Interferencije i drugi izvori varijacija pri odredivanju tumorskih biljega dr.sc.Lorena Honovic, spec.med.biokem. Djelatnost za laboratorijsku dijagnostiku OB Pula

1
Interferencije i drugi izvori varijacija pri
odredivanju tumorskih biljegadr.sc.Lorena
Honovic, spec.med.biokem.Djelatnost za
laboratorijsku dijagnostikuOB Pula
2
Definicija tumorskog biljega
- skupina heterogenih bioloških tvari ili
biološka tvar koja nastaje iz samih tumorskih
stanica ili kao odgovor na tumorski rast
1846.god. Bence-Jones protein1940.god.
kisela fosfataza1960.god.
imunoodredivanje1963.god. ?-fetoprotein1965
.god. karcinoembrionalni antigen1975. god.
monoklonska antitijela1980.god. CA 125,
PSA1970-1980.god. onkogeni i tumorski
supresorski geni2001. god. primjena novih
tehnologija i metoda
3
Klasifikacija tumorskih biljega

• produkti tumora ili produkti malignih procesa
• onkofetalni antigeni enzimi
• ektopicni antigeni hormoni
• onkoplacentalni antigeni metaboliti

4
Idealan tumorski biljeg

• Specifican za tumor
• Rast koncentracije proporcionalan velicini
  tumora
• Povecana koncentracija u prisutnosti
  mikrometastaza
• Vrijednosti koncentracija koje dobro razlikuju
  zdrave osobe od onih kod kojih je zabilježen
  tumorski rast
• Mogucnost detekcije prije nego se tumorski rast
  klinicki zabilježi
• Pouzdan i reproducibilan ( CV unutar lt5, CV
  izmedu lt10)
• Jeftin za odredivanje i reagensi neštetni i
  prihvatljivi za okoliš

5
Ogranicenja upotrebe tumorskih biljega

• Procjena rizika malignih tumora- ogranicena
• Rano otkrivanje bolesti- ogranicena
• Dijagnoza- ogranicena
• Prognoza- ogranicena
• Predvidanje uspješnosti terapije- znacajna
• Pracenje napredovanja bolesti- ograniceno
• Otkrivanje recidiva bolesti- ograniceno

6
NACB preporuke

• NACB2009 Upotreba tumorskih biljega u klinickoj
  praksi
• Zahtjevi kvalitete
• NACB2009 Upotreba tumorskih biljega u
  testikularnom karcinomu,
• karcinomu prostate, kolorektalnom karcinomu,
  karcinomu dojke i
• karcinomu jajnika
• NACB2010 Upotreba tumorskih biljega u karcinomu
  jetre, mokracnog
• mjehura, vrata maternice i želuca.
• www.aacc.org

7
NACB preporuke

• Temeljni zahtjevi kvalitete
• Predanaliticki zahtjevi (izbor tumorskog biljega,
  vrsta uzorka, vrijeme uzorkovanja, rukovanje
  uzorkom)
• Analiticki zahtjevi (standardizacija analize,
  unutarnja kontrola kvalitete i vanjska procjena
  kvalitete, interferencije)
• Poslijeanaliticki zahtjevi (referentni intervali,
  interpretacija i izvještavanje o rezultatima
  odredivanja tumorskih biljega)

8
Predanaliticki zahtjevi

• Uzorak serum ili plazma, primarna epruveta,
  vrsta epruvete za svaku
• pretragu prema uputi proizvodaca reagensa.
• Stabilnost uzorka (4ºC kratkotrajno ili -30ºC
  dugotrajno
• dugotrajnije -70ºC).
• Obrada toplinom - izbjegavati (HCG i PSA).
• Dugotrajno cuvanje izbjegavati AFP, CEA, CA
  125, CA19-9.
• PSA- centrifugirati i staviti na hladno unutar 3
  sata od uzorkovanja,
• važno za fPSA, koji je nestabilniji od tPSA.
• Cuvanje uzoraka - 4C do 24 sata, zamrzavanje
  na -20C, bolje na
• -30C ili niže, dugotrajno cuvanje na -70C ili
  niže

9

• CA 125 - brzo nakon kratkotrajnog centrifugiranja
  i odvajanja seruma od ugruška
• Cuvanje uzoraka - na 4C (1 5 dana)
  krakotrajno na -20C (2 tjedna 3 mjeseca)
  dugotrajno na -70C

