CULTIVO IN VITRO DE VEGETALES

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CULTIVO IN VITRO DE VEGETALES
Dra María Alejandra Alvarez
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Cultivo de tejidos

• Presupone el cultivo de plantas o partes de
  plantas (explantos) en un medio de cultivo
  apropiado
• El cultivo se desarrolla en condiciones de
  temperatura, humedad, fotoperíodo e irradiancia
  controlados.
• La manipulación se realiza en cabinas de flujo
  laminar
• Esta técnica es importante en la propagación de
  especies de interés agroforestal micropropagación

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• Producen innumerables productos de importancia en
  la industria farmacéutica, cosmética y
  alimentaria, como alcaloides, compuestos
  aromáticos o pigmentos.
• Los cultivos in vitro permiten obviar los
  inconvenientes derivados de condiciones
  geográficas, climáticas y de tiempo de
  producción.

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Cultivo in vitro
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• Plasticidad
• Totipotencialidad
• Es la capacidad de una célula vegetal de dar
  lugar al desarrollo de una planta completa Las
  células totipotentes son células somáticas que
  han retenido su capacidad de dividirse y
  diferenciarse en una planta madura si se coloca
  en el medio adecuado.

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Cultivo de células vegetales

• Definición
• Cultivo aséptico in vitro de cualquier parte de
  una planta en un medio nutritivo.
• Tipos de cultivos
• cultivo de células
• cultivo de tejidos
• cultivos de órganos

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(No Transcript)
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Cultivos vegetales

• Cultivos agronómicos
• Cultivos in vitro
• Cultivos diferenciados ( raíces, tallos,
  embriones, raíces y tallos transformados)
• Cultivos indiferenciados ( callos, suspensiones)

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Cultivos indiferenciados

• Callos en medio sólido, crecimiento lento, gran
  heterogeneidad celular,
• Cultivos en suspensión derivan de los
  anteriores, en medio líquido de composición
  adecuada, crecimiento más rápido y homogéneo.
• Composición del medio de cultivo. Fuente de
  carbono, minerales, vitaminas, fitohormonas
  (auxinas, citoquininas)

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Callos

• Tejidos no diferenciados ( a veces
  diferenciados), en división activa.
• Frecuentemente se desarrollan a partir de
  heridas.

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Medio de cultivo

• Mezcla de sustancias en los que las células,
  tejidos y órganos pueden.
• Sustancias inorgánicas N, P, K, Ca, Mg, Cl, Na
• Cu, Zn, Mn, Fe, Bo, Mo, Co, I
• Suplementos orgánicos complejos leche de coco,
  extracto de levadura.
• Reguladores de crecimiento hormonas.
• Fuente de carbono sacarosa
• Con o sin agar medio semi -sólido o líquido.

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Reguladores de crecimiento

• Hormonas/ Fitohormonas
• Auxinas grupo de hormonas vegetales (naturales o
  sintéticas) que inducen la elongación, o en
  algunos casos la división celular.
• Frecuentemente inducen raíces adventicias e
  inhiben la formación de tallos adventicios.
• Cytokininas grupo de hormonas vegetales
  (naturales o sintéticas) que inducen división
  celular y frecuentemente tallos adventicios y en
  muchos casos inhiben la formación de raíces
  adventicias.
• Reglas generales para la acción hormonal
• Auxina Cytokinina 1 Callo
• Auxina Cytokinina lt 1 Tallo
• Auxina Cytokinina gt 1
  Raíces

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Terminología y técnicas

• 1. Explanto porción de tejido u órgano que se
  separa de la planta para iniciar el cultivo.
• 2. Esterilización procedimiento para la
  eliminación de microorganismos.
• Autoclave aparato en el que el medio, material
  d vidrio, instrumental, etc., es esterilizado por
  vapor bajo presión (121oC, 15 psi, 10-20 min.).
• Requerimientos de asepsia desinfección de
  superficie del explanto generalmente usando
  lavandina comercial diluido para evitar el
  desarrollo de microorganismos.
• Cabina de flujo laminar área de trabajo,
  mantenida estéril por el flujo continuo, no
  turbulento de aire estéril.

