Diapositive 1

1
Diagnostic biologique de linfection à HEV
Jacques Izopet Laboratoire de Virologie CHU de
Toulouse INSERM U563
XXème Colloque de Virologie Versailles 25/11/2008
2

• Mr D John
• 62 ans
• Australien en France depuis 4 ans
• Consulte son médecin généraliste pour un ictère
• ATCD
• diabète de type 2 sous metformine et diamicron
  depuis 2 ans
• Habitudes de vie
• consommation dalcool 30 à 40 g/j
• Habite sur une péniche sur le Canal du Midi

3

• Fièvre à 38C et céphalées
• Ictère depuis 2 j
• Prise de 1 g de paracétamol la veille de
  lhospitalisation
• Biologie
• ASAT 4500 UI/l
• ALAT 5000 UI/l
• Phos Alc N
• ?GT 133 UI/l
• TP 26

CAT pratique ?
4
Circonstances épidémiologiques

• Afrique-Asie-Amérique centrale
• ? endémie élevée
• ? épidémies avec transmission hydrique
• ? cas sporadiques
• Pays industrialisés
• ? cas sporadiques autochtones gtgt importés
• ? régions endémiques
• Boutrouille JCM 07 Mansuy JMV 08

5
Facteurs de risque

• Exposition directe à un réservoir animal liée à
  une activité professionnelle ou de loisir
• Habitudes alimentaires
• Exposition environnementale

6
Circonstances cliniques

• Hépatite symptomatique ictère, fièvre,
  asthénie, nausées, vomissements,
• Formes particulières manifestations
  articulaires, thrombopénie
• Formes asymptomatiques élévation des ALAT

7
Facteurs de gravité

• Femme enceinte
• Hépatopathie chronique sous-jacente
• Immunodépression thérapeutique chimiothérapie
  anticancéreuse ou transplantation

8
Outils virologiques
Diagnostic direct
Diagnostic indirect
?
?
Dépistage génomique Sang Selles
Dépistage sérologique IgG IgM
9
Cinétique des marqueurs
symptômes
virus dans les selles
virémie
IgG
IgM
Transaminases
4 mois
10
20
30
40
50
60 jours
3
après infection
contage
10
Stratégie diagnostique

• Niveau dendémie national ou régional
• ? recherche ou non des marqueurs HEV en 1ère
  ligne
• Tests disponibles au laboratoire
• NABM
• ? Anticorps anti-HEV B70
• ? ARN HEV BHN 250
• Dalton Lancet 07 De Silva JMV 08

11
Tests sérologiques antigènes utilisés
Génotype 1, 2 1, 2 1
Ag recombinant Peptide synthétique Ag
recombinant
Genelabs Adaltis MP Diagnostics
91-123
619-660
573-660 III
101-123 II
394-660
ORF 2.1
12
Evaluation des tests IgM anti-HEV

• Trousses
• ? EIAgen IgM HEV Adaltis
• ? IgM HEV ELISA MP Diagnostics
• ? Assure HEV IgM Rapid test MP Diagnostics
• Panels
• ? Panel A 50 sérums ARN HEV (), G3 ? Panel
  B 406 sérums IgG ARN HEV (-)
• anti-HEV (-)

13
Echantillons ARN HEV ()
IgM anti-HEV
anti-HEV IgG
Microplaque Adaltis
MicroplaqueMP Diagnostics
Test rapideMP Diagnostics
négatif
positif
négatif
positif
négatif
positif
4
37
2
39
1
40
Positif (n41)
5
4
4
5
4
5
Negatif (n9)
9
41
6
44
5
45
Total (n50)
14
Performance
Spécificité
Sensibilité
VPN
VPP
98.8
100
100
90
Microplaque Adaltis
98.5
95.7
99.5
88
Microplaque MP Diagnostics
97.8
100
100
82
Test rapide MP Diagnostics
15
Tests sérologiques spécialisés

• Quantification des IgG
• ? dilutions de raison 2 / UA ou UI
• Avidité des IgG
• ? urée 5M
• IgA
• Western-blot

Rendall JMV 08 Zhang JMV 02 Takahashi JCM 05
16
Tests moléculaires

• Détection ARN HEV RT-PCR conventionnelle
  RT-PCR temps réel
• ? tests non commercialisés / protocoles
  validés / EEQ essentiel
• ? amorces / sonde ORF2
• ? limite de détection 500 c/ml
• Mansuy JCM 04 Mansuy JMV 04
• Quantification ARN HEV RT-PCR temps réel
• Caractérisation ARN HEV par séquençage