10
Predanaliticki zahtjevi
Izbor pretrage Zahtjevi za tumorske biljege - u
skladu s dogovorenim lokalnim protokolima
temeljenim na utvrdenim nacionalnim i
internacionalnim smjernicama Odredivanje panela
tumorskih biljega - izbjegavati moguci
izuzetak bolesnici s poznatom malignošcu
nepoznatog porijekla PSA nikada rutinski u žena,
CA 125 nikada rutinski u muškaraca, CA 15-3
rutinski u muškaraca pri postojanju dijagnoze
karcinoma dojke
11
Predanaliticki zahtjevi
Raspored uzorkovanja Bazalne koncentracije -
prije operacije i prije pracenja
terapije Vrijeme uzorkovanja Dnevne varijacije -
ne postoje dokazi Krv za PSA - prije klinicke
manipulacije prostate (biopsija
prostate, traumatska kateterizacija) Krv za CA
125 - ne tijekom menstruacije (2-3x ?)
12
Predanaliticki zahtjevi
Utjecaj lijekova, drugih tretmana i nacina
života - Inhibitori 5?-reduktaze, npr. Finasterid
- prosjecno smanjenje PSA za 50 -
Kemoterapija - prolazno povecanje tumorskog
biljega - Kanabis - prolazno povecanje HCG -
Pušenje - lagano povecanje CEA u nekim metodama -
Alternativni komplemetarni tretmani - rast tumora
i promjena vrijednosti tumorskog
biljega Kontaminacija uzorka Slina - znacajno
povecanje CEA, CA 19-9
13
Predanaliticki zahtjevi
Utjecaj klinickih stanja Jetrene bolesti,
bubrežne bolesti, upala, infekcije Nemaligne
bolesti-ciste jajnika, oboljenja štitnjace,
bubrežni kamenci, sarkoidoza,
14
Faktori koji utjecu na rezultat (in vivo)

• Stvaranje tumorskog biljega
• Oslobadanje tumorskog biljega
• Tumorska masa
• Opskrbljivanje tumora s krvlju
• Dnevna varijacija
• Položaj tijela tijekom uzimanja krvi
• Jatrogeni utjecaji rektalni pregled,
  kolonoskopija, cistoskopija
• Katabolizam tumorskog biljega funkcija bubrega,
  funkcija jetre, kolestaza
• Životne navike pušenje, alkohol

15
Faktori koji interferiraju s rezultatom (in
vitro)

• Uvjeti pohrane
• Vrijeme izmedu uzimanja krvi i centrifugiranja
  (NSE?, PSA?)
• Hemoliza (NSE?) i ikterus (PSA?)
• Kontakt kože s krvnom žilom (SCC)
• Kontaminacija uzorka sa slinom (SCC i CA 19-9
  CEA)
• Interakcije lijekova PSA (divalentni i
  trivalentni metalni ioni purin, indol i
  gvanidinski analozi vitamin C cisplatina,
  mitomicin, estradiol, epirubicin)
• Ljudska anti-mišja-Ig antitijela (HAMA,
  heterofilna antitijela)
• imunoscintigrafija, imunoterapija intenzivan
  kontakt sa životinjama

