TERATOLOGI EKSPERIMENTAL

1
TERATOLOGI EKSPERIMENTAL

• Win Darmanto, Ph.D.

2

• TERATOLOGI EKSPERIMENTAL adalah suatu metode
  penelitian atau mempelajari mempelajari sifat
  teratogen suatu zat dengan menggunakan hewan
  coba.
• Teratogen adalah suatu zat yang dapat menimbulkan
  kelainan pada janin apabila induk yang sedang
  hamil terdedah oleh zat tersebut.

3
Bebeparap hal yang harus diperhatikan dalam
teratologi eksperimental adalah

• Zat yang akan diuji
• Hewan coba
• Penentuan waktu pemberian zat
• Penentuan besarnya konsentrasi atau dosis
• Penentuan jalur administrasi
• Manajemen hewan coba pasca perlakuan
• Pengamatan

4

• Penentuan Zat
• Misal adanya phenomena pada masyarakat disekitar
  aliran sungai yang memanfaatkan air sungai
  tersebut untuk keperluan sehari-hari. Berdasarkan
  pengamatan dijumpai banyak anak mengalami
  kelainan anggota, dan banyak wanita yang
  mengalami keguguran. Selain itu juga diketahui
  dihulu sungai terdapat beberapa pabrik.
• Dengan pemikiran ilmiah kita dapat melakukan
  screening untuk menentukan zat apakah yang dpat
  menyebabkan terjadinya kelainan anggota pda
  anak-anak di desa tersebut.

5
Senyawa Teratogen bersifat

• Embriotoksik adalah zat yang bersifat toksik pada
  perkembangan embrio.
• Beberapa contoh yang bersifat embriotoksik adalah
  nikotin, 2-Methoxyethanol, MAA, Chromium
  Chloride.
• Antimitotic, umumnya digunakan sebagai pengobatan
  kanker, menghambat pembelahan sel-sel kanker.
  Sehingga dapat menyebabkan terjadinya hambatan
  pertumbuhan dan perkembangan.

6

• Sitotoksik
• Zat yang dapat menyebabkan kematian sel, akan
  mampu menyebabkan terjadinya kelainan pada
  embrio.

7
Hewan coba

• Hewan coba umumnya dipilih yang mempunyai
  kekerabatan erat dengan primata, khusunya dengan
  manusia. Hal ini karena dapat menggambarkan
  perilaku yang sama apabila zat tersebut masuk ke
  dalam tubuh wanita hamil.
• Pertimbangan lain adalah masa kebuntingan.
• Sebaiknya memilih hewan coba yang masa
  kebuntingannya tidak panjang, sehingga hasil
  penelitian dapat dengan cepat diketahui.

8

• Jenis hewan yang banyak digunakan adalah mencit
  (Mus musculus), Tikus (Ratus sp).
• Untuk mendapatkan hewan coba yang baik dan
  memenuhi syarat untuk digunakan sebagai sampel
  percobaan, maka faktor pemeliharaan dan cara
  mengawinkan sangat penting untuk diperhatikan.
• Berikut ini adalah teknik pemeliharaan mencit
  sebagai hewan coba

9
Teknik pemeliharaan mencit

• Mencit adalah salah satu hewan yang sering
  digunakan sebagai hewan coba pada penelitian
  reproduksi dan teratologi.
• Alasan pemilihan mencit adalah mudah di peroleh,
  harganya yang relatif murah, siklus reproduksinya
  singkat, masa reproduksi mencit cukup panjang
  berkisar antara 2 sampai 14 bulan.
• Diantara rentang waktu reproduksi mampu
  melahirkan rata-rata 10 kali dengan menghasilkan
  jumlah fetus 100 ekor.
• Pemeliharaan relatif mudah .