17
Echantillons pertinents

• Sang prélèvement de choix
• Selles gain de 15 vs sang uniquement
• Salive rarement positif

18
Hépatites E aiguës en Midi-Pyrénées
Number of cases
Rainfall (mm)
25
300
250
20
200
15
150
10
100
5
50
0
0
1 2 3 4
1 2 3 4
1 2 3 4
1 2 3 4
1 2 3 4
1 2 3 4
Trimesters
Periods
2003
2004
2005
2006
2007
2003 to 07
Mansuy JCV 08
19
Données cliniques
Symptômes Jaunisse Asthénie Fièvre Arthromyalgie
Douleur abdominale Céphalée Nausée Anorexie Perte
de poids Diarrhée Eruption
() 67.7 40.3 27.4 21 11.3 9.7 9.7 8.1 6.5 4.8 3.
2
Démographie H/F 41/21 Age 58 (20-82)
20
(No Transcript)
21
Hépatites E chez limmunodéprimé

• Evolution chronique dans 2 situations
• ? Chimiothérapie anticancéreuse
• Peron JGH 06 Tamura Hepatol Res 07
• ? Transplantation
• Kamar NEJM 08 Haagsma Liver Transpl 08
• Progression vers la cirrhose possible
• Gerolami NEJM 08 Kamar AJT 08