16
Predanaliticki zahtjevi
Tumorski biljeg Moguce interferncije i drugi analiticki izvori varijacija Rezultati zbog utjecaja interferncije
?-1-fetoprotein 1.HAMA i heterofilna protutijela (ako su prisutna u uzorcima pacijenata) mogu interfereirati u imunokemijskom odredivanju 2.Nemaligne bolesti (alkoholni hepatitis, alkoholna ciroza jetre, akutni virusni hepatitia, nosioci HbsAg, kronicni perzistirajuci hepatitis) 3.trudnoca (ovisno o tjednima trudnoce, max. izmedu 32. i 36.tjedna) 4.gubitak aktivnosti uslijed polimerizacije i dugotrajnog cuvanja povišeni ili sniženi rezultati povišeni rezultati povišeni rezultati sniženi rezultati
Karcinoembrionalni antigen (CEA) 1.Li ili Na-heparinska plazma ima 7-8 više vrijednosti u odnosu na serum 2.HAMA i heterofilna protutijela (ako su prisutna u uzorcima pacijenata) mogu interfereirati u imunokemijskom odredivanju 3.nemaligne bolesti (hepatitis, pankreatitis, upalne bolesti gastrointestinalnog sustava, upalne plucne bolesti, zatajenje bubrega, hipereozinofilija) 4. pušenje 5. dugotrajno cuvanje povišeni rezultati povišeni ili sniženi rezultati povišeni rezultati povišeni rezultati sniženi rezultati
Antigen karcinoma 15-3 (CA 15-3) 1.HAMA i heterofilna protutijela (ako su prisutna u uzorcima pacijenata) mogu interfereirati u imunokemijskom odredivanju 2.nemaligne bolesti (ciroza jetre, hepatitis, autoimune bolesti, jajnika i dojke) 3.druge maligne bolesti, osim karcinoma dojke (karcinom pluca, kolona, pankreasa, primarni karcinom jetre, jajnika, cerviksa i endometrija) 4.linearnost nekih metoda iznad 200 IU/ml, osobito pri upotrebi seruma povišeni ili sniženi rezultati povišeni rezultati povišeni rezultati sniženi rezultati
Antigen karcinoma 125 (CA 125) 1.HAMA i heterofilna protutijela (ako su prisutna u uzorcima pacijenata) mogu interfereirati u imunokemijskom odredivanju 2.nemaligne bolesti (benigne ciste jajnika, endometrioza, bolesti jetre i pankreasa, prvi trimestar trudnoce, pacijenti na dijalizi, zatajenje srca, tuberkuloza) 3.druge maligne bolesti osim karcinoma jajnika (karcinom corpusa, cerviksa,endometrija, pankreasa i pluca) 4.dugotrajno cuvanje 5. menstruacija povišeni ili sniženi rezultati povišeni rezultati povišeni rezultati sniženi rezultati povišeni rezultati

17
Predanaliticki zahtjevi
Tumorski biljeg Moguce interferncije i drugi analiticki izvori varijacija Rezultati zbog utjecaja interferencije
Ugljikohidratni antigen 19-9 (CA 19-9) 1.HAMA i heterofilna protutijela (ako su prisutna u uzorcima pacijenata) mogu interfereirati u imunokemijskom odredivanju 2.pacijenti s krvnom grupom Levis (a), Levis(b) negativna zbog nedostatka enzima sialil- transferaze potrebnog za sintezu CA19-9 epitopa (3-5 populacije) 3.menstruacija i trudnoca 4.zagadenje uzorka sekretima, osobito slinom 5.nemaligne bolesti( (pankreatitis, hepatitis, ciroza jetre, druge gastrointestinalne bolesti, cisticna fibroza) povišeni ili sniženi rezultati sniženi rezultati povišeni rezultati povišeni rezultati povišeni rezulatati
Ukupan prostata specifican antigen (tPSA) 1.HAMA i heterofilna protutijela (ako su prisutna u uzorcima pacijenata) mogu interfereirati u imunokemijskom odredivanju 2.hormonska terapija 3.transrektalna ultrazvucna dijagnostika i biopsija prostate, te ostale manipulacije 4.ejakulacija 5.ostale maligne bolesti (karcinom dojke, neoplazme žljijezda slinovnica, preiuretalnih i analnih žlijezda) 6.produljeno vrijeme do centrifugiranja i pohrane za fPSA, te obrada toplinom povišeni ili sniženi rezultati povišeni rezultati povišeni rezultati povišeni rezultati povišeni rezultati sniženi rezultati
Ukupni humani korionski gonadotropin (ukupni hCG) 1.prozonski ucinak visokih koncentracija 2. heterofilna antitijela, nespecificni proteinski nosaci, hCG slicne supstance 3. bubrežna insuficijencija, menopauza 4.prisutnost trofoblasticnog ili netrofoblasticnog tumora 5. toplinska obrada (moguca disocijacija na slobodne podjedinice) 6.upotreba canabisa sniženi rezultati povišeni rezultati povišeni rezultati povišeni rezultati sniženi rezultati povišeni rezultati
Citokeratinski fragment 19 (Cyfra 21-1) 1.endotrahealna intubacija, dugotrajna viokotlacna ventilacija 2.traume pluca 3. zagadenje uzorka sekretima, osobito slinom 4. kratko vrijeme poluživota (2-5 sati) povišeni rezultati povišeni rezultati povišeni rezultati sniženi rezultati
18
Analiticki zahtjevi