10

• Memilih Mencit
• Mencit harus sehat, ditandai dengan bulu halus
  (tidak berdiri), gerakannya cukup lincah dan
  tidak menunjukkan cacat fisik.
• Untuk penelitian bidang reproduksi dan teratologi
  mencit harus siap untuk kawin. Umur berkisar
  delapan minggu dengan berat badan mencit berkisar
  antara 25-30 gram.

11

• Strain Mencit
• Strain mencit meliputi
• (a) Swiss Webster,
• (b) A/Jak,
• (c) SLC/ICR,
• (d) ICR,
• (e) A,
• (f) Balb C,
• (g) Strain bebas patogen.

12
Pemeliharaan

• Rumah Hewan
• Yang perlu diperhatikan
• Kelembapan,
• Suhu,
• Periodisitas sinar (12 jam terang dan 12 jam
  gelap). Kondisi ini dapat dibalik berlawanan
  dengan kondisi alami.
• Ventilator (mampu mengatur kelembapan dan temp)

13

• Bak tempat perawatan harus diberi alas (sekam,
  serbuk gergaji kayu)
• Alat minum dari pipa kaca dan botol, sehinga
  tidak tercemar kotoran.
• Tutup kasa, sekaligus sebagai tempat makanan.
• Mencit jantan dan betina dipisahkan, agar tidak
  kawin.
• Mencit jantan, dapat dikumpulkan sesamanya
  apabila mulai dari saat menyusui, jika mulai dari
  dewasa akan berkelahi.
• Jumlah mencit per kandang disesuaikan dengan
  ukuran bak.

14
Makanan dan Minuman

• Pakan berupa pelet dan air minum diberikan secara
  ad libitum (berlimpah).
• Jenis pakan berupa Par G, pakan ayam 521 maupun
  buatan sendiri (protein, KH dan lemak seimbang).
• Pakan harus dikontrol tidak boleh kekurangan
  maupun terlalu lama, akan menyebabkan berjamur.

15
Penanganan Mencit

• Untuk memegang mencit sebaiknya tanpa menggunakan
  sarung tangan, mencit perlu dibelai terlebih
  dahulu.
• Untuk mengeluarkan dari kandang atau menangkap
  harus memegang ekornya.
• Memegang dengan penuh keyakinan dan tanpa
  keraguan akan menyebabkan mencit merasa bahwa
  tindakan tersebut bukanlah ancaman baginya,
  sehingga mencit tidak akan mengigit.

16

• Memegang mencit dengan tangan kiri, sedemikian
  rupa sehingga mencit beada dalam genggaman dan
  tidak dapat bergerak.
• Untuk itu, maka mencit harus ditempatkan pada
  tempat yang cukup kasar/kasa untuk dapat
  berpegangan, sehingga kita dapat memegang bagian
  kulit tengkuknya, sementara tangan kanan tetap
  memegang ekor.

17
Mengawinkan Mencit

• Siklus estrus
• Mencit betina bersedia dikawini hanya pada masa
  estrus.
• Di luar masa estrus mencit betina menolak.
• Oleh karena itu sangat perlu sekali untuk
  mengetahui tanda-tanda masa estrus.

18

• Siklus estrus mencit meliputi empat fase yang
  terdiri
• Proestrus,
• Estrus,
• Metestrus,
• Diestrus.
• Keempat fase siklus estrus memerlukan waktu
  sekitar 4 sampai 5 hari.

19

• Untuk mengetahui masa estrus mencit betina dapat
  dilakukan dengan pengamatan visual bentuk luar
  vagina /vulva atau mengamati hapusan vagina di
  bawah mikroskop.
• Masa estrus, maka vulva akan tampak
  kemerah-merahan dan sedikit terbuka, sedangkan
  dengan hapusan vagina akan tampak dominansi
  sel-sel yang mengalami kornifikasi.

20
Tahapan untuk membuat hapusan vagina adalah

• Dengan cotton bud basah usapkan pada bagian dalam
  dinding vagina
• Usapkan pada gelas obyek selanjutnya difiksasi
  dengan methanol
• Setelah kering angin warnai dengan methylen blue
  yang dilarutkan dengan methanol
• Selanjutnya cuci dengan air mengalir
• Keringanginkan kemudian amati di bawah mikroskop.

