Diapositive 1

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FICHE 1. LA COLORATION DE GRAM Objectif réaliser
une coloration de gram
NOM PRENOM
MATERIEL PRODUITS -une lame et une
lamelle -un pot de yaourt -une anse de
platine -une pissette deau distillée -un bec
bunsen -une pissette dalcool à 90-95 -Un
microscope à immersion -un flacon de violet de
gentiane -un flacon de solution de
lugol -un flacon de fuschine -papier
absorbant -huile à immersion
PROTOCOLE indiquer sur les photographies, les
lettres correspondant au étapes décrites
1- Réalisation dun frottis de yaourt A- Cette
opération se réalise dans la zone stérile dun
bec bunsen. B- Etalement Avec une anse de
platine stérilisée à la flamme du bec, étaler en
un film mince et régulier une goutte de
yaourt. C- Stériliser lanse de platine à la
flamme du bec D- Séchage du frottis Laisser
sécher la lame en la maintenant dans lair chaud
de la veilleuse du bec bunsen. E- Fixer le
frottis recouvrir la lame dalcool pendant 5
minutes le rejeter puis laisser sévaporer
lalcool résiduel
2- La technique de coloration F-La coloration
primaire Recouvrir de violet de gentiane en
versant le colorant en bout de lame et en le
faisant glisser le long de la lame. Laisser agir
de 30 secondes à 1 minute. Rincer à l'eau
déminéralisée pour éliminer lexcédent de
colorant. G- La fixation au lugol Pencher la
lame et éliminer le violet de gentiane en faisant
couler sur la lame la solution de lugol. Laisser
agir 30 secondes. Rincer à l'eau déminéralisée
pour éliminer lexcédent de lugol. H-La
décoloration à lalcool Verser quelques gouttes
dalcool sur le frottis tenu verticalement
jusquà ce que lalcool sécoule non teinté (5
secondes environ). Rincer avec un jet de pissette
deau déminéralisée. Nettoyer le dessous de la
lame à lalcool puis à leau. I-La coloration
secondaire Recolorer par de la fuschine en
versant le colorant en bout de lame et en le
faisant glisser le long de la lame. Ne pas
verser la fuschine sur le frottis pour éviter une
coloration trop intense. Laisser agir de 10
secondes à 20 secondes. Rincer avec un jet de
pissette deau déminéralisée. Laisser sécher. 3-
Observation au microscope déposer une goutte
dhuile à immersion sur la préparation et
observer le frottis à lobjectif x 100