La diagnostica di laboratorio nella patologia infettiva

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La diagnostica di laboratorio nella patologia
infettiva
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• D.ssa Marina Musumeci

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Malattia infettiva
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• Ogni condizione morbosa che riconosce come causa
  necessaria della sua insorgenza lazione di
  unagente patogeno appartenente ad uno dei
  seguenti gruppi

• Virus
• Batteri
• Miceti
• Parassiti

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• Infezioni sintomatiche
• Infezioni asintomatiche

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Diagnosi
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• Definizione delleziologia e della patogenesi di
  un processo morboso.

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Ipotesi diagnostica
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Raccolta dei dati anamnestici e clinici con
conseguente formulazione di un sospetto o di un
orientamento diagnostico.
Indagini di Laboratorio o strumentali

• Utili per confermare o smentire lipotesi
  diagnostica.

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Indagini con metodo diretto
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• Esame microscopico
• Isolamento in coltura ed identificazione
• Biologia molecolare

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Indagini con metodo indiretto
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• Indicatori di flogosi
• (Emocromo, Ves, PCR, Proteine specifiche)
• Anticorpi specifici

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Anticorpi
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• Immunoglobuline leganti lantigene
• solubili o di membrana

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IGM
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Normalmente sono transitorie e indicative di
infezione acuta in atto.
IGG

• Compaiono più tardivamente, raggiungono il picco
  4-6 settimane dopo linfezione e, spesso,
  persistono per tempi prolungati

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Qualè il principio analitico?
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Metodi
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• Agglutinazione
• (emoagglutinazione, sieroagglutinazione)
• RIA
• ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay)
• CLIA
• IFI

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Malattia acuta o subacuta a prognosi favorevole
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Mononucleosi

• Segni clinici febbre irregolare, angina,
  linfoadenopatia latero-cervicale
• Agente eziologico virus di Epstein-Barr
• Diffusione per via inalatoria o per contatto
  orale da portatore sano a persona non infetta

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Mononucleosi

• Cellule del nasofaringe
• Linfociti B Anticorpi eterofili
• Attivazione dei linfociti T CD8

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Mononucleosi

• Periodo di incubazione da 35 a 45 giorni
• Superata la fase acuta, il virus continua ad
  essere dismesso dalle cellule orofaringee.
• Riattivazione di malattia spesso in modo atipico
  o asintomatico

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Esami di Laboratorio
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Mononucleosi

• Emocromo
• Anticorpi eterofili
• Anticorpi specifici diretti contro
• Antigeni del capside (VCA IgM e IgG)
• Antigene precoce (EA)
• Antigeni nucleari (EBNA IgG)

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Mononucleosi

• VCA IgM compaiono precocemente e scompaiono
  entro 4-6 settimane
• VCA IgG raggiungono il picco a 2 settimane
  dallinizio della malattia
• EA IgG sono presenti nella fase acuta,
  persistono per 3/6 mesi possono permanere per
  molti anni positivi nelle riattivazioni.
• EBNA IgG assenti nella fase acuta, si rilevano
  2/4 mesi dopo linizio e permangono
  perennemente.

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Mononucleosi

• Infezione primaria acuta
• VCA IgM, VCA IgG, EA IgG
• Convalescenza (o riattivazione)
• VCA IgM, VCA IgG, EBNA IgG, (EA IgG)
• Infezione pregressa
• VCA IgG, EBNA IgG

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Toxoplasmosi
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Antropozoonosi ubiquitaria da Toxoplasma Gondii

• Ciclo vitale
• Oocisti
• Sporozoiti
• Tachizoiti
• Bradizoiti

Linfezione viene contratta mediante lingestione
di carni crude o poco cotte e mediante
lingestione di verdure crude
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Toxoplasmosi

• In gravidanza
• Il rischio di trasmissione aumenta con lo
  sviluppo del circolo placentare.
• Il rischio di indurre gravi danni al feto è
  maggiore se linfezione congenita è contratta
  precocemente.
• Infezioni congenite contratte durante il terzo
  trimestre di gravidanza sono generalmente
  asintomatiche.

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Infezione da Citomegalovirus
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• Famiglia hepesviridae
• Spettro dospite ristretto
• In vivo ciclo replicativo lento, induce
  inclusioni intranucleari, intracitoplasmatiche e
  latenza nelle cellule mononucleate del sangue e
  nei progenitori midollari

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Infezione da Citomegalovirus

• Trasmissione per contatto interumano. Nella
  popolazione adulta il contatto molto stretto e
  quotidiano con i bambini gioca un ruolo
  importante per la diffusione dellinfezione.
• Fonti dinfezione secrezioni oro-fringee, urina,
  latte materno, sperma, secrezioni vaginali, feci,
  sangue.
• Eliminazione con le urine protratta nel tempo.

