kvantitativno
odredivanje slobodnih lakih lanaca, SLL, kapa (?)
ili lambda (?) tipa, otvorio je mogucnost
njihovih aplikacija i povecao njihovu klinicku
važnost.
Refer. interv. SLL ? Refer. interv. SLL ? Refer. interv. ?/?
SERUM 3,30 19,40 5,71 26,3 0,26 1,65
URIN 1,35 24,19 0,24 6,66 2,04 10,37
4
B koncentracija lakih lanaca u serumu kod
zdravih ispitanika,bolesnika sa NSMM i MMLL kapa
i lambda tipa
A
B
Osjetljivost SPE
Osjetljivost IF
A koncentracija lakih lanaca u serumu kod
zdravih ispitanika,bubrežnih bolesnika i
bolesnika sa MMLL kapa i lambda tipa
5
Serum Free Light Chain Measurements Move to
Center StageArthur R. Bradwell (Clinical
Chemistry. 200551805-807.)

• serumska konc.SLL korelira samo s aktivnošcu
  koštane srži, što znaci da njihov nalaz može biti
  neovisan biljeg monoklonskih gamapatija
• jedan posebno važan aspekt SLL je njihov kratak
  poluživot
• 2-3 sata za kapu i 56 sati za lambdu
• što je 150 x krace vrijeme od 21 dana koliko je
  poluživot IgG molekule
• tako konc. slobodnih lakih lanaca omogucuje vrlo
  brzo procjenu ucinka
• kemoterapije 92-128 dana brže nego konc. M Ig

bolesnici koji su prema nalazu intaktnog M Ig, u
remisiji mogu još uvijek imati povišenu konc.
SLL što indicira ostatnu bolest koristeci isti
argument, bolesnici cija konc SLL pocinje rasti
nakon modernog intenzivnog tretmana ide u prilog
relapsu bolesti
6
FREELITE Serum - Free Light Chain Assays

• Kvantitativno mjerenj SLL pokazuje da abnormalnu
  koncentraciju
• lakih lanaca ili njihov omjer
• imaju 96 bolesnika s IIMM
• 82 bolesnika s NSMM
• 98 sa AL amiloidozom
• svi s LCMM i LCDD
• Kvantitativno mjerenje SLL može pomoci u
  postavljanju
• Dijagnoze kod LCMM, NSMM, AL amiloidoza, LCDD,
  Waldenström
• makroglobulinemije kao i za
• Pracenje terapije i toka same bolesti kod
• IIMM, LCMM, NSMM, AL amiloidoza,
  LCDD, Waldenström
• makroglobulinemije kao i pracenje
• minimalne rezidualne bolesti u
  mnogih bolesnika s MM
• koji su bili u kompletnoj remisiji
  prema standarnim testovima

7

• Odredivanje konc SLL ima posebnu ulogu u
  dijgnoastici AL amiloidoze
• s obzirom da su izvor fibrila monokl. SLL
• Njihova je konc. nedostatna da bi se registrirala
  elektroforezom
• Katzmann i suradnici su pokazali da odred. konc.
  SLL u kombinaciji s IF
• omogucuje postavljanje dijagnoze AL amiloidoze
• kombinacijom odredivanja SLL i IF u grupi od 110
  bolesnika
• oni su pravilno dijagnosticirali 109 (99 )
• Koristeci samo konc. SLL pravilno je
  dijagnosticirano 91
• Novi internacionalni konsenzus za vodenje AL
  amiloidoze ukljucuje
• mjerenje konc. SLL

8
Koncentracija slobodnih lakih lanaca Ig ovisi o
produkciji plazma stanica i bubrežnom klirensu.

• Kod nekih bolesnika s monoklonskom gamapatijom
  kolicina SLL ostaje ispod reapsorpcionog
  kapaciteta bubrega tako ce abnormalna konc.
  serumskih SLL biti nedetektibilna u urinu
• u tim slucajevima rezultat SLL u urinu biti ce
  nepouzdan
• Katzmann JA. i Hill P.G. pokazali su na velikom
  broju bolesnika, u dvije odvojene studije, da
  zbog oštecenja bubrega (približno 25 bolesnika
  s monoklonskim gamapatijama) možemo naci
• lažno pozitivne nalaze SLL u serumu odnosno lažno
  negativne u urinu.
• Uz poliklonsku sintezu imunoglobulina i/ili
  bubrežnog oštecenja, naci cemo 10 20x povecanu
  sintezu lakih lanaca u serumu
• Bubrežna ekskrecija SLL raste s koncentracijom u
  serumu ali
• znacajno opada kada je visoka koncentracija
  kombinirana
• s bubrežnim oštecenjem.

