??????:DNA????(????)??,??????????,???????????

1
? ?? ?

• ?????????

? ?
2

• ??????
• ?????????????????????????,????????????????????????
  ????
• ??????
• 1.???????????????????????????????
• 2.????????????
• 3.?????????????
• ???????
• ??(1)??????(2)????????????
• (3)????????
• ??(1)??????(2)???????

3
????

• ??????DNA????(????)??,??????????,???????????
• ??????????????,??????????

4
????

• ??DNA???????????DNA??(?????)?
• ????????????????????????DNA?????????????????DNA??,
  ???????????????????????????,????????????,????????
  ??(??DNA),??DNA????????,???????????DNA????????DNA?
  ??????????????????????,??????????????

5
????

• 1973?,stanley????????????DNA??,????????????
• ????????????????????????,???????????,????????????
  ??

6
(No Transcript)
7
? ? ?????????DNA Recombination
8

• ????????DNA???????
• ????DNA??????????,?
• ???DNA??????

9
DNA??
???? (homologous recombination)
???? (conjugation)
???? (transformation)
???? (transduction)
? ?/??(transposition)
???????(site-specific recombination)
10
??????
??????????????DNA,???????????????????,??????
(transformation)?
11
????,???DNA??????????
??DNA
12
??????
????????(??)?????????????(??)???,???????????????DN
A?????????????(transduction)?
13
?
?????? (lysis pathway) ??????? (lysogenic pathway)
????????
? ?
14
????
??????????????????????,?????
15
?????
???(transposons) ????????????????????????
??????????? ??????? ???????????
16
?????????
? ?
17
? ? ?

• ??DNA??

18
????DNA??????
(?) DNA??
??(clone) ??????????????????
??????????????(cloning),??????
19
??DNA??????

• ? G.J.Mendel???????
• 1944? O.T.Avery?????????
• 1973? ??????????????????DNA??
• 1977? ???????????????????????????,??????DNA??????
  ???????
• 1980? ???????????DNA??????????
• 1997? ???????????????

20
(?)???

• ????????
• DNA????
• ????
• T4DNA???
• ?????
• ?????
• Taq DNA???

21
??????????
?? ????????(restriction endonuclease,
RE)???DNA?????, ??????????????DNA???????
Bam H?

22
?? ????? (???????????)
?? ??????????????????,????DNA, ????DNA?
23
??
Hin d?
Haemophilus influenzae d? ??????d??????
????????????????,??? ???????????????,??? ???????
? ???????????????
24
?????????????

• ? ???????????????(4-8???? )?
• ? ?????????180??????????(????)?
• ? ???????????????????DNA?

25
????????? ????(palindrome)
?? ?????????
26
Hind?
Bam H?


????
????
27
????? ????????,???????????,??????????
Bam H?

Bst?

28
??? ???????????????????,???DNA?,?????????,????????
??????????????(compatible end)?
Bg l?
Bam H?


29
T4DNA???

• ??DNA????5????3?????????????,?DNA????????DNA????
  ????
• ????DNA?????????DNA????????(???100-200?)

30
??????????

• ???dNTP?????DNA?3????3????DNA?????
• ???????DNA?cDNA????????????????? (??????)?

31
?????(ALP)

• ??????????,????????

32
??DNA?????????
? ? ? ? ?
???????? ??????,??DNA
DNA??? ??DNA????5????3?????????????,?DNA????????DNA???????
DNA???? ????cDNA??????? ??????????? DNA???? ??3??
Klenow?? ??DNA???I???,????DNA???I?5??3????3??5?????,??5??3?????????cDNA?????,??DNA 3??????
???? ??cDNA ??DNA???I????,???DNA????
??????? ???????5???????,?????
????? ?3?????????????
????? ???????
33
(?)????

• Target gene?????????DNA???
• cDNA
• Genome DNA

34
(?)????
?? ???????,???????????????????????DNA???
35
???????

• ?????
• ????????????,???????????
• ?????(??DNA???),???????????,???????
• ????,????????DNA?

36
????(cloning vector) ???????DNA???????????????????
? ????(expression vector) ???????DNA????????????
??????????????
37
???????

• ??DNA
• ??????????????????DNA??
• ???DNA
• ??DNA

38
(No Transcript)
39
????PBR322
40
?? pUC18
EcoO 1092674
Aatll 26117
Ndel 183
Narl 235
Sspl 2501
Sacl
Kpnl
0
Smal Xmal
BamHl
Xmnl 2294
lac Z
Xbal
Hincll
Pstl
Scal 2177
Plac
Sphl
Hindlll
ampr
pUC19 2686bp
lacl
447
ori
Amlll 806
Gsul 1784
Ctr10i1 1779
Ppai 1765
41
??
????(bacteriophage) ?? ??????? (yeast artificial
chromosome, YAC) ??????? (bacterial artificial
chromosome, BAC) ????DNA????? (????,???????,?????)
42
????DNA???????????
43
????