• Validacija analize - dobro karakterizirane
  metode,
• Unutarnja procjena kvalitete- procjena
  reproducibilnosti, izbor uzoraka (serumski
  matriks, koncentracije prikladne klinickoj
  primjeni i klinickim odlukama- negativna i niska
  pozitivna kontrola, za diluciju- visoka pozitivna
  kontrola)
• Vanjska procjena kvalitete- prikladna
  koncentracija tumorskog biljega, slicnost
  serumima pacijenata, stabilnost tijekom
  prijevoza, istinitost u stabilnost ciljnih
  vrijednosti, procjena interferencije analize,
  zahtjevi za prigodnim interpretacijama i
  pregledima rezultata, pružanje relevantnih
  edukacijskih novosti
• Zahtjevi kvalitete za smanjenje rizika od
  pogrešaka u rezultatima tumorskih biljega koji se
  odnose na metodu

19
Metode odredivanja tumorskih biljega
ANALITICKE TEHNIKE INSTRUMENTALNE TEHNIKE -
odredivanje aktivnosti enzima - kromatografija -
imunoodredivanja - elektroforeza - testovi na
receptore - masena spektrometrija -
plinska kromatografija
20
Metode odredivanja tumorskih biljega

• kompetitivno imunoodredivanje,
• nekompetitivno imunoodredivanje,
• radio imunoodredivanja (RIA)
• enzimska imunoodredivnja (EIA)
• mikrocestica enzimsko odredivanje (MEIA)
• kemiluminiscentno imunoodredivanje (CMIA)
• elektrokemiluminiscentno imunoodredivanje (ECLIA)
• masena spektrometrija
• microarray metode

21
Ogranicenja metoda za odredivanje tumorskih
biljega

• Osjetljivost
• Specificnost
• Usporedba rezultata (tocnost, nepreciznost,
  linearnost,
• nepostojanje internacionalnih standarda)
• Predanaliticki cimbenici
• Interferencije pri odredivanju

22
Interferencije

• IFCC definicija interferencije
• Sistematska pogreška mjerenja uzrokovana
  komponentama
• uzorka koje same po sebi ne daju signal u
  mjernom sustavu.
• Egzogene- slucajne i sistematske, ovisne o
  metodologiji i opremi (prijenos uzorka, vrsta
  epruveta, utjecaj radioaktivnih komponenti pri
  izotopskom obilježavanju), LAKŠE prepoznavanje
• Endogene- ovisne o svojstvima samog uzorka
  (specificnosti antitijela, obliku testa, pripremi
  uzorka) križna reakcija s endogenim i egzogenim
  supstancama koje nemaju strukturu antitijela, one
  koje imaju strukturu antitijela, interferencije
  svih sastavnica uzorka, prozonski ucinak, TEŽE
  prepoznavanje

23
Egzogene interferencije

• Prijenos uzorka (carry over)- serije uzoraka u
  kojima postoje uzorci s visokim koncentracijama
  tumorskog biljega, rucna odredivanja
• Npr. 0,1 deklarirani carry over od 100 000
  kU/L iznosi 100 kU/L
• Zagadenje uzorka, reagensa, plasticnog pribora,
• Preporuke povremena provjera

24
Endogene interferencije

• Križna reaktivnost- ovisna o specificnosti i
  homogenosti upotrebljenog antitijela i o tipu
  reakcije (CEA, CA125, CA15-3)
• Preporuke proizvodaci trebaju pružiti jasnu
  informaciju o križnoj
• reaktivnosti, o specificnosti At koja se koriste
  u metodi, osobito u
• metodama u kojima mogu reagirati izoforme
  tumorskih biljega- PSA, HCG
• Lažno povišeni ili lažno sniženi
  rezultati-ovisno o vezivanju za jedno ili oba At
  u dvostrukom imunoodredivanju

25
Endogene interferencije

• High-dose hook effect- prozonski ucinak-
  zasicenje antitijela antigenom, stanje suviška
  analita, metode s istodobnom upotrebom Ag, At i
  biljega, lažno sniženi rezultati,
• prepoznavanje izuzetno visokih koncentracija
  AFP, HCG
• Preporuke poboljšavanje metoda uvodenjem lateks
  cestica, uvodenjem postupka ispiranja prije
  dodatka obilježenog At, smanjene kolicine uzorka
  potrebne za analizu, razrjedivanje uzorka,
  definirani laboratorijski protokoli za
  identifikaciju uzoraka,