21

• Untuk memperbesar keberhasilan perkawinan atau
  memperbanyak ovulasi dapat dilakukan induksi
  ovulasi (super ovulasi) pada mencit betina.
• Zat yang biasanya digunakan untuk menginduksi
  ovulasi
• PMSG (Pregnant Mare Serum Gonadotropin) dan HCG
  (Human Chorionic Gonadotropin).
• Besarnya dosis yang diberikan adalah 0,5 IU
  dengan volume penyuntikan 0,5 ml setiap ekor.

22
Kawin

• Mencit betina masa estrus disatukan dalam satu
  kandang dengan mencit jantan pada sore hari
  sekitar pukul 17.00, Karena ovulasi dirangsang
  oleh neuroendokrin akibat kegelapan.
• Keesokan harinya diamati adanya sumbat vagina,
  dianggap telah terjadi kopulasi, dan sebagai hari
  nol kebuntingan. Selanjutnya dipisahkan dengan
  pejantan.

23

• Sebelum dikumpulkan dalam satu kandang mencit
  betina diberikan petanda khusus dengan bahan
  pewarna yang tidak hilang (asam pikrat dengan
  warna kuning).
• Atau dengan membuat lubang pada daun telinga.
• Data setiap individu disertakan pada setiap
  kandang dengan cara mencatatkan pada kartu yang
  digantungkan pada kandang.

24

• Untuk memastikan terjadinya kebuntingan, mencit
  betina dilakukan penimbangan berat badan secara
  periodik pada umur kebuntingan 3, 6 dan 9 hari.
• Apabila terdapat penambahan berat badan yang
  sangat mencolok , maka dapat dipastikan bahwa
  mencit tersebut sedang bunting.

25

• Mencit jantan yang digunakan untuk mengawinkan
  harus tetap berada pada kandang yang terpisah,
  karena mengumpulkan mencit jantan yang telah
  bertemu dengan mencit betina akan menyebabkan
  terjadinya perkelahian sampai mati antara mencit
  jantan yang satu dan yang lainnya.

26

• Panjang umur kebuntingan mencit adalah 19 hari.
• Untuk penelitian teratologi, induk mencit dibedah
  pada umur kebuntingan (UK) 18 hari (sehari
  sebelum melahirkan).
• Jumlah fetus normal berkisar 10-11 ekor,
  sedangkan akibat induksi ovulasi bisa bertambah
  banyak.

27
Waktu Pemberian zat

• Untuk mendapatkan hasil yang diharapkan terhadap
  pengujian zat teratogenik, perlu memperhatikan
  waktu pemberiannya.
• Ada dua jenis waktu pemberian yaitu
• (a) pemberian zat sebelum implantasi,
• (b) pemberian zat teratogenik setelah
  implantasi.

28

• Pemberian sebelum implantasi bertujuan untuk
  melihat pengaruh suatu zat terhadap perkembangan
  embrio preimplantasi.
• Zat yang bersifat sitostatik atau embriotoksik
  dapat menyebabkan kematian atau hambatan pada
  perkembangan embrio.
• Pemberian zat setelah implantasi bertujuan untuk
  melihat pengaruh zat pada perkembangan fetus,
  terutama pada masa organogenesis.

29

• Untuk pemberian zat teratogenik setelah masa
  implantasi perlu memperhatikan masa kritis suatu
  organogenesis.
• Suatu zat yang bersifat teratogenik akan
  menyebabkan kelainan pada fetus apabila diberikan
  pada masa kritis.

