IX Semana de Biologia da UFPB

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IX Semana de Biologia da UFPB
Biossegurança e Rotina Laboratorial
Laboratório de Genética de Microrganismos - DBM
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Técnicas Microbiológicas
Biossegurança
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Biossegurança
Conjunto de procedimentos, ações,
técnicas, metodologias, equipamentos e
dispositivos capazes de eliminar ou minimizar
riscos inerentes às atividades de pesquisa,
produção, desenvolvimento, tecnológico, ensino e
prestação de serviços, que podem comprometer a
saúde do homem, dos animais, do meio ambiente ou
a qualidade dos trabalhos desenvolvidos.
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Histórico
1941 Meyer e Eddie 74 casos de brucelose
associados a laboratórios
Conclusão A manipulação de culturas, espécies
ou inalação de poeira contendo a bactéria
Brucella é eminentemente perigosa para os
trabalhadores de um laboratório.
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Histórico
1949 Sulkin e Pike Pesquisa sobre infecções
associadas a laboratórios
222 infecções, sendo 21 fatais 12 por
acidentes relatados
1951 - Sulkin e Pike Nova pesquisa
1342 casos de infecções, sendo 72 das infecções
por brucelose, tuberculose, tifo e infecção
estreptocócica
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Histórico
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Histórico
1974 Classificação de Risco dos Agentes
Etiológicos
1980 Precauções universais na manipulação de
fluídos corpóreos
1984 Primeiro Workshop Brasileiro de
Biossegurança - Fiocruz
1995 Lei Brasileira de Biossegurança Lei
897/95
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Histórico
1999 Fundação da Associação Nacional de
Biossegurança (ANBio)
1999 Primeiro Congresso Brasileiro de
Biossegurança
2000 Biossegurança como discíplina científica
universitária
2001 Indução de ações em biossegurança pelo CNPq
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Tipos de Riscos

• Físicos
• Químicos
• Biológicos
• Acidentes e Ergonômicos

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Tipos de Riscos

• Físicos
• Químicos
• Biológicos
• Acidentes e Ergonômicos

• Provocados por algum tipo de energia
• A caracterização depende do equipamento
• Principais
• Equipamentos que geram calor ou chamas
• Equipamentos de baixa temperatura
• Material radioativo

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Tipos de Riscos

• Físicos
• Químicos
• Biológicos
• Acidentes e Ergonômicos

• Conhecimento das substâncias químicas
• Cuidados adequados para o manuseio.

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Tipos de Riscos

• Físicos
• Químicos
• Biológicos
• Acidentes e Ergonômicos

• Decorrentes da exposição à produtos de animais,
  vegetais e microrganismos
• - Agentes microbiológicos
• Grau de patogenicidade
• Poder de invasão
• Resistência a esterilização
• Virulência
• Capacidade mutagênica
• - Vias de contaminação.

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Tipos de Riscos

• Físicos
• Químicos
• Biológicos
• Acidentes e Ergonômicos

• Fatores que gerem situações de risco para a
  integridade física e moral
• Fatores que possam interferir nas
  características psicofisiológicas.

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Classificação dos Microorganismos

• Classe 2
• Risco individual moderado e baixo risco para a
  comunidade.
• Nível de Segurança 2

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Uso de Barreiras

• Equipamentos de Proteção Individual (EPI)
• Proteção contra o contato com agentes
  infecciosos, tóxicos ou corrosivos, calor
  excessivo, fogo dentre outros.

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(No Transcript)
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Uso de Barreiras

• Equipamentos de Proteção Coletiva
• Proteção dos pesquisadores, do ambiente e da
  pesquisa desenvolvida.