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• Subcultivo pasaje de células, tejidos, órganos,
  etc. Desde un medio de cultivo agotado a otro
  medio fresco.
• Micropropagación propagación vegetativa in vitro
  de plantas.

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• Diferenciación desarrollo de células o tejidos
  con una función específica y/o regeneración de
  órganos, estructuras tipo órganos (raíces,
  tallos) o embriones.
• Adventicios desarrollo de órganos (raíces,
  yemas, tallos, flores, etc.) o embriones
  (embryo-like structures) desde puntos de origen
  no usuales, incluyendo callos.

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Organogénesis (formación de órganos)

• Formación de tallos, raíces, flores, etc.
• Regeneración de una planta completa!!

Explanto
Organogénesis
Formación de tallos
Formación de raíces
Enraizamiento
Tallos
Planta completa
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Embriogénesis (formación de embriones)

• Proceso mediante el cual se desarrolla un
  embrión a partir de una célula huevo fertilizada
  o asexualmente desde un grupo de células
  somáticas (embriogénesis somática).

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Embriogénesis Somática

• Procedimiento para la regeneración vía
  embriogénesis somática
• 1. Iniciación callos embriogénicos
• 2. Proliferación callos embriogénicos, masas
  proembriogénicas (PEM)
• 3. Desarrollo y maduración de embriones
  embriones
• 4. Germinación de embriones (Regeneración)
• Estadíos de desarrollo en dicotiledóneas
• Masas proembriogénicas
• Estadío globular
• Torpedo
• Embrión somático

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Semillas artificiales

• Semillas sintéticas (artificiales)
• 1. Producción en masa de semillas genéticamente
  mejoradas.
• 2. Procedimientos
• Encapsular en cápsulas de gel, recubrir con una
  cubierta adecuada, almacenar
• 3. Encapsulación de embriones somáticos
  protección, nutrición, permeable al agua,
  biodegradable.
• Polímeros gel de alginato, gelatina, agar, goma,
  etc.

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Variación Somaclonal

• Variación fenotípica, genética o epigenética en
  su origen.
• Permite describir la variabilidad genética
  observada en tejidos regenerados a partir de
  cultivos in vitro
• Es común cuando se regeneran plantas a partir de
  callos, o cuando los cultivos se establecen a
  partir de explantos que no contienen un meristema
  pre-organizado.
• En muchos casos, el grado de variación es
  proporcional a la duración del cultivo in vitro.
• Se aplica para mejora de cultivos

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Aislamiento de protoplastos

• Protoplasto célula vegetal sin pared celular
• Procedimiento
• (1). Digestión de la pared celular celulasa,
  hemicelulasa, pectinasa
• (2). Regeneración de la pared celular usualmente
  dentro de las 24 hrs
• (3). División celular la primera división ocurre
  dentro de las 24-48 hrs
• (4). Proliferación y diferenciación

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Protoplastos
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Aislamiento, cultivo y fusión de protoplastos

• Aplicaciones
• 1. Remoción de pared para captación de DNA
  Microinyección y electroporación
• 2. estudios de síntesis de pared celular,
  transporte de membrana, citoesqueleto.
• 3. estudio de desarrollo de embriones somáticos.
• 4. hibridización somática (cybridización) de
  especies sexualmente compatibles o incompatibles,
  por fusión de protoplastos se obtiene un nuevo
  germplasma.

