METODOS EN ENDOCRINOLOGIA

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METODOS EN ENDOCRINOLOGIA
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Métodos para la detección hormonal

• Muestra Biológica
• Ensayo químicos
• Estructura
• Bioensayos
• Función
• Mecanismo
• Estructura
• Inmunoensayos
• Estructura
• Histología
• Síntesis
• Órgano blanco
• Análisis de receptores
• Órgano blanco
• Mecanismos

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Métodos para la detección hormonal

• Determinación químicos
• Estructura química, secuencia

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• Medición de composición
• Cromatografía.Separa ácidos nucleicos, proteínas,
  azúcares. Se puede correlacionar la presencia de
  un compuesto en un fluido con la actividad del
  tejido u órgano.
• Existen varias matrices que separan los
  componentes según carga, tamaño, insolubilidad en
  agua o afinidad de unión con la matriz (beads
  unidos a anticuerpos o receptores). Este tipo de
  cromatografía es muy útil para purificar
  proteínas u otras moléculas que estan presentes
  en muy baja concentración.

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• HPLC High Performance Liquid Chromatografy.
  Pueden visualizarse proteínas, lípidos, ADN, RNA
  u otros compuestos como residuos de antibióticos
  en los tejidos
• Electroforesis. Ampliamente usada en separ
  proteínas o ácidos nucleicos
• Medición de concentración
• Preparación de curvas estandares que permiten
  comparar concentraciones conocidas con las de una
  muestra desconocida

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HPLC
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(No Transcript)
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• Determinación Biológica
• Bioensayos
• Actividad biológica
• Clara asociación de la hormona y del efecto
  biológico que produce
• La reacción biológica debe ser dosis dependiente
  (curva dosis respuesta)
• El material de prueba debe ser homogeneo

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Relaciones dosis-respuesta
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• Determinación Biológica
• Ensayo de receptores
• Estudio de la unión de una molécula con su
  receptor
• No mide receptores sino que sitios de unión. Para
  asegurarse que ese sitio de unión corresponde a
  un receptor debe caracterizarse.
• Sirve como complemento a los bioensayos

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Medición de receptores
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(No Transcript)
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Determinaciones inmunológicas

• Uso de anticuerpos
• Anticuerpos acoplados a reactivos que dan algún
  tipo de señal (color, fluorescencia)
• Anticuerpos Monoclonales
• Anticuerpos Policlonales
• Radioinmunoensayo (RIA)
• IRMA
• ELISA
• Fluorescencia
• Quimioluminiscencia
• Sistema Biotina-Avidina

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Principios del RIA
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(No Transcript)
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Determinaciones inmunológicas

• RIA desarrollados en el laboratorio
• Testosterona
• Progesterona
• Estradiol (Coat-A-Count, y con antisuero)
• Cortisol
• Insulina (anticuerpo de cobaya contra insulina
  humana) (Antisuero)
• LH (iodación)

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Enzyme linked immunoabsorbent assay
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• Medición de PMSG (Pregnant Mare Serum
  Gonadotropin) mediante ELISA en el Laboratorio

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IRMA
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Determinaciones Histológicas
Torres et al., 2003