30

• Masa kritis adalah suatu waktu sepanjang masa
  kebuntingan induk yang dapat menyebabkan terjadi
  kelainan pada fetus yang dikandungnya apabila
  terdedah oleh zat teratogenik.
• Masa kritis induk biasanya berada pada masa
  organogenesis.
• Pada masa pembentukan organ ini terjadi aktifitas
  metabolisme berupa pembelahan maupun kematian sel
  sel dalam rangka pembentukan organ.

31

• Proses pembelahan yang terhambat akan
  mengakibatkan terjadinya hambatan pada
  pembentukan organ.
• Pemberian zat di luar masa organogenesis tidak
  menyebabkan terjadinya kelainan pada fetus,
  sekalipun zat yang diberikan bersifat
  teratogenik.

32
Pola Hipotesis Susseptibilitas Organ Embrionik
Terhadap Bahan Teratogenik.
Malformated / Implantation Sites
Eye
Brain
Palate
Urogenital
Heart and Axial Skeleton
Aortic
Arches
Days of Gestation in the Rat
33
Beberapa faktor yang mempengaruhi munculnya
kelainan pada fetus akibat zat teratogenik

• Suseptibilitas spesies
• Zat teratogen dapat menyebabkan kelainan pada
  spesies hewan tertentu, tetapi tidak munculnya
  kelainan pada spesies yang lain.

34

• Perbedaan suseptibilitas ini memanifestaikan
  beberapa hal
• (1) Zat bersifat teratogen pada satu spesies
  tetapi pada hewan lain sedikit ataupun tidak sama
  sekali,
• (2) Zat teratogen dapat menyebabkan munculnya
  jenis kelainan yang sama tetapi dalam frekuensi
  yang berbeda
• (3) Zat teratogenik menyebabkan jenis kelainan
  yang berbeda antara satu spesies dengan spesies
  yang lain.

35

• Perbedaan suseptibilitas spesies terhadap bahan
  teratogenik ini disebabkan oleh faktor genetik
  dan faktor lingkungan misalnya nutrisi,
  temperatur dan musim.
• Susceptibilitas karena tahap perkembangan
• Perbedaan susceptibilitas karena perbedaan masa
  kritis perkembangan.
• Antara satu spesies dengan spesies yang lain
  mempunyai perbedaan masa organo genesis, sehingga
  pemberian suatu zat teratogenik pada suatu
  spesies dapat menyebabkan terjadinya kelainan,
  sedang pada spesies lain tidak karena bukan pada
  masa organogenesis.

36

• Perbedaan dosis
• Dosis zat yang bersifat teratogenik juga berbeda
  antara satu spesies dengan spesies yang lain.
• Masing-masing spesies memilki kekhasan dalam
  tingkat dosis zat.
• Rentang dosis teratogenik suatu zat pada suatu
  spesies sangat berbeda-beda.
• Oleh karena itu perlu percobaan pendahuluan
  penentukan LD50 .

37
Dosis (Konsentrasi) Zat

• Besarnya dosis sangat menentukan terjadinya
  kelainan.
• Dosis adalah kadar zat yang diberikan dalam
  satuan berat badan.
• Konsentrasi adalah kadar zat yang terlarut pada
  suatu larutan yang diberikan pada hewan coba.
• Untuk menentukan dosis yang diberikan perlu
  diperhitungkan besarnya LD50.

38

• Besarnya LD50 suatu zat berbeda antara satu
  spesies dengan spesies yang lain, sebagai akibat
  perbedaan faktor genetis organisme tersebut.
• Cara penghitungan LD50 dapat menggunakan Analisis
  Probit maupun dengan menggunakan regresi linier.
  
• Besaran dosis dipakai apabila diberikan pada
  hewan coba akan menyebabkan toksisitas namun
  tidak menimbulkan kematian.

39

• Besaran dosis tersebut adalah MTD (maximum
  Tolerable Dosage).
• Besarnya dosis teratogenik adalah sedikit dibawah
  MTD.
• Jalur Administrasi
• Adalah jalur pemberian zat pada hewan coba.