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(No Transcript)
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(No Transcript)
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Aplicaciones

• 1. Mantenimiento del background genético deseado
  micropropagación
• 2. Producción en gran escala de cultivares
  apropiados embriogénesis somática
• 3. Síntesis de productos usando técnicas de
  cultivo continuo
• 4. Eliminación de virus y otros patógenos
• 5. Regeneración de plantas obtenidas por
  ingeniería genética

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Cultivos diferenciados

• Raíces y tallos transformados obtenidas por
  transformación genética con la bacteria patógena
  del suelo Agrobacterium sp.
• Se pueden usar para la producción de metabolitos
  derivados de raíces, crecimiento rápido, mayor
  estabilidad genética, mayor productividad.

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Tecnología del ADN recombinante

• El uso de la biotecnología moderna implica,
  inicialmente, el conocimiento y aislamiento de
  secuencias de ADN que corresponden a genes
  responsables de conferir una característica
  deseada (fenotipo)
• El aislamiento de los genes de interés es
  realizado por medio de técnicas de clonado
  molecular

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Clonado molecular

• Inducción de la amplificación de una secuencia de
  ADN en un organismo vivo.
• Vectores de clonado (plásmidos o virus) vectores
  en los que la secuencia de ADN es introducida
  usando una DNA ligasa. Cuando es necesario el
  fragmento de ADN de interés puede ser liberado
  del vector por medio de enzimas de restricción.
• Una vez aislados los genes de interés son
  incorporados al organismo blanco resultando en un
  organismo genéticamente modificado (OGM) y esta
  característica adquirida pasa a ser hereditaria

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• Es posible transferir genes de animales,
  bacterias o virus a las plantas.
• Se amplían los recursos para el mejoramiento
  genético.
• Los genes de un organismo que son insertados en
  otro se denominan transgenes y tienen la
  capacidad de conferirle a este último una
  determinada característica.

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Organismos transgénicos

• Son excelentes modelos para el estudio de
  procesos generales básicos como regulación de la
  expresión génica y la genética molecular del
  desarrollo y diferenciación celular
• Ofrecen la posibilidad de corrección de numerosas
  enfermedades hereditarias terapia génica

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Organismos transgénicos

• Pueden funcionar como bioreactores para la
  producción de proteínas valiosas o con propósitos
  industriales
• Deben ser capaces de producir la proteína de
  interés en niveles aceptables sin comprometer el
  normal funcionamiento de sus células
• Deben tener la capacidad de transmitir esta
  característica a las siguientes generaciones
• En el caso de ser un organismo multicelular deben
  ser capaces de producir la proteína exógena en un
  órgano definido

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Estrategia actual

• Acoplar a la secuencia de ADN que codifica para
  la proteína de interés secuencias de ADN que
  contengan señales responsables de dirigir altos
  niveles de producción (promotor) de la proteína
  deseada en un órgano específico.
• Las técnicas para la inserción de ADN en células
  vegetales (transformación) usadas son
• Infección con Agrobacterium tumefaciens
• Electroporación de protoplastos
• Método biolístico

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Avances

• Los primeros experimentos a campo con plantas
  transgénicas se realizaron en 1986 en Estados
  Unidos y en Francia.
• En 1996 y 1997 el número de países que ensayó
  plantas transgénicas a campo aumentó a 45
  habiéndose realizado en 2 años mas de 10 mil
  experimentos.
• Los cultivos más usados fueron maíz, tomate,
  soja, batata, algodón, canola.
• Las características genéticas introducidas son
  tolerancia a herbicidas, resistencia a insectos,
  calidad de producto y resistencia a virus.

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Clonado de plantas

• La técnica del clonado in vitro es posible
  mediante el cultivo de tejidos
• Esta técnica se basa en la totipotencialidad de
  las células vegetales, por medio de la
  regeneración in vitro, vía organogénesis o
  embriogénesis somática

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Transformación

• Se producen cambios por inserción de un gen
  proveniente de otro organismo
• La transferencia de DNA/genes de un organismo a
  otro se realiza sin necesidad de reproducción
  sexual.
• La transformación exitosa depende de la
  incorporación estable del gen nuevo en el genoma
  de la planta receptora y su subsiguiente
  transmisión a sucesivas generaciones.