22
Lésions histologiques
A
Hépatite aiguë
C
B
Hépatite chronique après 15 mois dévolution
Cirrhose E après 3 ans dévolution
Kamar AJT 08
23
Diversité du génotype 3
ORF3
M
Y
P
V
X
H
R
Capside
ORF1
ORF2
HV ORF1
RdRp
ORF2
Région hypervariable
Polymérase
Capside
24
2
1
4
3
3b
3c
3e
région ORF2 348nt
3f
Souches humaines locales
Souches porcines
25
AF444002-1b-Pakistan
L25595-1b-China
M80581-1b-Pakistan
L08816-1b-China
M94177-1b-China
D11092-1b-China
D11093-1b-China
X98292-1b-China
AF076239-1a-India
1
AF459438-1a-India
D10330-1a-Burma
100
M73218-1a-Burma
AF051830-1a-Nepal
94
X99441-1a-India
2
AF185822-1a-Pakistan
AY204877-1e-Chad
AY230202-1d-Morocco
M74506-2-Mexico
AB091395-4c-Japan
AB099347-4c-Japan
91
AB200239-4c-Japan
AB09781-4c-Japan
AB080575-4c-Japan
AB097811-4cJapan-swine
AB074915-4c-Japan
4
3
AB074917-4c-Japan
AB161718-4c-Japan
AB161717-4c-Japan
AB108537-4e-China
AJ272108-4d-China
AY594199-4d-China-swine
AB189071-3b-Japan-deer
78
AB189073-3b-Japan
AB189074-3b-japan
3b
AB189075-3b-Japan
AB189072-3b-Japan
AB189070-3b-Japan-boar
AP003430-3b-Japan
AB091394-3b-Japan
TLS39
89
AB074918-3a-Japan
AB074920-3a-Japan
AB089824-3a-japan
AF060668-3a-USA
100
AF082843-3a-USA-swine
98
AB073912-3a-Japan-swine
3c
AY115488-3j-Canada-swine
TLS41
TLS40
AF455784-3-Kyrgyzstan-swine
3e
TLS38
AB248520-3e-Japan
TLS42
AB248522-3e-Japan-swine
TLS36
ORF1 Région RdRp 383 nt
TLS35
TLS37
TLS31
TLS32
TLS33
TLS34
TLS28
TLS19
TLS12
TLS10
TLS11
TLS14
TLS13
TLS6
3f
TLS8
TLS3
TLS2
TLS1
TLS5
TLS4
TLS7
TLS9
TLS18
TLS18
TLS16
Souches humaines locales
TLS15
TLS30
TLS29
TLS27
Souches porcines
TLS26
TLS25
TLS24
TLS23
TLS22
TLS21
TLS20
0.1
26
AF444002-1b-Pakistan
M80581-1b-Pakistan
L25595-1b-China
D11092-1b-China
L08816-1b-China
M94177-1b-China
D1109-1b-China
X98292-1b-China
AF076239-1a-India
AF459438-1a-India
X99441-1a-India
1
AF051830-1a-Nepal
M73218-1a-Burma
D10330-1a-Burma
100
2
AF185822-1a-Pakistan
AY204877-1e-Chad
AY230202-1d-Morocco
M74506-2a-Mexico
AB091395-4b-Japan
3
AB200239-4c-Japan
AB099347-4b-Japan
100
AB097811-4b-Japan-swine
AB097812-4b-Japan
AB080575-4b-Japan
AB074917-4c-Japan
99
4
AB161718-4c-Japan
AB161717-4c-Japan
AB074915-4c-Japan
78
AJ272108-4e-China
AY594199-4d-China-swine
3e
AB108537-4e-China
AF455784-3g-Kyrgyrstan-swine
AB248522-3e-Japan-swine
AB248520-3e-Japan
TLS42
AB189074-3b-Japan
3b
AB189075-3b-Japan
100
AB189073-3b-Japan
AB189070-3b-Japan-boar
AP003430-3b-Japan
AB091394-3b-Japan
AB073912-3b-Japan-swine
AB074918-3a-Japan
100
AB074920-3a-Japan
AB089824-3a-Japan
AF082843-3a-USA-swine
AF060668-3a-USA
3c
AY115488-3j-Canada-swine
75
TLS39
ORF1 Région HVR 345 nt
TLS41
TLS40
TLS38
TLS32
TLS33
TLS34
TLS28
TLS31
TLS36
TLS37
TLS35
TLS25
TLS26
TLS24
TLS23
TLS21
TLS22
TLS20
3f
TLS29
TLS30
TLSE19
TLS27
TLS17
TLS18
TLS16
TLS15
TLS04
Souches humaines locales
TLS05
TLS07
TLS08
TLS06
Souches porcines
TLS13
TLS14
TLS12
TLS10
TLS11
TLS09
TLS02
TLS03
TLS01
0.1
27
AB189071-3b-Japan-deer
AB189072-3b-Japan
AB189070-3b-Japan-boar
3b
100
AP003430-3b-Japan
AB091394-3b-Japan
Génome complet
AB073912-3b-Japan-swine
100
AB074918-3a-Japan
AB074920-3a-Japan
3a
AB089824-3a-Japan
100
AF060668-3a-USA
AF082843-3a-USA-swine
AY115488-3j-Canada-swine
3
100
AB290312-3-Mongolia-swine
3e
AB248522-3e-Japan-swine
100
AB248521-3e-Japan-swine
100
3f
AB248520-3e-Japan
TLS25
100
AF455784-GC-3g-kyrgyrztan-swine
AB099347-4c-Japan
100
AB200239-4c-Japan
AB097812-4c-Japan
AB097811-4c-Japan-swine
AB080575-4c-Japan
1
AB074917-4c-Japan
100
100
AB161718-4c-Japan
AB161717-4c-Japan
4
AB074915-4c-Japan
100
AB108537-4g-China
100
AJ272108-4d-China
2
100
AY594199-4d-China-swine
M74506-2a-Mexico
AY204877-1e-Chad
100
AY230202-1d-Morocco
L08816-1b-China
M94177-1b-China
93
L25595-1b-China
Souches humaines locales
D11092-1b-China
D11093-1b-China
Souches porcines
X98292-1b-China
AF185822-1a-Pakistan
AF051830-1a-Nepal
X99441-1a-India
AF076239-1a-India
AF459438-1a-India
Abravanel EID sous presse
D10330-1a-Burma
M73218-1a-Burma
0.1
28
Transmission nosocomiale ?
Mansuy CID sous presse
29
Synthèse

• HEV constitue un pathogène émergent pour les pays
  industrialisés justifiant une stratégie
  diagnostique adéquate sérologie BM
• Transmission zoonotique hautement probable mais
  modes de transmission encore inconnus
• ? projet multidisciplinaire ANR HEVZOONEPI
• Formes chroniques modèle inattendu pour étudier
  les mécanismes de persistance virale

30
Remerciements
Laboratoire de Virologie Florence
Abravanel Martine Dubois Jean-Michel Mansuy
Services dHépatologie Médecine
Interne Jean-Marie Péron Laurent Alric
Service de Néphrologie Transplantation Nassim
Kamar Lionel Rostaing