Iris

1
(No Transcript)
2
Cromatografia hidrofóbica

• Separacion de las proteínas por diferente
  hidrofobicidad
• Interaccíon reversible entre la proteína y la
  superficie hidrofóbica del medio cromatográfico
• La interaccion ?? con alt fuerza iónica
• Desorción ? decreciente de salina

3
Cromatografia hidrofóbica
4
Cromatografia hidrofóbica

• Distintos ligandos
• fuerza
• Eterlt isopropilltbutilltoctilltfenil
• No se puede predecir el comportamiento de la
  proteína
• ? Kit test

5
Cromatografia hidrofóbica

• HiTrap HIC Selection Kit
• -Seleccionar el ligando apropiado y las
  condiciones experimentales
• 5 medios con distintas características
  hidrofóbicas
• para screening y selección a pequeña escala
• Phenyl Sepharose High Performance
• Phenyl Sepharose 6 Fast Flow (low sub)
• Phenyl Sepharose 6 Fast Flow (high sub)
• Butyl Sepharose 4 Fast Flow
• Octyl Sepharose 4 Fast Flow

6
Cromatografia hidrofóbica
7
Adsorción
En agua pura los efectos hidrofóbicos son muy
débiles para causar la interacción de la proteína
con el ligando. Ciertas sales aumentan las
interacciones hidrofóbicas?se pegan al ligando

Fig 1.7. HIC deals with the relation between
water shells around hydrophobic surfaces, bulk
water clustersand salts enhancing hydrophobic
interaction.
Las siguientes sales aumentan la interacción
hidrofóbicaNa2SO4 gt K2SO4 gt (NH4)2SO4 gt NaCl gt
NH4Cl gt NaBr gt NaSCN
8
Para lograr una desorción selectiva la
concentración de sal se disminuye de forma
gradual y los componentes eluyen en orden de
hidrofobicidad
Fig 1.8. The adsorption of hydrophobic
moleculesis a reversible reaction whose
equilibriumis controlled by the salt
concentration.
9
Cromatografia hidrofóbica
10
Cromatografía de afinidad
11
Cromatografía de afinidad