ELECTROFORESIS

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ELECTROFORESIS

• Movimiento de partículas cargadas por acción de
  un campo eléctrico

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MOVILIDAD ELECTROFORÉTICA

• Estado estacionario
• q.E f.v
• (f coef. de fricción)
• q.E 6??r.v
• q.E 6??rme.E
• me q / 6?r?

• v (cm/seg) me.E
• me v/E d/t.E

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(No Transcript)
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FACTORES QUE AFECTAN LA ELECTROFORESIS
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ELECTROFORESIS FACTORES ELÉCTRICOS

• F q.E
• fuerza electromotriz trabajo
• E I.R
• P dW/dt
• P E.dq/dt E.I
• trabajo por unidad de tiempo POTENCIA

• Desarrollo electroforético
• Voltaje constante
• Corriente constante
• Potencia constante

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ELECTROFORESISEfecto del sobrecalentamiento

• EFECTOS
• ? me
• ? ? ? ? R
• ? difusión
• ? ? ? ? C ? ? I
• ? corrientes convectivas
• desnaturalización ? pérdida de actividad
  enzimática o inmunológica
• otras

• P dH/dt
• energía convertida en calor
• En un sistema de resistencia R
• P I2.R I.V
• Causas de sobrecalentamiento
• ? I
• ? V
• ? R o ? C

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FACTORES QUE AFECTAN LA ELECTROFORESIS
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Interacciones iónicasELECTROFORESIS Efecto de
la fuerza iónica de la solución reguladora

• Estado estacionario atmósfera iónica esférica
• Cuando se aplica E deformación de la simetría
  esférica con desplazamiento del centro de carga
  de la atmósfera iónica.
• Efecto de arrastre, la atmósfera iónica se mueve
  en dirección opuesta a la del ion central.
  Reducción de la carga neta efectiva.
• me ? (1/?)1/2

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ELECTROFORESISEFECTO DE LA FUERZA IÓNICA DE LA
SOLUCIÓN REGULADORA

• Fuerza iónica baja
• ? C ? ? I ? permite gt V ? lt tiempo ?
• lt difusión
• ? capacidad buffer ?
• modificaciones de pH

• Fuerza iónica alta
• ? disolución
• ? difusión
• ? capacidad buffer
• ? C ? I ? debe aplicarse lt V ? gt tiempo
• µ ? 0,02 - 0,1 M

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ELECTROFORESISEfecto del pH de la solución
reguladora

• Modificación de la carga eléctrica de las
  proteínas
• Sentido de la electroforesis
• LIMITACIONES
• Cambios en la solubilidad de los compuestos
• Desnaturalización de proteínas
• Alteración de las propiedades inmunológicas y/o
  enzimáticas

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FACTORES QUE AFECTAN LA ELECTROFORESIS
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MEDIOS SOPORTE Materiales insolubles en
sistemas acuosos, utilizados para disminuir las
corrientes convectivas

• EFECTOS QUE INTRODUCEN EN LOS PROCESOS
  ELECTROFORETICOS
• Adsorción en el medio
• Inhomogeneidad de la matriz del material
• Electroendósmosis
• Difusión
• Efecto tamiz molecular
• CONSIDERACIONES PARA SU ELECCION
• Poder resolutivo
• Limitación de la magnitud del campo eléctrico
• Facilidad de manipulación, tinción y decoloración
  
• Posibilidad de valoración cuantitativa de los
  resultados
• Costo
• MEDIOS SOPORTE PARA ELECTROFORESIS
• Membranas de acetato de celulosa
• Geles almidón, agar, agarosa, poliacrilamida
• Otros Papel, Sephadex, polvo de celulosa, sílica
  gel, óxido de Al

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ElectroendósmosisFormación de doble capa
eléctrica

• E 0
• Asociación anión-contraión, ambos hidratados.
• E ? 0
• Aniones inmóviles.
• Desplazamiento de cationes hidratados.
• Efecto flujo neto de líquido que se desplaza
  hacia el cátodo

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MEMBRANAS DE ACETATO DE CELULOSA

