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1
Un nouvel ARN épissé chez les rétrovirus
leucémogènes murins (MuLV)
2
Rétrovirus simples et complexes
gag
pol
MuLV
env
LTR
simple
LTR
gag, pol
AAA
env
AAA
rev
gag
vif
vpu
nef
tat
VIH
complexe
LTR
LTR
pol
env
vpr
gag, pol
AAA
vif
AAA
vpr
AAA
vpu, env
AAA
tat
(
)
(
)
AAA
(
)
(
rev
)
AAA
nef
(
)
)
(
)
(
AAA
de Coffin,Hughes,Varmus eds.  Retroviruses at
NCBI 
3
Existence dun épissage alternatif chez MuLV
Northern
Friend
mock
FDV
genomique
28S
ARN 4-5 kb
env ARNm
18S
8.3 kb
SD '
1597

4.4 kb
SD '
4
Le site donneur d'épissage SD' est conservé chez
tous les rétrovirus leucémogènes simples 
8.3 kb
SD 
1
5
9
5
1
6
0
2
Friend-MuLV
g
-
-

-
-
A
g
-
o
l
M
o
n
e
y
-
M
u
L
V
C
-
-

-
-
A
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-
R
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L
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-
-

-
-
A
g
-
C
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-
B
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-
E
g
-
-

-
-
A
g
-
N
-
t
r
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p
i
c

W
N
B
5
g
-
-

-
-
A
g
-
B
-
t
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p
i
c

W
N
B
5
A
-
-

-
-
A
g
-
A
K
V
g
-
-

-
-
A
g
-
MuLV
p
o
l
y
t
r
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p
i
c

M
C
F
A
-
-

-
-
A
g
-
s
C
-
-

-
-
A
g
-
F
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L
V
-
B
C
-
-

-
-
A
g
-
Simiens
T
y
p
e


C
B
a
E
V
C
-
-

-
-
A
g
-
G
a
L
V
C
-
-

-
-
A
g
-
FeLV
T
y
p
e


D
C
-
-

-
-
u
c
-
M
P
M
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C
-
-

-
-
A
-
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S
R
V
-
P
c
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n
o
u
s
g
-
-

-
-
A
g
-
p
o
r
c
i
n
e
GaLV
5
(No Transcript)
6
Expression indépendante des composants viraux par
3 vecteurs
?
IRES
gag pol
?
AP
LTR
LTR
Génome
?
gag pol
?
SD
GagPol
CMV
env
Env
LTR
LTR












7
sauvage
Titres viraux (FFU/ml)
8
Abondance relative des différents ARN viraux
produits dans une cellule infectée
gag
pol
env
Psi
AAAAAA
SD
SA
SD
amorces de PCR
Oligo dT
2
5
1
4
3
amorce de RT
RT-PCR
Real time RT-PCR
Cellules
- MuLV
MuLV
FL
SD
env
GAPDH
9
cellules
virions
104
FL
103
SD'
813
1177
RT-PCR
227
env
102
(4)
63
GAPDH
29
10
(2,5)
Nbre de copies d ARN par cellule
1
1,5
10-1
(0,002)
10-2
10-3
(0,0006)
(efficacité d'encapsidation en )
10
L'ARN SD' participe t-il aux phases précoces de
l'infection?
Real time PCR
ADN
11
Expression de l'ARNm SD' dans les cellules
murines
anti-IN (de FD. Bushman)
anti-intégrase (de D. Bushman)
SD'/GFP
GFP
SD'
SD'
mock
121.3
77 kDa SD/GFP
85.9
68.8
SD '/GFP (77 kDa)
50 kDa SD 
52.5
40
45 kDa IN
28.4
- MuLV
MuLV
gt Détection avec un anti-matrice (don de
M. Miyazawa) gt utilisation du AUG de gag
et du codon stop de pol
Brevet, Mougel et al, 2002
12
Localisation de p50/GFP dans les cellules NIH3T3
chroniquement infectées
A
pn
m
10 mm
13
Microscopie sur cellules vivantes SD'/GFP dans
NIH3T3 infectées
14

aL'ARN SD' est requis pour un pouvoir infectieux
optimal son apport en trans complémente un virus
mutant dépourvu du site SD'
aL'ARN SD' partage plusieurs caractéristiques
essentielles avec l'ARN génomique encapsidation,
transcription inverse et intégration un nouveau
provirus MuLV
aL'ARNm SD' code une protéine de 50 kDa qui
comprend des domaines de Gag et de Pol
15
Infections Rétrovirales et Signalisation
Cellulaire CNRS UMR 5121/Université Montpellier
1 Directeur Christian Devaux
Métabolisme des ARN rétroviraux et réplication
rétrovirale (resp. Marylène Mougel)
Laurent Houzet Farida Djouad Mathieu
Laffont Nadège Vernet
Collaboration Jean-Luc
Battini (IGMM, Montpellier) Valérie Thibert
Pierre Travo
16
Analyse in vitro des capacités codantes de lARN
SD'
XhoI
gag
pol
FL (génomique)
env
AUG
CUG
AUG
XhoI
SD'
SD'/SA