?????????? (Viral Nervous Necrosis Disease, VNN) ????

1
?????????? (Viral Nervous Necrosis Disease, VNN)
????
???

• ???????
• ?????
• ??1092407027

2
??

• ???????? (VNN) ???
• ???????????
• ??????? (NNV) ???
• ??????????? (genotype) ???? (serotype)

3

• ?????????????????
• ????????????????
• ???????????? (Epidemiology) ???
• ?????????????????????

4

• ?????????????
• ????????????
• ??????????

5
???????? (VNN) ???

• ???????? (Viral nervous necrosis disease, VNN
  disease),????? 1986 ?????? (Nagasaki) ??????
  (Japanese parrotfish)????

6

• ???? 6-25 mm,????????????????
• ????????,??????????????

7

• ????????????,???????????????????????,??? 34 nm
  ?????,?????????????,?????????? (Nervous necrosis
  virus, NNV) (Yoshikoshi and Inoue, 1990)?

8
??????????? (???)

• ???????????????,????? 100?
• ???????????? 17 ?,??????? 70-80,???????? (? 1)?

9

• ?????????????????,??????????
• ??????,???????????,????????? (? 2)?

10

• ??????????,??????
• ????????,???????,???????????

11

• ????????,????????????,????????????????? (? 3)?
• ??????????????????,???????????????????,???????????
  ???? (? 4)?

12
??????? (NNV) ???

• NNV ???????,????????????,???? 20-25 nm (? 5)?
• ????? poly A tail ??????? (positive-stranded
  RNA),??????? 1.01 106 Da (RNA1) ? 0.49 106 Da
  (RNA2) (? 6A)?

13

• RNA1 ???????? 100 kDa ????,???? RNA-dependent RNA
  polymerase?
• RNA2 ???????????,? 42 kDa ? 40 kDa ??? (? 6B)?

14

• ???????????,????????????? (Nodaviridae)???????
  (fish nodavirusbetanodavirus) (Mori et al.,
  1992Nishizawa et al., 1995Chi et al., 2001)?

15

• Arimoto ? (1996) ??????????????????? SJNNV
  ???,?????????
• 1. ? (iodine) 50 ppm ?? 10 ???
• 2. ? (chlorine) 50 ppm ?? 10 ???
• 3. ??? 1.0 105 µw. sec / cm2?

16

• 4. ?? (ozonation) 0.1 ppm ?? 2.5 ???
• 5. ?? (pH 12) ?? 10 ???
• 6. ?? (60?) ?? 30 ???

17

• ??????? NNV ?????? pH 2-9 ???,???? 56 ? ?? 30
  ????? (Frerich et al., 1996)?
• ??????????? GNNV ?????? (pH 3) ??? (pH 10-12)
  ????,???????? 104 TCID50 ,60 ??????,?????????(Chi
  et al., 2001)?

18
??????????? (genotype) ???? (serotype)

• 1994 ? Nishizawa ???? SJNNV ? RNA2 ?????????????
  (forward primer) F1?F2,??????? (reverse primer)
  R1?R2?R3?
• ?????????????,? RT-PCR ????????????????,??????????
  ????? (T1,T2,T3,T4,T5)?

19

• ??????? 420 bp ? T4 ?????????,????????????????????
  ? (Nishizawa et al., 1997)
• 1.Striped Jack (SJ) NNV
• 2.Tiger Puffer (TP) NNV
• 3.Barfin Flounder (BF) NNV
• 4.Redspotted Grouper (RG) NNV

20

• ? SJNNV ?????? T2 ??????????????
  NOV?BBK?FHV?BOV?????????,????? 28.6
  ??,?????????? 10.6 ?? (Dasgupta et al.,
  1984Dasgupta and Sgro, 1989Kaesberg et al.,
  1990)?

21

• ?? T4 ?????????????????????? (BFNNV?TPNNV ?
  RGNNV) ?????? 76 ??,??????????? 81,????? 83-216
  ?????????? (highly conserved region) ???????
  92.5 ??,?????????????

22

• ??,??????????????????????,??????? (Piscine
  nodavirus) ?? betanodavirus,??????????
  alphanodavirus (Nishizawa et al., 1995)?

23

• ???? NNV ???????????????,????????????? NNV
  ????????????,?????????? (Nakai et al., in press)
• 1. SJNNV
• 2. TPNNV
• 3. GNNV ?? BFNNV

24

• ??,?? BFNNV ?????????????GNNV ???????????,???????
  ????????

25
?????????????????

• ?????????????????????????????????????????????