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Transformación

• Requerimientos
• Mecanismo de transferencia del gen
• Mecanismos de transferencia indirecta
• Mecanismos de transferencia directa
• Sistemas de regeneración

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Transformación indirecta

• Mediada por Agrobacterium
• Agrobacterium es una bacteria patógena del suelo
  para dicotiledóneas y algunas coníferas.
• Agrobacterium tumefaciens crown gall disease
  (tumors)
• Agrobacterium rhizogenes hairy root disease
  (hairy roots)
• Las Monocotiledóneas presentan resistencia
  natural a Agrobacterium.

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Transformación

• Agrobacterium tumefaciens crown gall disease
• Crown gall disease produce nódulos anormales en
  raíces. Los árboles jóvenes no crecen, en los
  árboles adultos la corteza se pudre.
• Esta bacteria entra al árbol a través de heridas.

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(No Transcript)
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Transformación

• Agrobacterium tumefaciens
• La enfermedad crown gall resulta de la expresión
  de genes codificados por un segmento de DNA de la
  bacteria que se transfiere e integra en forma
  estable al genoma vegetal
• El fragmento de DNA bacteriano contiene genes que
  producen hormonas cuando se expresan en las
  células vegetales ocasionando divisiones y
  crecimiento anormales (tumores).
• Agrobacterium es un ingeniero genético
  natural(1983).
• Es un mecanismo de transferencia entre reinos

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Transformación

• Transformación mediada por Agrobacterium
• Plásmido Ti plásmido inductor de tumores (A.
  tumefaciens)
• Plásmido Ri plásmido inductor de hairy roots (A.
  rhizogenes)
• T-DNA DNA que se transfiere
• genes para síntesis de hormonas codifican para
  enzimas involucradas en la biosíntesis de auxinas
  y citoquinias. La expresión de estos genes en la
  célula vegetal causa la enfermedad de agalla de
  corona o la formación de hairy roots
• Secuencias en los bordes 25 bp direct repeats,
  borde derecho (RB) y borde izquierdo (LB),a ambos
  lados del T-DNA. Son los elementos necesarios (en
  la región del T-DNA ) para dirigir la
  transferencia del T-DNA.

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Transformación mediada por Agrobacterium

• PlásmidoTi o plásmido Ri
• Genes de síntesis de opinas responsables de la
  síntesis de nuevas opinas.
• Opinas derivados de aminoácidos o azúcares
  producidos por tejidos vegetales infectados que
  son por Agrobacterium como única fuente de
  carbono/nitrógeno.
• Clasificación de los plásmidos Ti y Ri
• Plásmidos Ti plásmidos Nopalina
• Octopine plasmid
• Agropine plasmid
• Succimanopine plasmid
• Plásmidos Ri plásmidos Manopina
• Agropine plasmid
• Cucumopine plasmid

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(No Transcript)
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Genes involucrados en la transferencia del T-DNA

• Localizados en la región T-DNA
• 1.Genes de síntesis de hormonas
• 2. Secuencias de los bordes LB y RB
• Localizados en cualquier región del plásmido Ti
• 3.Genes de síntesis de opinas
• 4. Genes de virulencia
• Localizados en el cromosoma de Agrobacterium (4
  loci)
• Síntesis de fibrillas de celulosa por
  Agrobacterium para cubrir la superficie de la
  célua vegetal(irreversible). Clusters de Agro son
  entrampadas en la red de fibrillas de celulosa.
• chvA ychvB (linked) síntesis y excreción de
  1,2-glucan
• cel locus síntesis de fibrillas de celulosa
• pscA locus afectan la síntesis de
  cicloglicanos y ácido succinilglicano
• att locus afecta proteínas de la superficie
  celular
• Algunos de estos loci se encuentran conservados
  en otras bacterias del suelo que se interasocian
  con plantas