26
Endogene interferencije

• Interferencija heterofilnih ili humanih
  anti-mišjih antitijela (HAMA) obje vrste At
  interferiraju jednako- istovremeno stvaranje
  kompleksa s primarnim i obilježenim At reagensa,
  lažno povišeni rezultati,
• prepoznavanje nesukladnih rezultata CA 125, HCG
• Preporuke ponovna analiza uzorka nakon upotrebe
  komercijalno
• dostupnih epruveta s blokirajucim At, dodatak
  imobiliziranog ne-imunog seruma, precipitacija
  PEG-om, analiza metodom razlicite tehnologije
  (npr.RIA), procjena linearnosti pri nekoliko
  dilucija, osobita važnost komunikacije klinickog
  i laboratorijskog osoblja.

27
Poslijeanaliticki zahtjevi kvalitete

• Klinicka informacija od lijecnika sumnja ili
  dijagnosticirana malignost prije ili poslije
  operacije, prije kemoterapije
• Dostupnost odgovarajucih referentnih intervala
• Definiran povecanja ili smanjenja tumorskog
  biljega koji predstavlja znacajnu promjenu (25)
• Definiran protokol kad se mijenja metoda
• Izracun poluživota tumorskih biljega- vrijeme
  potrebno za 50 smanjenje cirkulirajuceg biljega
  nakon uklanjanja tumorskog tkiva
• (4 dana AFP, 5-10 dana CA125, 4-8 dana CA 19-9,
  5-7 dana CA 15-3,
• 7 dana CEA, 0,5-1,5 dana HCG, 4-7 dana PSA)
• Provjera korisnosti rezultata tumorskih biljega

28
Poslijeanaliticki zahtjevi kvalitete

• Izvještavanje o rezultatima
• Kumulativni rezultati tumorskih biljega (graficki
  prikazi)
• Navod metode na obrascu nalaza i vjerojatnost ima
  li promjena metode utjecaj na interpretaciju
  rezultata
• Savjet o ucestalosti pracenja i potrebi za
  potvrdnim uzorcima
• Dobra komunikacija izmedu laboratorija i
  klinickog osoblja

29
Testikularni karcinom

• Dijagnostika
• Sumnja na testikularni karcinom odredivanje
  HCG, AFP i LD obavezno prije tretmana
• Klinicko stupnjevanje
• Odredivanje HCG, AFP i LD - obavezno prema
  International Germ Cell Consensus Classification

30

• Pracenje odgovora nakon tretmana
• AFP, HCG i/ili LD poveceni prije terapije -
  tjedno pratiti dok koncentracije ne budu unutar
  referentnog intervala
• Vrijednosti biljega koje prelaze gornju granicu
  referentnog intervala nakon terapije - ostatna
  bolest, koju treba potvrditi ili iskljuciti
  drugim metodama

31

• Nadzor
• Serijsko pracenje AFP, HCG i LD i kad nisu
  povecani prije terapije promjena ekspresije
  biljega tijekom terapije
• Ucestalost odredivanja ovisi o stadiju i
  patologiji bolesti dogovoreni protokoli
• Bazalne vrijednosti individualne - povecanja
  važnija od apsolutne koncentracije
• Povecanje potvrda u drugom uzorku uzeti u
  obzir prolazna povecanja zbog nespecificne
  interferencije (npr. jatrogeni hipogonadizam)

32

• Analiticki zahtjevi za AFP
• Metode za AFP kalibrirane prema WHO Standard
  72/225
• Jasno iskazane jedinice - ?g/L ili kIU/L
• Granica detekcije - ? 1 ?g/L (? 1,2 kIU/L)
• Referentne vrijednosti netocnost metode
• AFP povecan - benigne bolesti, druge malignosti
  osim testikularnog karcinoma, ili nespecificne
  interferencije