• ????????????
• ???????????????
• ??????DNA???????
• DNA??????????
• DNA?????????

44
(?)???????

• 1. ????
• ?DNA????????????????

45
???????????
?????????????DNA??
46

• 2.???DNA??(genomic DNA library)
• ??????????DNA,????????????????????????????????DNA,
  ??????DNA??????????????,??????????????DNA???

47
????DNA????????
????????DNA
??????
????
????
???DNA?? ??????????????????????DNA???
??DNA??
???
?????????
? ?
48
3??cDNA???????
cDNA????mRNA?????cDNA,??????cDNA?????????????????
?DNA,????cDNA???????????????DNA???????DNA?????????
?????,??????????,??????????cDNA???
49
? ?
50
4.PCR?

• PCR????????DNA?????????????????DNA?cDNA????

51
??????????
52

• (?)????????????

53

• 1. ????DNA??????

• ??
• 1)??????????
• 2 )??????????

54
??????????
Bam H?????
T4 DNA??? 15ºC
55
???????????
Eco R?????
Bg l?????
? ?
56
2. ??DNA??????
???????????????? ????????????
57
? ?
58
3. ??????? ??????(terminal transferase)????,?DNA??
?????????????????,????????
59
??DNA
????
????????
???
? ?
60
4. ????(linker)?? ???????????,?????????????,??????
??
61
????????
? ?
62
????DNA??????
?????????,??????????????
63
(?)??DNA ??????

• ?????????,???????????,??????DNA?

??????????
? ???DNA??????????(transformation) ? ???
DNA?????????????? (transfection) ?
?????????DNA?????????? (infection)
64

• ?????????
• ?????????????/???
• ??????????????

65
(?) ????????? 1. ????? (1) ??????? (2)
????(marker rescue)( a??) (3) ????? ???? Southern?
? 2. ????? ???????????????
66
(?????) ???????
? ?
67
a ?????
? ?
68

• ???PBR322????
• ????DNA????

69
(No Transcript)
70
(No Transcript)
71

• ???pUC????
• ????DNA????

72
???N?
?????
??DNA
pUC18 2686bp
pUC18 2686bp
? ? ?????N?????
???N?
???
??
??
???

• ? ?????
• C?????

???pUC18
pUC18
????X-gal???????????????
????X-gal???????????????
????pUC18?????
???pUC18?????
????
(?? ? ?????????Puc18)
73
??????????PCR??????
74
? ?
??DNA????????????
75
??DNA?????????
? ?
76
(?) ???????
??????? ??????? ??????? ?????????
77
1. ?????? (E.coli????????) ?????? ????
?????? ??????? E.coli???????
?????????DNA ???????????? ???????????????
(inclusion body) ???????????
78
??????cDNA ??????
? ?
79
(No Transcript)
80
2. ?????? ????????????
????????cDNA??????DNA ??????????? ????????? ????
?????????
?? ??????????????
??????? DEAE??????? ??? ????? ????
81
????pFASTBACI ?????
? ?
82
? ?
83
??? ??????????
(?)?????????? ???????????????,???????????
(?)????
84
??DNA????
? ? ? ?
????????? ??
????VIII ????
????-?????????? ???????
??????? ???????
????(bFGF, EGF) ?????????
??? ?????
??? ?????
???(? 1b, ?2a, ? 2b, ?) ??????????
????? ??????????
??????? ?????
????? ?????????????????????
????(CHO, ??) ????
????B????????? ????
? ?
85
(?)????
????(genetic diagnosis)???????????????????,?DNA???
??????????????????????????
????
????????DNA??
?????DNA???
86
?? . ???????? . ???????????? .
??????,???DNA??? . ?????????,????????????
87
(?)????
?? ????(gene therapy)???????????????????,?????????
???,??????????
?? ??????? (somatic cell gene therapy) ???????
(germ line gene therapy)
88
(?)???????
1. ???? 2. ????? 3. ????? 4. ??????
89
????????(molecular clone) ?DNA ??
???? ????(?????)
90
DNA?? ???????,?????????????(??????????????????????
?DNA)???DNA?????????????DNA?????(replicon),?????
????????,???????????????,?????????????DNA??,??????
???DNA (recombinant DNA) ?
91
?????? ????????????????????
????(genetic engineering) ?????????????????????
?,????DNA????
?? ? ?????????????DNA ? ????????????(???)
92

• ???
• 1. ??cDNA???
• 2. ????????????
• 3. ????????????

93
????

• 1. ????????????????
• 2. ??????????
• 3. ????????

94
????

• 1.???? ??? ?? ??? ???????
• 2.???? ??? ?? Reginald H.Garret
• 3.?????????????
• (??????) ?? ??? ?????
• 4.????????