40

• Faktor yang menyebabkan perbedaan respon hewan
  coba terhadap jalur pemberian ini adalah karena
  perbedaan sifat fisika kimia zat tersebut.
• Pertimbangan lain adalah karena menghindari
  faktor barier membran di dalam tubuh.
• Jalur yang biasa digunakan untuk memberikan zat
  adalah sebagai berikut
• Jalur perkutan masuk ke dalam kulit zat .

41

• Contoh zat yang mudah masuk melalui kulit adalah
  fenol dan derivat fenol, hormon estrogen,
  progesteron, testosteron dan desoksikortikosteron,
  vitamin D dan vitamin K, berbagai basa organik
  seperti strikhinina dan nikotina.
• Faktor-faktor yang berperan pada efektifitas
  jalur perkutan adalah polaritas zat, pH, tingkat
  ionisasi, berat molekul dan keterlarutan zat
  dalam air dan lemak.

42

• Jalur inhalasi
• Sangat efektif masuk ke dalam tubuh, karena
  setiap organisme melakukan inspirasi.
• Syarat mutlak adalah zat harus dalam bentuk gas.
• Jalur oral
• Paling lazim untuk masuknya zat.
• Zat teratogenik harus diserap oleh permukaan
  mukosa saluran cerna.

43

• Adua cara yaitu melalui pipa lambung
  (gavage/dipaksa) atau melalui pencampuran bahan
  makanan.
• Faktor yang berpengaruh pada jalur ini adalah pH.
  Kadar pH lambung.
• Toksisitas suatu zat akan berubah bila diberikan
  secara oral.
• Hal ini disebabkan terjadinya pencampuran zat
  dengan bahan makanan.

44
Jalur Parenteral

• Jalur parenteral adalah pemasukan zat ke dalam
  tubuh dengan spuit melalui jarum yang berlubang
  pada tempat tertentu pada bagian tubuh hewan.
• Jalur parenteral ini meliputi
• Penyuntikan ke dalam kulit (intradermal) ,
• Penyuntikan di bawah kulit (sub kutan),
• Di dalam otot (intramuskular),
• Ke dalam darah vena (intravena),
• ke dalam cairan spinal (intratekal),
• ke dalam darah arteri (intraarterial),
• ke dalam tumor atau kedalam cairan dada
  (intrapleural),
• ke dalam cairan abdomen (intraperitoneal).

45
Manajemen pasca Perlakuan

• Pengelolaan hewan coba setelah masa perlakuan
  merupakan faktor penting, karena dapat
  mempengaruhi hasil pengamatan.
• Beberapa hal yang perlu diperhatikan
• Petanda (labeling)
• Untuk mengenali individu baik kontrol maupun
  perlakuan.
• Penanda dengan asam pikrat atau dengan melubang
  daun telinga

46
Pemantauan

• Perkembangan kebuntingan harus dipantau melalui
  berat badan.
• Kebuntingan akan menunjukkan penambahan berat
  badan yang berarti.
• Bila tidak menunjukkan pertambahan berat badan,
  dicurigai terjadi kematian intrauterus setelah
  diberikan obat.

47
Umur kebuntingan

• Umur kebuntingan hewan diperlukan untuk
  mengetahui saat pembedahan.
• Induk mencit yang diberikan perlakuan dengan zat
  teratogenik tidak dibiarkan melahirkan sendiri.
• Karena terdapat kecenderungan pada induk mencit
  untuk memangsa fetus yang lahir cacat. Apabila
  hal ini terjadi maka kita akan kehilangan data.

48
Pengamatan

• Pada mencit pembedahan dilakukan pada umur
  kebuntingan 18 hari.
• Pengamatan pada penelitian preimplantasi
  dilakukan dengan melakukan flushing uterus UK 3
  hari.
• Mencit yang telah dibedah kemudian diambil
  uterusnya dan dilakukan penggelontoran pada
  uterusnya dengan menggunakan garam fisiologis
  (NaCl 0,9 ).