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Infezione da Citomegalovirus

• In gravidanza
• Uninfezione primaria contratta nel primo
  trimestre di gravidanza aumenta il rischio di
  prognosi feto-neonatale più grave.
• Danni da infezione congenita severe
  compromissioni cerebrali con difetti dello
  sviluppo psicomotorio e ipoacusia neurosensoriale.

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Rosolia
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• Agente eziologico RNA virus
• Il virus penetra nel tratto respiratorio dove
  avviene la prima fase di replicazione cui fa
  seguito una seconda nei linfonodi cervicali.
• Incubazione da due a tre settimane
• La fase viremica dura per i sette giorni
  precedenti la comparsa dellesantema insieme con
  lescrezione virale dal rinofaringe e persiste da
  sette a dodici giorni dopo il rash.

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Rosolia
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• Le IgM compaiono prestissimo, raggiungono il
  picco dopo 7-10 giorni persistono fino a 60
  giorni dalla comparsa dellesantema
• Le IgG compaiono dopo 2-5 giorni dalla comparsa
  delle IgM e persistono indefinitamente conferendo
  limmunità

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Rosolia

• In gravidanza
• Se contratta entro le prime 16-18 settimane,
  linfezione può determinare aborto o gravi
  alterazioni transitorie e/o permanenti definite
  come Sindrome della Rosolia Congenita (SRC)

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Quadri sierologici possibili
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• Assenza di immunità IgG /IgM -
• Immunità da infezione pregressa IgG /IgM-
• Stato immunitario non definibile
• IgG indeterminate e IgM negative
• Se IgG -/IgM infezione in fase iniziale o
  risultato falso positivo (da reazione crociata)

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Quadri sierologici possibili

• IgG/IgM effettuare una seconda determinazione
  utilizzando metodo analitico alternativo, ma con
  la medesima sensibilità.
• Test di avidità

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Infezione da HIV
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• HIV retrovirus
• Cellule bersaglio linfociti T CD4
• HIV1 e HIV2

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Infezione da HIV

• Infezione primaria
• Fase di latenza clinica
• Fase clinicamente manifesta

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Infezione da HIV

• Trasmissione
• Per via sessuale
• Per via ematica
• Per via materno-fetale

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Infezione da HIV

• Test di screening
• III generazione
• IV generazione
• Test di conferma
• positivo
• indeterminato
• negativo

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Infezione da HIV

• Stadiazione e monitoraggio della risposta alla
  terapia
• Linfociti T CD4
• Carica virale (HIV RNA)

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Epatite
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• Processo infiammatorio a carico del fegato
  istologicamente caratterizzato da necrosi
  parenchimale e infiltrazione flogistica.

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Epatiti virali

• HAV
• HBV
• HCV
• HDV
• HEV

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Epatite acuta

• Danno improvviso con aumento significativo
  delle transaminasi (dieci volte il limite
  superiore).

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Epatite cronica

• persistenza di ALT elevate per oltre sei mesi
  dopo lepisodio acuto
• Riscontro di ALT elevate in più di unoccasione
  per un periodo di oltre sei mesi.

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Epatite virale da virus A

• Si trasmette per via oro-fecale ha un periodo di
  incubazione di 15-50 giorni può dare epatite
  acuta, ma non cronica.
• IgM indicano la fase acuta della malattia
• IgG persistono per tutta la vita e sono
  protettive.

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Epatite virale da virus B

• Si trasmette per via parenterale, sessuale,
  perinatale
• ha un periodo di incubazione compreso tra 45 e
  160 giorni dà infezioni in forma acuta e
  cronica può evolvere in epatocarcinoma.

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Epatite virale da virus B

• HBsAg primo marcatore a comparire
• HBeAg indice di attiva replicazione virale
• Anti-HBcIgM presenti titolo elevato nella fase
  acuta
• Anti-HBcIgG già presenti nella fase acuta,
  persistono per tutta la vita.

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Epatite virale da virus B

• Immunità naturale Anti-HBs e Anti-HBc
• Immunità da vaccino Anti-HBs

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Epatite virale da virus B

• Quadro sierologico dellepatite cronica
• HBsAg
• Anti-HBcIgG
• Anti-HBe

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Epatite virale da virus C

• Si trasmette per via parenterale, sessuale,
  perinatale, ha un periodo di incubazione di
  14-180 giorni raramente dà infezioni acute
  evolve in cirrosi ed epatocarcinoma.

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Epatite virale da virus C

• Anticorpi anti HCV rilevabili mediamente dopo
  circa tre mesi dallinfezione.
• Risultato negativo esclude con elevato grado di
  probabilità la malattia.
• Risultato positivo infezione in corso o
  pregressa.

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Epatite virale da virus C

• Test di conferma se valore index/cut-off
  lt8.0
• HCV RNA infezione