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Biossegurança
Manuseio de produtos biológicos envolve

• Limpeza
• Desinfecção
• Esterilização

• Descontaminação
• Anti-sepsia
• Assepsia

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Esterilização
Processos Físicos

• Calor
• Radiação
• Filtração

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Esterilização
Processos Físicos

• Calor úmido (vapor sob pressão) Autoclave,
  maior poder de penetração e redução do número de
  microrganismos.
• - Calor seco - Incineração, flambagem ar quente
  (estufa)

• Calor
• Radiação
• Filtração

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Esterilização
AUTOCLAVE - Dispositivo selado que permite a
entrada de vapor sob pressão.
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Esterilização
ESTUFA - Calor seco Ação desnaturação das
proteínas microbiana
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Esterilização
Processos Físicos

• Flambagem
• Esterilização de alças e agulhas.

• Calor
• Radiação
• Filtração

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Esterilização
Processos Físicos

• - Radiação eletromagnética
• Exemplos
• microondas
• radiação ultravioleta
• raios X
• raios ?
• elétrons

• Calor
• Radiação
• Filtração

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Esterilização
Radiação ultravioleta Capela de Fluxo Laminar
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Esterilização
Processos Físicos

• Remoção dos microrganismos de líquidos e gases
  sensíveis ao calor
• Glicose
• Antibióticos
• Reagentes químicos

• Calor
• Radiação
• Filtração

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Esterilização
Tipos de filtros
A) B) C)

1. Filtro de profundidade
2. Membrana filtrante
3. Filtro de trilhas de nuleação

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Esterilização
Filtração
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Esterilização
Filtro de trilhas de nucleação - microscopia
eletrônica de varredura
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Esterilização
Produtos Químicos Desinfetantes e Esterilizantes
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Biossegurança

• Atividades no laboratório
• Planejamento das tarefas
• Condições adequadas
• Material necessário
• Maior segurança
• Menor desperdício

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Técnicas Microbiológicas
Rotina Laboratorial
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Cultivo e Manutenção

• Meios de Cultura
• Mistura de nutrientes requeridos para a
  sobrevivência e crescimento dos microorganismos
  em um sistema artificial.
• Podem ser em caldo (líquido) ou ágar (sólido).
• Meios líquidos - úteis para a obtenção de grande
  biomassa de microrganismos

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Cultivo e Manutenção

• Meios quimicamente definidos
• (Meios com finalidades especiais)
• Meios seletivos
• Meios diferenciais
• Meios de enriquecimento
• Meios para anaeróbios
• Meios para o cultivo de bactérias (Geral-BHI)

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Métodos de Cultivo

• Inoculação
• Técnica de esgotamento por estrias
• Técnica da semeadura em superfície
• Inundação
• Diluição por extinção
• (Obtenção de cultura pura, originada à partir de
  uma única célula (UFC) A suspensão original da
  amostra é diluída seriadamente e semeiam-se
  amostras de cada diluição)

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Medida do Crescimento

• Método Quantitativo
• Avaliação do número de células - UFC/mL
  Unidades Formadoras de Colônias por mL
• ex. Contagem celular microscópica ou
  eletrônica, contagem em placa ou através de
  membrana filtrante.
• Método Qualitativo
• Avaliação do peso celular ou estimativa de
  unidades de absorbância da massa de células em
  caldo ou suspensões (turbidez).

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Identificação dos Microorganismos

• Características Culturais
• Morfologia Colonial
• Características Morfológicas
• Coloração simples
• Coloração diferencial
• Coloração de Gram

• Microscopia Óptica
• Características Metabólicas
• Características Fisiológicas
• Características Antigênicas
• Características patogênicas
• Características genéticas

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Estocagem

• Conservação de Culturas Puras
• Conservação por um curto período (dias a meses)
• Armazenagem à temperatura de refrigeradores (4C
  a 10C) - Repiques freqüentes
• Conservação por longos períodos
• Nitrogênio líquido a -196C
• Freezers a -70C/ -120C
• Liofilização congelamento a seco - viabilidade
  das culturas por muitos anos - coleção de
  microrganismos como referência.

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Material
Tubos de Cultura e Placas de Petri
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Material
Instrumentos para Transferência de Culturas
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Obrigada!!!!!