49

• Tujuan flushing adalah untuk mendapatkan embrio
  preimplantasi yang berada di dalam uterus.
• Sedang embrio tahap satu sel, diflushing pada
  bagian tuba fallopi.
• Sedangkan embrio pasca implantasi diperoleh
  dengan jalan mengeluarkannya dari uterus.

50
Berikut ini adalah tahap-tahap pengamatan yang
harus dilalui

• Mematikan mencit
• Ada beberapa macam cara
• anestesi dengan eter
• dislokasi servik

51
Pembedahan.

• Hal-hal yang diamati
• Ovarium
• Dilakukan penghitungan jumlah korpus luteum.
  Jumlah korpus luteum menggambarkan jumlah ovum
  yang diovulasikan.
• Dengan mengetahui jumlah sel telur yang
  diovulasikan kita dapat mengetahui jumlah embrio
  preimplantasi yang hilang.

52

• Yang diamati
• Jumlah corpus luteum
• Jumlah implantasi
• Jumlah bagian yang mengalami resorpsi
• Lokasi dalam uterus
• Jumlah dan posisi fetus yang hidup maupun yang
  mati
• Jenis kelamin fetus
• Berat dan kondisi fetus
• Kondisi umum dari viscera induk yang lain

53
(No Transcript)
54
(No Transcript)
55
Persen kehilangan Pra implantasi dihitung dengan
rumus

• Jumlah korpus luteum jumlah implantasi X 100
  
• Jumlah korpus luteum
• Jumlah implantasi dapat digunakan untuk
  menghitung daya fertilitas mencit.
• Jumlah implantasi X 100
• Jumlah korpus luteum

56

• Perhitungan korpus luteum dilakukan dengan cara
  
• ovarium merendam dalam garam fisiologis kemudian
  dihitung dengan menggunakan mikroskop bedah, pada
  selang waktu maksimum 2 jam setelah pembedahan
• Pada pengamatan korpus luteum berbentuk tonjolan
  yang berwarna kemerah-merahan.
• Jumlah implantasi diamati dengan jalan menghitung
  jumlah plasenta dan sisa resorpsi.

57
Jumlah fetus hidup

• Fetus hidup ditandai dengan adanya gerakan fetus
  apabila dilakukan stimulasi berupa sentuhan.
• Persentase fetus hidup
• Jumlah fetus hidup X 100
• Jumlah implantasi

58

• Persen kematian pascaimplantasi
• Jumlah implantasi jumlah fetus hidup X 100
• Jumlah implantasi
• Jumlah fetus mati
• Jumlah fetus mati X 100
• Jumlah implantasi

59
Embrio resorbsi

• Embrio resorbsi adalah embrio mati yang telah
  diresorbsi kembali.
• Biasanya berupa sisa implantasi (implantation
  site) dengan warna kehitaman.
• Persentase resorbsi dengan menggunakan rumus
• Jumlah embrio resorbsi X 100
• Jumlah implantasi

60

• Rata-rata berat badan fetus.
• Jumlah berat badan fetus hidup per induk
• Jumlah fetus hidup
• Pengamatan kelainan
• Pengamatan kelainan meliputi
• pengamatan pada kelainan eksternal dan pengamatan
  pada kelainan internal.

61

• Kelainan eksternal dilakukan dengan cara
  mengamati keadaan morfologi fetus dengan
  mikroskop bedah.
• Sedangkan pengamatan internal dilakukan setalah
  fetus difiksasi dengan larutan formalin atau
  Bouins.

62
Kelainan eksternal

• Kelainan ekternal adalah kelainan morfologi fetus
  yang dapat diamati dari luar.
• Urutan pengamatan adalah sebagai berikut
• Kepala meliputi
• Otak, letak mata dan telinga serta langit-langit
  bagian atas, dengan kaca pembesar atau dengan
  metode Razor blade section
• Badan dan alat gerak
• Gastroschisis, haemorage, spina bifida dll.
• Jumlah organ ekstremitas, letak dan jumlah
  jarinya.