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Genes Vir y transferencia de genes T-DNA

• Las células vegetales se vuelven sensibles a
  Agrobacterium cuando son heridas.
• El proceso de transferencia se puede dividir en
• En la bacteria proceso de conjugación bacteriana
• En la célula vegetal las células heridas
  producen compuestos fenólicos de bajo PM que
  actúan como inductores específicos de los genes
  de expresión vir.
• Acetosyringona (AS), hirdroxi-acetosyringona
  (OH-AS)
• Estos compuestos fenólicos actúan a través de dos
  sistemas para Regular la expresión de los genes
  vir

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(No Transcript)
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Transformación mediada por Agrobacterium

• Uso del plásmido Ti de Agrobacterium como vector
  de transformación
• Se remueven los genes para hormonas (desarmado)
• Para la transformación de introducen genes en el
  plásmido Ti
• Clonado de DNA
• Genes marcadores para selección de resistencia a
  antibióticos
• Cassetes
• Promotor gen terminador

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Transformación mediada por Agrobacterium

• Ventajas
• Transformación estable
• Desventajas
• No para monocotiledóneas

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Aplicaciones de las técnicas de cultivo in vitro
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Micropropagación

• Mantiene la identidad genética del material
  propagado sin introducir ninguna variabilidad
  genética
• Propagación clonal rápida (floricultura,
  fruticultura, plantas medicinales, silvicultura)
• Eliminación de virus (cultivo de meristemas)
  hibridación o fusión somática (fusión de
  protoplastos)

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• Bancos de germplasma
• Semillas sintéticas (embriones somáticos
  recubiertos de gel de alginato que también
  encapsula nutrientes para el desarrollo del
  embrión)

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Resistencia a insectos

• Puede ser obtenida mediante la utilización de
  inhibidores de proteasas vegetales o a partir de
  toxinas bacterianas (Bacillus thuringiensis), o
  gen Bt
• Como ejemplos de plantas resistentes a insectos
  están el maíz, batata y soja transgénicos

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Tolerancia a herbicidas

• Esta modalidad engloba a la mayor parte de las
  plantas transgénicas actuales
• Ejemplos maíz, eucalipto, soja, caña de azúcar
• Un ejemplo cotidiano es la Soja Roundup Ready

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Resistencia a virus

• Las perspectivas son cada vez mayores a medida
  que aumentan los conocimientos acerca de
  fitovirus
• Silenciamiento génico o protección mediada por
  ARN
• Por medio de la tecnología del Agrobacterium
  tumefaciens o de la biolística y el cultivo de
  tejidos, es posible introducir en la planta genes
  de la cápside viral posibilitándose así la
  adquisición de resistencia por parte de la planta.

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Alteración del color floral

• Dentro del mercado de la floricultura se abren
  nuevas perspectivas con el clonado de genes
  asociados con la coloración de las flores.
• También se abre la posibilidad de modificar la
  arquitectura de la planta y de las flores, las
  fragancias y la mayor durabilidad de las flores.

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Obtención de nuevos productos y alteración de la
calidad nutricional

• La empresa Calgene produjo aceites ricos en ácido
  esteárico.
• Se alteró la composición en hidratos de carbono
  con vistas a la producción de tubérculos de papa,
  aumento del contenido de almidón y reducción de
  amilosa
• En el año 2000 se informó la obtención de arroz
  genéticamente modificado que produce beta-
  carotenos, precursor de la vitamina A

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Ingeniería metabólica

• Es posible alterar rutas metabólicas para
  permitir que las plantas, o sus células,
  funcionen como bioreactores (reactores
  biológicos).
• Es posible, de esta manera, la producción de
  sustancias de valor farmacológico, como por
  ejemplo, vacunas y biofármacos.
• La manipulación del metabolismo secundario de
  vegetales, por medio de la transformación
  genética, promete ser una de las contribuciones
  más importantes de la ingeniería genética
  aplicada a la industria.

