Determinazione quantitativa del profilo acidico del latte con particolare riferimento agli isomeri coniugati dell

1
UNIVERSITÀ DEGLI STUDI DI PADOVAFACOLTÀ DI
AGRARIADIPARTIMENTO DI SCIENZE ANIMALITESI DI
LAUREA TRIENNALE IN SCIENZE E TECNOLOGIE AGRARIE

• Determinazione quantitativa del profilo acidico
  del latte con particolare riferimento agli
  isomeri coniugati dellacido linoleico
• Relatore Prof. Schiavon Stefano
• Correlatori Dr. Dal Maso Matteo
• Dr. Grigoletto Luca
• Laureando Pellegrin Nicola
• ANNO ACCADEMICO 2007 2008

2
Il latte frazioni lipidiche

• Acidi grassi insaturi (con 1 o doppi legami)
• - polinsaturi o PUFA (con più doppi legami
• es acido linoleico C 182)
• - omega-3 (acidi grassi insaturi essenziali)
  quando
• l'ultimo doppio legame è presente sul
  terzo
• carbonio a partire dalla fine (es acido
  linolenico
• C 183)
• - CLA sono isomeri geometrici dellacido
  linoleico che presentano
• doppi legami in posizione 9 - 11, o 10 - 12
  assumendo sia forme
• cis che trans.

3
OBIETTIVI

• Messa a punto di una nuova metodica di
  determinazione quanti-qualitativa dei singoli
  acidi grassi, comprese le diverse forme
  isomeriche CLA, utilizzando come metodica di base
  quella già operativa presso il Dipartimento di
  Scienze Animali apportando le opportune
  variazioni
• Scelta della colonna
• costruzione delle rette di taratura
• verifica della ripetibilità delle misure

4
Materiale e Metodi

• Messa punto di una nuova metodica
• Analisi del profilo acidico del latte di bovine
  sottoposte a integrazione lipidica a base di CLA

5
Messa a punto della nuova metodica

• colonna di separazione (colonna capillare HP-88,
  lunga 100 m)
• Utilizzo di uno standard specifico (F.A.M.E, mix
  n. LB-49737)
• costruzione delle rette di taratura (in funzione
  dello standard utilizzato)
• verifica della ripetibilità delle misure (per la
  validazione della metodica).

6
Metodica utilizzata

1. Analisi del campione
2. Preparazione
3. Estrazione dei lipidi
4. Trans-esterificazione
5. Determinazione gascromatografica
6. Espressione dei risultati

7
Espressione dei risultati

• Analisi quantitativa eseguita col metodo dello
  standard interno per confronto con la curva di
  calibrazione (costruita utilizzando il software
  specifico)
• Concentrazione di ogni acido grasso
• Dove
• C concentrazione di acido grasso nel campione
  in mg/100gr.
• QRC quantità di estere metilico di acido grasso
  da curva di calibrazione in mg.
• PC peso del campione in g.
• FAi fattore di conversione da estere metilico a
  corrispondente acido grasso.

8
Analisi della composizione acidica del latte

• Metodica applicata a campioni di latte prelevati
  in una
• sperimentazione in corso presso lazienda della
  facoltà
• Prova somministrazione di un integratore,
  contenente isomeri CLA, a tre gruppi di bovine
  omogenei per produzione, giorni di lattazione,
  body condition score
• e ordine di parto.

9
Quadrato latino
PERIODI BOX 1 BOX 2 BOX 3
PERIODI (4 Vacche) (4 Vacche) (4 Vacche)
ADATTAMENTO AD AD AD
(7 d) AD AD AD
TRATTAMENTO 1 CTRL CLA 40 CLA 80
- Settimana 1 CTRL CLA 40 CLA 80
- Settimana 2 CTRL CLA 40 CLA 80
SOSPENSIONE
- Settimana 3
TRATTAMENTO 2 CLA 40 CLA 80 CTRL
- Settimana 1 CLA 40 CLA 80 CTRL
- Settimana 2 CLA 40 CLA 80 CTRL
SOSPENSIONE
- Settimana 3
TRATTAMENTO 3 CLA 80 CTRL CLA 40
- Settimana 1 CLA 80 CTRL CLA 40
- Settimana 2 CLA 80 CTRL CLA 40
SOSPENSIONE
- Settimana 3
10
Risultati e discussione
11
Rette di taratura

• Rette di taratura accurate hanno permesso di
  individuare valori precisi dei vari analiti, in
  particolare valori di correlazione pari a
  0,9998 x il CLA C181 cis-9, trans-11 e 0,9994 x
  il CLA C182 trans10,cis12
• Ciò ha permesso di ottenere un cromatogramma
  accurato, completo e leggibile per tutti gli
  acidi grassi analizzati.

12
Verifica della ripetibilità

• Le misure sono più precise allaumentare degli
  atomi di carbonio dei singoli acidi grassi, con
  valori più accurati compresi fra i 14 ed i 18
  atomi di carbonio.
• deviazione standard media 1,63
• valore minimo di 0,35 acido oleico - C181 cis
  n-9
• valore massimo di 7,58 per lacido cervonico
  (C226 n3).

13
Composizione acidica del latte

• Dalle analisi effettuate è stato riscontrato che
  
• lutilizzo di integratori a base di CLA, provoca
  una diminuzione della quantità di grasso nel
  latte ed un tendenziale aumento della produzione
  di latte e proteine.
• Nelle bovine si è notato che aumentando la
  quantità di integratore cè un aumento
  significativo degli acidi grassi mono e poli
  insaturi con 18 atomi di carbonio, gli acidi
  grassi più trasferiti nel latte sono stati
  lacido vaccenico e i due isomeri CLA oggetto di
  in prova.

14
Valutazione della variabilità individuale dei
profili acidici del latte

• Livelli di CLA C182 trans10,cis12 nella dieta
• 3,072 g/d ? 40 g/d di integratore ? 6,51
• 6,144 g/d ? 80 g/d di integratore ? 5,55

15
Conclusioni

• La metodica messa a punto è risultata valida
• Lutilizzo degli acidi grassi protetti
  nellalimentazione delle bovine da latte promuove
  laumento dei CLA nel latte