33

• Analiticki zahtjevi za HCG
• HCG i HCG? - za pracenje bolesnika s
  testikularnim karcinomom (metoda koja prepoznaje
  široki spektar izoformi povezanih s HCG ili
  odvojene specificne analize)
• HCG i HCG? - prepoznavanje na ekvimolarnoj osnovi
  s granicom detekcije od ? 1 IU/L
• Opis metode odredivanja - nomenklatura IFCC za
  HCG
• Interferencije (npr. od heterofilnih antitijela)
  i prolazna povecanja (npr. zbog kemoterapije)

34

• Analiticki zahtjevi za LD
• LD enzimska metoda
• Vrijednosti - ovisne o metodi
• Stupanj povecanja prema gornjoj granici
  referentnog intervala
• Sprjecavanje hemolize - lažno povecane vrijednosti

35
Karcinom prostate

• Izbor tumorskog biljega za tretman
• PSA - trenutno najkorisniji serumski tumorski
  biljeg u tretmanu bolesnika s karcinomom prostate
  u svim stadijima bolesti

36

• Razine klinicke odluke za otkrivanje vrlo malih
  tumora
• Smanjenje razine klinicke odluke na lt 4 ?g/L za
  biopsiju nesigurno
• Vrijednost PSA lt 4 ?g/L povecanje osjetljivost
  i smanjenje specificnosti
• Vrijednost PSA gt 4 ?g/L - smanjuje osjetljivosti
  propuštene dijagnoze klinicki znacajnih tumora

37

• Referentni intervali specificni za godine
• Referentni intervali PSA specificni za godine -
  NE
• Upotreba fPSA u dijagnostici
• Pomoc u razlikovanju karcinoma prostate od BHP
  -tPSA 4-10 ?g/L i DRE negativan
• Razina klinicke odluke - ispravno validirana za
  svaku kombinaciju analiza fPSA i tPSA

38

• Probiranje
• Odluka nakon rezultata prospektivnih
  randomiziranih istraživanja (npr. European
  Randomized Screening for Prostate Cancer) rok
  završetka 2010. godina
• Pracenje nakon tretmana
• PSA - za pracenje statusa bolesti nakon tretmana

39

• Predanalitika
• Manipulacija prostatom
• Uzimanje krvi - prije bilo kakve manipulacije
  prostatom i nekoliko tjedana nakon izljecenja
  prostatitisa
• Rukovanje uzorkom
• Centrifugirati i staviti na hladno unutar 3 sata
  od uzorkovanje
• Važno za fPSA, koji je nestabilniji od tPSA
• Cuvanje uzoraka - 4C do 24 sata
• Ako se nece analizirati unutar 24 sata
  zamrzavanje na 20C, bolje na -30C ili niže
• Dugotrajno cuvanje zamrzavanje na -70C ili niže

40

• Analitika kontrola kvalitete
• Odrediti najmanju koncentraciju koja se izdaje,
  izvjestiti lijecnike, provoditi kontrolu
  kvalitete te koncentracije
• Poslijeanalitika
• Intraindividulana biološka varijacija
• Uzeti u obzir doprinos intraindividualne biološke
  varijacije pri interpretaciji rezultata
• Informacije ukljucene u klinicki izvještaj
• Naziv analize, relevantne razine klinicke odluke
  i napomenu - jedan rezultat pretrage probiranja
  nije jedini dokaz prisutnosti ili odsutnosti
  maligne bolesti

41
Kolorektalni karcinom

• Serumski biljezi
• Probiranje zdravih osoba
• CEA - NE za probiranje zdravih osoba na rani CRC
• Prognoza i predvidanje
• Predoperativne koncentracije CEA, u kombinaciji s
  drugim faktorima planiranje operativnog zahvata
• CEA npr. ? 5 ?g/L procjena prisutnosti
  udaljenih metastaza
• Predoperativne koncentracije CEA - NE za
  selekciju bolesnika za adjuvantnu kemoterapiju

42

• Nadzor nakon operativnog zahvata
• Odredivaje CEA svaka 3 mjeseca u bolesnika sa
  stadijem II ili III CRC najmanje 3 godine nakon
  dijagnoze, ako je bolesnik kandidat za operativni
  zahvat ili sistemsku terapiju metastatske
  bolesti
• Pracenje bolesnika s uznapredovalom bolešcu
• Bolesnik s uznapredovalim CRC podvrgnut
  sistemskoj terapiji - redovito odredivanje CEA
• Potvrdeno povecanje CEA npr. ? 30 - progresivnu
  bolest (iskljuciti lažno pozitivno povecanje)