63

• Ekor
• Diamati panjang dan bentuk ekor
• Organ genetalia.
• Untuk membedakan jenis kelamin fetus dilakukan
  dengan cara mengamati jarak antara genital
  tuberkel dan anus.
• Jantan Jarak genital tuberkel dan anus fetus
  jantan relatif lebih jauh dibandingkan fetus
  betina.

64

• Fungsi pengamatan jenis kelamin fetus adalah
  untuk mengetahui ratio sex hewan coba dengan
  menggunakan rumus
• Jumlah fetus jantan
• Jumlah fetus betina

65
Kelainan internal

• Fetus difiksasi di dalam larutan Bouins, minimal
  3 hari.
• Kelainan internal yang diamati biasanya meliputi
  
• Kelainan pada derah kepala, kelainan jantung,
  ginjal, situs viscerum (posisi visceral).

66

• Kelainan Urogenital
• Kelainan urogenital dilakukan dengan pemotongan
  dengan metode Free Hand Razor Blade Technique
  pada daerah abdomen.
• Pada saat perkembanan embrio ginjal mengalami
  migrasi dari daerah pelvis menuju ke daerah
  abdomen.
• Secara normal ginjal sebelah kiri sedikit lebih
  tinggi dibandingkan ginjal sebelah kanan.

67

• Jenis-jenis kelainan yang dapat terjadi pada
  sistem urogenital adalah
• Aplasia renalis
• Tidak terbentuk ginjal
• Ginjal ektopik, terletak ditempat yang tidak
  seharusnya.
• Normal ginjal terletak di dalam rongga abdomen.
• Ginjal Ektopik terdapat dalam rongga pelvis,
  sebagai akibat selamamigrasi terhambat oleh
  arteria illiaca.

68

• Ginjal berupa ginjal tapal kuda. Kelainan ini
  terjadi karena fusi ginjal pada daerah arteri
  mesenterika.
• Dilatasi ureter
• Hyperplasia ginjal
• Hypoplasia ginjal

69
(No Transcript)
70

• Metode ini terdiri atas 3 bagian
• Koleksi
• Observasi
• Interpretasi dari data toksikologi
  perkembangan
• Spesies yang digunakan oleh lab mereka
• Tikus Sprague-Dawley
• Mencit CD-1
• Kelinci putih New Zealand

71

• Alasan
• Tingkat fertilitas tinggi
• Tingkat kecacatan spontan rendah
• Ukuran tubuh sesuai
• Genetik stabil
• Banyak anak
• Periode kebuntingan pendek
• Masa kawin singkat
• Mudah didapat (dapat dibeli bebas)

72

• Terlihatnya Sumbat vagina (vaginal plug) sebagai
  UK (Umur Kebuntingan)0
• Tikus dibedah pada UK 21
• Mencit dibedah pada UK 18
• Kelinci dibedah pada UK 29

73
Persiapan dan Perkawinan

• Tikus jantan dan betina dewasa
• Umur 10-11 minggu
• Tikus dikarantina 2 minggu
• Tikus?dikandangkan pd baja dg kisi kawat
• Tikus ?dikandangkan pd kotak polikarbonat bening
  dg alas
• Nutrisi ad libitum
• Suhu 72º 4 F, kelembaban relatif 50 10, 12
  jam terang, 12 gelap

74

• ? ditato bagian ekor
• 1 s/d 3 ekor tikus ? dimasukkan ke kandang tikus
  ? di awal sore
• Setiap pagi dilakukan service pan untuk
  mengetahui copulatory plug
• Dilakukan pengolesan vagina (vaginal lavage)
  utk mengetahui intravagina copulatory plug