9
Skupljanje 24 satnog urina je mukotrpno za
bolesnike i uglavnom netocno

• -laboratorijski postupak evaluacije monoklonskog
  proteina se znatno produljuje
• Stoga mnogi klinicari sugeriraju da se 24 satni
  urin eliminira iz skriniga M-P
• Urin ce se obradivati diskontinuirano tj. kod
  raznih disproteinemija kao i i za pracenje
  bolesti jednom kad je vec monoklonski protein
  identificiran.

10
Mjesecne novine Medicinskog laboratorija Mayo
klinike (Communique)august/ 2007

• 1. Kvantitativno mjerenje SLL uz SPE i IE
  postiže se veca osjetljivost u
• dijagnostici monoklonskih gamapatija što
  je posebno važno kod
• MMLL, AL amiloidoza, LLDD, NSMM
• 2. Primjenjujuci 87997 Monoclonal Protein
  Study, Expanded Panel, Serum,
• (ukupni prot., SPE , kapa i lambda u serumu
  i ?? omjer)
• eliminiramo potrebu sakupljanja 24 satnog
  urina
• 3. Odredivanjem SLL moguce je razluciti
• visoko i nisko rizicne bolesnike u skupini
  MGUS bolesnici s abnormalnim ??
• omjerom imaju 2,5 x povecan rizik od
  progresije bolesti u MM ili slicne bolesti
• za vecinu MGUS bolesnika preporuca se
  laboratorijska obrada jednom godišnje
• kako približno 40 MGUS dijagnosticiranih
  bolesnika spada u nisko rizicne,

11
KROHEM SKUPINAPododbor za laboratorijsku
hematologiju i morfologijuIMUNOKEMIJA D.
Matišic, V. Preden-Kerekovic
Elektroforeza serumskih proteina
Vizualni pregled
Klinicka sumnja ili prisutnost monoklonske vrpce
Bez promjena
Bence Jones protein?
Imunofiksacija i/ili imunoelektroforeza
FREELITE SLL?, SLL? ?/?
Definicija M-P (odred. razreda i tipa)
Denzitometrijska kvantifikacija M-P
Elektroforeza proteina u mokraci (100 x ukonc.
uzorak)
Ako na elektroforetskoj slici, najmanje 100x
ugušcenog urina, ne nalazimo suspektnu
monoklonsku vrpcu nalaz BJP smatramo negativnim
Negativ. nalaz
Prisutan BJ protein
Opisni nalaz klinicka informacija
daju tumacenje nalaza
Imunofiksacija i/ili imunoelektroforeza
DIJAGNOSTICKI ALGORITAM ZA DEFINICIJU
MONOKLONSKOG PROTEINA
12
Hill PG, Forsyth JM, Rai B, Mayne S. Serum free
light chains an alternative test to urine Bence
Jones proteins when screening for monoclonal
gammopathies. Clin Chem 2006521743-1748.
Elektroforeza proteina u serumu
FREELITE kapa i lambda i Kapa/lambda omjer

FREELITE nalaz abnormalan SPE normalna
FREELITE nalaz normalan SPE abnormalna
FREELITE nalaz normalan SPE normalna
FREELITE nalaz abnormalan SPE abnormalna
Prisutan intaktni monokl. Ig ili BJP
Prisutan intaktni monokl. Ig
Prisutan BJP
M-P negativan
13
FREELITE Serum Free Light Chain Assays
14
FREELITE Serum Free Light Chain Assays
15
Kristali Bence-Jones proteinaRazumijevanje
strukture kristala BJP moglo bi biti kljucno za
razvoj selektivne terapije lijekovima.
Microgravity Space is the laboratory of the next
millennium Mikrogravitacijski uvjeti u svemiru
su jedinstveni okoliš za istraživanja koja vode
novim produktima i tehnologijama.
STS-95
STS-80