• ESTRUCTURA
• Inerte. Frágil y sensible a solventes
• FACTORES DIFERENCIALES
• Longitud de la cadena de celulosa
• Grado de acetilación (1- 40 )
• Tamaño y distribución de los poros
• Volumen de los poros comparados con la matriz
  sólida (20-85)
• Agentes hidratantes y grado de hidratación del
  acetato de celulosa
• Compuestos residuales del proceso de acetilación
• CONDICIONES DE TRABAJO
• Proceso de humectación previo para permitir que
  los poros sean lubricados por la solución buffer
  (equilibrio)
• UTILIDAD
• Buenas separaciones a bajo voltaje y en tiempos
  cortos
• Posibilidad de revelados diferenciales
• Puede ser transparentizado blanqueado o disuelto
  para el análisis por densitometría o eluido de
  las fracciones

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FACTORES QUE AFECTAN LA ELECTROFORESIS
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DESARROLLO ELECTROFORÉTICO
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ELECTROFORESIS TINCIONES
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DENSITÓMETRO
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• Zona Prealbúmina
• Zona Albúmina
• Zona Alfa 1
• Zona Alfa 2
• Zona Beta 1
• Zona Beta 2
• Zona Gamma

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DENSITOMETRÍA CORRESPONDIENTE A EUPROTEINEMIA
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PROTEINASCOMPONENTES DE FRACCIONES
ELECTROFORÉTICAS

• ZONA PREALBÚMINA
• PREALBÚMINA (TTR, transtiretina 54.000 4,7)
  transporta tiroxina y triyodotironina
• PROTEÍNA LIGANTE DE RETINOL (RBP 21.000) en
  complejo con prealbúmina transporta vitamina A
• Indicadores de malnutrición y enfermedad
  hepática.
• ZONA ALBÚMINA
• ALBÚMINA (66.000 4-5,8) Gran capacidad de
  transporte por la elevada concentración y la
  cantidad de cargas negativas une bilirrubina,
  ácidos grasos, hormonas (tiroxina,
  triyodotironina, cortisol, aldosterona, drogas,
  calcio).
• Mantenimiento de la presión oncótica del plasma.
  Indicador de estado nutricional.
• MOVILIDAD ALFA 1
• ?1-ANTITRIPSINA (AAT 55.000 4,8) Reactante de
  fase aguda con actividad antiproteasa (actúa
  contra quimotripsina, calicreína, renina,
  uroquinasa, plasmina, elastasa y colagenasa).
  Constituye casi el 90 de la banda proteica de la
  zona.
• ?1-GLICOPROTEINA ACIDA (40.000 2,7-4,0)
  Asociada con inflamación.
• ?1-FETOPROTEINA (69.000) Mayoritaria en la
  circulación fetal. En el adulto, marcador de
  carcinoma hepatocelular.
• ?1-LIPOPROTEINA (HDL, 200.000) Transportadora de
  lípidos (Apo A).

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• MOVILIDAD ALFA 2
• HAPTOGLOBINA (Hp 80.000-400.000) Transportadora
  de oxihemoglobina en plasma. Proteína de fase
  aguda.
• ?2-MACROGLOBULINA (AMG 800.000 5,4) En forma
  de AMG-complejos con proteasas (plasmina,
  pepsina, tripsina, quimotripsina) impide la
  proteolisis de compuestos de gran tamaño.
• CERULOPLASMINA (CER 134.000 4,4)
  Transportadora de cobre, cataliza procesos
  oxidativos. Proteína de fase aguda.
• VLDL-LIPOPROTEÍNA relación con TG endógenos
  (zona pre-beta).
• MOVILIDAD BETA 1
• TRANSFERRINA (SIDEROFILINA 77.000 5,7)
  Transportadora de hierro (es capaz de unir otros
  iones metálicos).
• HEMOPEXINA (57.000) Une hemo.
• ?-LIPOPROTEINA (LDL, 3.000.000) Transportadora
  de lípidos.
• C4 (206.000) Factor del sistema de complemento.
  Proteína de fase aguda.
• MOVILIDAD BETA 2
• FIBRINOGENO 340.000 5,5) Proteína de fase
  aguda. Precursor del coágulo de fibrina.
• ?2-MICROGLOBULINA (11.800) Cadena liviana de los
  antígenos de histocompatibilidad de leucocitos.
  Marcador de insuficiencia funcional renal.
• C3 (180.000) Factor de complemento. Proteína de
  fase aguda.
• MOVILIDAD GAMMA

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PROTEINOGRAMASNormal - Inmunoglobulinas
monoclonales Hiperinmunoglobulinemia policlonal
- Fase aguda