43

• Ostali serumski biljezi
• Rutinsko odredivanje CA 19-9, CA 242 i TIMP-1 -
  NE
• Tkivni biljezi
• TS, MSI, DCC (engl. deleted in colon cancer),
  uPA, PAI-1 ili p53 - NE za odredivanje prognoze
  ili predvidanje odgovora na terapiju
• Mutacija k-ras - ? za predvidanje koristi od
  specificnih anti-EGFR antitijela

44

• Biljezi u stolici
• Probiranje na CRC
• Sve osobe 50 godina
• Najucinkovitija pretraga probiranja nije poznata
• Izabrana metoda ovisi o riziku od CRC, lokalnoj
  raspoloživosti i osobnoj sklonosti
• FOBT - najbolje validirana metoda probiranja
• Ispitivanje DNA u stolici
• Moguce štetne posljedice probiranja -
  komplikacije zbog kolonoskopije i tretmana,
  mogucnost pretjeranih dijagnoza što dovodi do
  nepotrebnih ispitivanja te lažno negativni i
  lažno pozitivni rezultati

45

• Genski biljezi
• Probiranje na geneticku podložnost CRC - detaljna
  anamneza
• Prije ispitivanja - geneticko savjetovanje
• Sumnja na FAP - gensko ispitivanje i za potvrdu
  dijagnoze u sumnjivog ispitanika i za procjenu
  rizika u presimptomastkih clanova obitelji
• Poznata mutacija odgovorna za FAP unutar obitelji
  - ispitivanje na APC mutacije rizicnim clanovima
  obitelji
• Predprobiranje na HNPCC - ispitivanje MSI i/ili
  IHC na specificne mismatch repair enzime
• Visoka MSI - gensko ispitivanje mutacija u MLH1,
  MSH2, MSH6 ili PMS2 genima

46
Karcinom dojke

• Tkivni biljezi
• ER i PR kao prediktivni i prognosticki biljezi
• ER i PR - svim bolesnicama s karcinomom dojke
• Primarna svrha - identifikacija bolesnica s
  karcinomom dojke koje se mogu tretirati s
  hormonskom terapijom
• U kombinaciji s utvrdenim prognostickim faktorima
  (tj. stadijem tumora, stupnjem tumora i brojem
  limfnih cvorova zahvacenih metastazama) - za
  odredivanje kratkotrajne prognoze u bolesnica s
  novodijagnosticiranim karcinomom dojke

47

• HER-2 kao prediktivni i prognosticki biljeg
• HER-2 - svim bolesnicama s invazivnim karcinomom
  dojke
• Primarna svrha - selekcija bolesnica s karcinomom
  dojke koje mogu biti tretirane s transtuzumabom
• HER-2 takoder za identifikaciju bolesnica koje
  imaju koristi od adjuvantne terapije koja
  ukljucuje antraciklin

48

• uPA i PAI-1 za odredivanje prognoze
• uPA i PAI-1 - za identifikaciju bolesnica s
  karcinomom dojke i negativnim limfnim cvorovima
  koje ne trebaju ili je malo vjerojatno da bi
  imale koristi od adjuvatne terapije
• uPA i PAI-1 odredivanje validiranim ELISA u
  ekstraktima svježeg ili svježe zamrznutog tkiva
  tumora

49

• Serumski biljezi
• Nadzor nakon operativnog zahvata i pracenje
  terapije u uznapredovaloj bolesti
• CA 15-3 i BR 27.29 NE rutinski za rano
  otkrivanje recidiva/metastaza u asimptomatskih
  bolesnica s dijagnosticiranim karcinomom dojke
• Neke bolesnice lijecnici mogu tražiti odredivanje
  CA 15-3 ili BR 27.29 - konacnu odluku mora
  donijeti lijecnik u konzultaciji s bolesnicom
• U kombinaciji s radiologijom i klinickim
  pregledom, CA 15-3 ili BR 27.29 - za pracenje
  kemoterapije u bolesnica s uznapredovalim
  karcinomom dojke
• Bolesnice kojima se ne može procijeniti bolest -
  stalno povecanje koncentracije biljega ukazuje na
  progresiju bolesti