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• La sobre expresión constitutiva de genes
  involucrados en la ruta biosintética de
  metabolitos secundarios podrá aumentar
  significativamente la cantidad de compuestos
  útiles producidos en plantas.
• Los avances en esta área permitirán aumentar las
  productividad de metabolitos secundarios
  obtenidos en cultivos in vitro con la
  consiguiente reducción de costos de producción o
  logrando la producción de nuevos compuestos.

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Ejemplos de metabolitos secundarios producidos
por cultivos in vitro de células vegetales
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Biotransformación

• Se usan para realizar reacciones bioquímicas
  sencillas en las que no se necesita
  diferenciación ni crecimiento celular
• Hidroxilación estereoespecífica en posición 12-?
  de la ?- metil digoxina, glicósido cardiotónico,
  por células de Digitalis lanata.

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Diferencias más importantes en el cultivo de
células microbianas, animales y vegetales
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Molecular farming
74


 
75
Proteínas obtenidas por Molecular Farming

• Reactivos de diagnóstico
• Vacunas animales
• Alimentos animales
• Enzimas industriales
• Pharmaceuticals para el hombre

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Ventajas del Molecular Farming para la producción
de proteínas de uso farmacéutico y enzimas
industriales

• Riesgos sanitarios reducidos de contaminación por
  patógenos
• Pueden ser escalados a costos relativamente bajos
• Son capaces de modificaciones postraslacionales
  proteicas
• Requieren de infraestructuras limitadas (para
  cultivo, cosecha, almacenamiento y procesamiento
  del material vegetal)
• No se requiere, en muchos casos, la purificación
  de la proteína (por ej. Procesamiento de
  alimentos, aditivos alimenticios, fermentaciones
  y vacunas orales)

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Valor de mercado de los productos proteicos del
molecular farming

• La demanda del mercado de proteínas para la
  industria farmacéutica se incrementa
• Las proteínas expresadas en plantas resultan al
  menos 10 veces más baratas que las expresadas en
  otros sistemas (por ej, microorganismos)
• El costo de vacunas expresadas en plantas ,
  anticuerpos o proteínas puede ser 100- 1000 veces
  menor

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Ventajas de los vegetales como bioreactores

• Las plantas son los productores más eficientes
  de proteínas
• son bioreactores escalables
• presentas ventajas en cuanto a costos
• Las células vegetales son similares a las humanas
  en cuanto a
• Maquinaria para síntesis proteica
• Pauta de lectura del código genético
• Ensamble, plegamiento y secreción de proteínas
  complejas

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Anticuerpos recombinantes en vegetales

• Plantibodies

80
Los Anticuerpos producidos en plantas pueden ser
utilizados en especialidades medicinales?

• Los anticuerpos producidos en plantas son seguros
  y efectivos?
• Los glicanos vegetales pueden ser inyectados?
• Son para administración oral, inhalatoria o
  tópica?
• Las regulaciones de FDA y USDA están
  evolucionando?

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Etapas del proceso

• Clonado y expresión de los genes de interés
• Regeneración y selección de las plantas
• Recuperación y purificación de la proteína
• Caracterización del producto final

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Introducción de genes de anticuerpos en plantas

• Transformación con Agrobacterium.
• Microinyección de cDNA en núcleo antes de
  reimplantarlo en una célula anucleada (Stieger et
  al. 1991)
• Expresión transiente en hojas (Schouten et al,
  1996)
• Métodos biolísticos

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Comparación de Anticuerpos derivados de Plantas y
Cultivos Animales

• Secuencia Peptídica idéntica
• Afinidad idéntica
• Tipos de Anticuerpos El sistema vegetal es más
  versátil
• Pueden producir isotipos incluyendo IgA
  secretoras
• Procesamiento Post-transduccional diferente
• núcleo de glicano idéntico, azúcar terminal
  diferente
• Antigenicidad clearance aparentemente
  idénticos