75

• Service pan menarik ekor ke atas, menekan
  lubang kopulasi
• Vaginal lavag (pengolesan vagina)
• Beberapa tetes lar. saline dimasukkan ke dlm
  pipet
• Ujung pipet dimasukkan 1-2 mm ke dalam vagina
  tikus
• Lar.saline mengalir ke dalam vagina secara
  perlahan
• Lar.saline ditarik kembali ke pipet
• Di smearkan pada mikroslide, diperiksa di bawah
  mikroskop(100-200 X), tidak diwarnai) utk melihat
  sperma

76

• Betina dikatakan kawin jika
• Jika ditemukan sperma pada pegolesan vagina
• Ditemukannya vaginal plug
• Jika terjadi perkawinan
• Betina dipisahkan dr jantan
• Berat badan ditimbang dan dicatat
• Dikembalikan ke kandang polikarbonat asalnya
• Masa kawin dicatat (biasanya 85-90 ? yang
  dikawinkan akan bunting)

77
Metode Penelitian

• 6 kelompok perlakuan kontrol
• Kelompok perlakuan
• 1 tidak ada efek
• 2 tidak ada efek atau efek minimal
• 3 efek minimal
• 4 efek moderat
• 5 toksisitas pasti
• 6 toksisitas pasti
• Dasar pemilihan dosis
• Data minimal toksisitas pada mamalia dewasa
• Dosis tinggi dipilih utk menghasilkan toksisitas
  yang jelas.

78

• Metode
• Hewan pengerat dibunuh pd UK 21 dg asphiksiasi
  CO2
• Diletakkan di papan Plexiglas dijepit dg spring
  clip
• Pembedahan dilakukan pada dinding abdominal utk
  expose abdominal viscera
• Maternal viscera diamati secara makroskopis
• Ovarium diambil diamati diamati corpus
  luteumnya

79
(No Transcript)
80

• Perlakuan pada Uterus
• Uterus yg telah diisolasi dibedah dg gunting
  sepanjang sisi berlawanan dg sisi implantasi
• Mengekspose bagian uterus kantung amnion
• Diamati dihitung jmlposisi implantasi, fetus
  yg hidup maupun yg mati dihitung
• Umbilical cord dipotong
• Fetus dipindahkan ditempatkan dlm nampan,
  dilihat jenis kelaminnya dg melihat genital
  pailla, di timbang dan dicatat beratnya

81

• Kematian embrio
• 1. Kematian di awal post implantasi
• Bagian yang mengalami resorpsi mirip gumpalan
  darah coklat gelap tidak tampak adanya jar.
  Embrionik
• 2. Kematian di akhir post implantasi
• Bagian resorpsi dg jaringan plasenta embrionik
  yang tampak
• 3. Fetus mati
• Fetus yang tidak merespon

82

• Pengukuran terakhir uji eksternal fetus untuk
  abnormal morfologi
• Dengan menggunakan mikroskop dissecting
• 1. Bibir palatum diteliti apakah ada celah dg
  membuka mulut scr perlahan dg catut
• 2. Kepala, diamati pada
• a. lateral profil, apakah terdapat bentuk
  cranium berbelah

83

• b. Tampak depan, diuji bentuk dan ukuran
  mata(tertutup), telinga, hidung, rahang
  moncong.
• 3. . Limb, diteliti bentuk, ukuran, posisi, jml
  jari serta dalamnya celah jari.

84

• Malformasi Eksternal
• Cranioorachischisis
• Gastrochisis
• Umbilical hernia
• Toracopagus twins
• Spina bifida
• Polydactily
• Ectodactily
• Syndactily

85
(No Transcript)
86
(No Transcript)
87
(No Transcript)
88
(No Transcript)
89
(No Transcript)
90
(No Transcript)
91
(No Transcript)
92
(No Transcript)
93
(No Transcript)
94
(No Transcript)
95
(No Transcript)
96
(No Transcript)
97
(No Transcript)
98
(No Transcript)
99
(No Transcript)
100
(No Transcript)
101
(No Transcript)