50

• Rano otkrivanje recidiva/metastaza
• CEA NE za rano otkrivanje recidiva/metastaza u
  bolesnica s dijagnosticiranim karcinomom dojke
• Neke bolesnice i lijecnici mogu tražiti
  odredivanje CEA - konacnu odluku mora donijeti
  lijecnik u konzultaciji s bolesnicom
• U kombinaciji s radiologijom i klinickim
  pregledom, CEA - za pracenje kemoterapije u
  bolesnica s uznapredovalim karcinomom dojke
• Bolesnice kojima se ne može procijeniti bolest -
  stalno povecanje koncentracije CEA ukazuje na
  progresiju bolesti

51

• Genski biljezi
• Ispitivanje mutacije BRCA 1 i 2 za identifikaciju
  žena s visokim rizikom za razvoj karcinoma dojke
• Ispitivanje mutacije BRCA 1 i BRCA 2 - za
  identifikaciju žena s visokom rizikom za razvoj
  karcinoma dojke ili jajnika u visokorizicnim
  obiteljima
• Probiranje treba zapoceti izmedu 25. i 30. godine
• Nedovoljno podataka da se preporuci specificna
  strategija nadzora/probiranja za žene s visokim
  rizikom
• Odgovarajuca konzultacija - svakoj osobi s
  obzirom na ispitivanje BRCA 1 i BRCA 2

52
Karcinom jajnika

• Rukovanje uzorkom za odredivanje CA 125
• Odredivanje CA 125 - brzo nakon kratkotrajnog
  centrifugiranja i odvajanja seruma od ugruška
• Cuvanje uzoraka - na 4C (1 5 dana)
  krakotrajno na -20C (2 tjedna 3 mjeseca)
  dugotrajno na -70C
• Probiranje
• CA 125 NE za probiranje asimptomatskih žena
• Zajedno s TVUS - za rano otkrivanje karcinoma
  jajnika u žena s nasljednim sindromima

53

• Razlikovanje mase u zdjelici
• Ca 125 - pomoc u razlikovanju benigne od maligne
  sumnjive mase u zdjelici, osobito u žena nakon
  menopauze
• Pracenje tretmana
• CA 125 - za pracenje odgovora na kemoterapiju
• Prvi uzorak - unutar 2 tjedna prije tretmana,
  izmedu 2. i 4. tjedna tijekom tretmana, u
  intervalima od 2 do 3 tjedna tijekom pracenja
• Odredivanje istom metodom
• U bolesnica koje primaju terapiju s anti-CA 125
  antitijelima - NE

54

• Pracenje nakon terapije
• Ako su vrijednosti pocetno povecane
• Intervali pracenja - nisu definirani
• Praksa - svakih 2 do 4 mjeseca tijekom 2. godine
  i nakon toga rjede
• Prognoza
• Tijekom primarne terapije - koncentracije prije i
  poslije operacije mogu biti od prognostickog
  znacaja
• Stalna povecanja - loša prognoza

55

• Ostali tumorski biljezi za karcinom jajnika
• CA 125 - jedini biljeg za upotrebu u ozbiljnim
  malignim bolestima jajnika
• Novi biljezi karcinoma jajnika obecavaju,
  doprinos trenutnom standardu nepoznat, potrebna
  daljnja klinicka istraživanja

56

• Ostali tumorski biljezi
• Karcinom jetre AFP
• Karcinom želuca nema preporuka
• Karcinom mjehura nema preporuka
• Karcinom pankreasa CA 19-9
• Karcinom cerviksa SCC
• Melanom LD, MIA, S100, TA90-IC
• Tumori paratireoidne žlijezde PTH, kalcij
• Karcinom štitnjace TG, anti.TG
• Karcinom pluca NSE, CEA, CYFRA 21-1, ProGRP

57
Karcinom pluca
58
Neuroendokrini tumori
59
Nacionalni program prevencije i ranog otkrivanja
raka u Hrvatskoj

• rano otkrivaje raka dojke (mamografija,
  samopregled dojki, klinicki pregled dojki)
• rano otkrivanje raka vrata maternice
  (Papanicolaou test, konvencionalni i tekuca
  citologija)
• rano otkrivaje raka debelog crijeva (test
  okultnog krvarenja u stolici)
• rano otkrivanje raka prostate (digitorektalni
  pregled, tPSA, fPSA)
• zdravstveno informiranje (brošure i letci o
  prevenciji i ranom otkrivanju raka najcešcih
  sijela)