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Anticuerpos efectivos producidos en vegetales

• Anti-Streptococcus mutans (Guys 13)
• Previene caries dental en humanos
• Las sIgA 10X de plantas son más estables que IgG
• Nature Medicine 1998
• Anti-Herpes simplex virus (HSV8)
• Previene la transmisión del herpes vaginal
• Probado en ratones con PAbs de arroz y soja
• Nature Biotechnology 1998

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Aplicaciones de la Inmunomodulación

• Estudiar la función de un antígeno o incluso de
  un epitope en las plantas
• Modificar caracteres agronómicos
• Inmunizar a la planta contra un determinado
  agente.

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Inmunomodulación de blancos endógenos

• Actividad de fitohormonas
• ABA (scFv en ER de tabaco)
• Giberellina (A 19/24 scFv en tabaco)
• Inactivación de producto final en la ruta
  biosintética de una hormona (ABA)
• Modulación de la actividad del receptor hormonal
  (scFv contra fitocromo)
• Inhibición enzimática (DFR en Petunia hybrida)

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Inmunización intra y extracelular

• Tabaco que expresa anticuerpos contra la cubierta
  viral proteica de TMV
• Nicotiana benthamiana que expresa anticuerpos
  contra el virus BNYVV
• Tabaco que expresa scFv contra factores de
  infectividad de fitoplasmas y espiroplasmas
• Tabaco resistente a nematodes (IgM contra
  Meloidogyne incognita)

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(No Transcript)
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Anticuerpos contra nematodes

• Genes que codifican para enzimas blanco p.ej
  celulasas las cuales han sido clonadas de M.
  incognita así como de otros nematodes de este
  tipo. Estas enzimas desempeñan un papel
  fundamental en la migración hacia raíz y son un
  excelente punto de partida para la selección de
  anticuerpos .Se han generado también anticuerpos
  que bloquean el inicio del ciclo celular para
  evitar la inducción de las células de
  alimentación por el nematode.
• Se han obtenido y caracterizado por su capacidad
  para inhibir sus blancos anticuerpos contra las
  proteínas de TSWV N (importante para la
  replicación viral), G1/G2 (captación por thrips)
  y NSm (distribución en la planta).
• Se han hallado motivos estabilizadores que
  aseguran un nivel de expresión significativo de
  los anticuerpos y sus fragmentos en el citosol de
  la célula vegetal.

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Perspectivas

• Regulación metabólica.
• Plantas con resistencia a virus mediada por
  plantibodies
• Reducción del uso de pesticidas resistencia a
  pestes e insectos
• Modulación de antígenos (DH4R)
• Estudio del rol fisiológico de hormonas.
• Remoción de polutantes de suelos (Ac contra
  tóxicos orgánicos, compuestos potencialmente
  carcinogénicos, herbicidas)
• Remoción de polutantes de aguas ( inmovilización
  el Ac en soporte sólido)
• Biofarming producción de moléculas
  industriales o farmacéuticas basada en cultivos
  vegetales. (1 TSP expresión costo-efectiva).
  Análisis de especie, órgano.
• diagnóstico

91
Downstream processing

• Importante para utilización ex planta
• Alcaloides y otras sustancias tóxicas encarecen y
  dificultan la purificación (tabaco)
• Ausencia de virus patógenos, priones y otras
  sustancias típicas de sistemas de producción
  animales.
• Posibilidad de usar un tejido vegetal comestible
  para inmunidad a nivel de mucosas (purificación)

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Cuál es el desafío?

• Desarrollo de drogas para el tratamiento de
  ciertas enfermedades las proteínas son la clase
  en más franco desarrollo para la prevención y
  tratamiento de enfermedades.
• Desarrollo de resistencia contra patógenos
  (microorganismos y patógenos más complejos como
  nematodes)
• Análisis y manipulación de rutas biosintéticas.
• Seguridad y Eficiencia
• Ética