26
(No Transcript)
27

• ? 1990 ???,???????? 24 ?????????????? (Munday et
  al., 2002)?
• ???????????????? 6 ? 19 ? (? 1)?

28

• SJNNV ??????????????,?????????? (Japanese striped
  jack) ??? (red sea bream) (Nishizawa et al.,
  1997)?
• RGNNV ?????????????,?? 5 ? 12 ?,???????,??????????
  ????

29

• ????? 8 ???? NNV ??,????? (yellow-wax pompano)???
  (cobia)???? (European eel)????? (fire-spot
  snapper),?????? (Chinese catfish)????????? (?
  2,3) (Chi et al., 2003)?

30

• ??????????,???????????? RGNNV ???,???????????????
  RGNNV ?????? 97 ?? (? 7)?

31

• ?? NNV ??????????,?? (2001) ????????????????????
  NNV ???,?????? 100 ?????
• ? NNV ????????????????,?????????? NNV ????????

32

• ???,??????????,???????????????,?????????????? NNV
  ???????????????????,??????????????

33
????????????????

• ???????????????
• RGNNV ????????????
• TPNNV?BFNNV ?????????
• SJNNV ????

34

• ??????? NNV ??????????? (Iwamoto et al., 2000)
• BFNNV 15-20?
• TPNNV 20?
• SJNNV 20-25?
• RGNNV 25-30?

35

• Tanaka ? (1998) ????? (redspotted grouper) ?? NNV
  ???????,???????? NNV ,????????????????????
• ?????????????? (sevenband grouper) ?????? (Fukuda
  et al., 1996)?

36

• Chi ? (1998) ????????????? GNNV,???????,??? 28-30
  ? ?,???????????????????? 20-24 ? ?????? (? 4,5)?

37

• NNV ???????????,????????,?????????????????????

38

• ??????????????? NNV ??????????,???????????????
  (Totland et al., 1999)?
• ?????????????????????????? NNV ?????????

39
???????????? (Epidemiology) ???

• Glazebrook ? (1990) ??????????,NNV
  ????????????????
• Le Breton ? (1997) ??,????????????????????????????
  NNV ?????????????????????

40

• ?????,?? NNV ??????????????????????,????????????
  100?
• ????????????,?????????????????????? (Arimoto et
  al., 1993)?

41

• Arimoto ? (1992) ?? ELISA ????????????????????????
  ???,????,???????? SJNNV ???,?????????????????????,
  ?? NNV ??????

42

• ?????????????,???? DIG (digoxigenen-11-dUTP) ?
  N12 ????? NNV ????? (Comps et al., 1996)?
• ???????????,?????????????????? NNV ???? (Grotmol
  and Totland, 2000)?

43

• ????????,??????????,???????????????? (Munday et
  al., 2002)?

44

• ????????????????,?????????? (Brachionus
  plicatilis, rotifer) ????? (Artemia salina,
  nauplii)?
• ????????????,????????? 24-48 ??,??????????? NNV
  ????? (Skliris et al., 1998)?

45

• Chi ? (2003) ?????????,?? NNV ???????????????????,
  ???? NNV ????????
• ????????????????,NNV ?????????????????????

46

• NNV ??????,????????????,???????? NNV
  ???????????,??????????,???? NNV ??????? (? 6,7)?

47
?????????????????????

• ???????,?????????????,?????????? NNV ??????????
• ??????????,???????????????? NNV
  ??????,?????????????,????????

48

• ???????,??????????? NNV ??,????? NNV ??,?????????
  NNV?
• ??,?? NNV ????????????????,???????????????????????
  ?? (Mushiake et al., 1994)?

49

• ??????????,??????,?????????????????,??????????,???
  ????? NNV ????

50

• ???????????,???????????? (swim bladder)
  ?????,????????,?????? (Nguyen et al., 1996)?
• ????????????,?????????????????

51

• ?????????,????????,???? NNV ??????????????????????
  
• ?????? (yolk-sac) ???????????????,NNV
  ?????????????,???????????? (Grotmol et al., 1999)?

52

• NNV ????????,????????????
• ???????,???????????,????????????????? (Nguyen et
  al., 1996)?

53

• ????????????,?????????,??????? (endothelium)?????
  (myocyte) ?????? (mesothelium)????????????????????
  ????????? (Grotmol et al., 1997)?

54

• ???????????,??????????,???????????????????????????
  ??,??????????????????

55

• ??? NNV ?????????,????????? (in situ hybrization)
  ?? RT-PCR ????? NNV ????,???????????
  (????,viremia) ????? (Chi et al., 2001)?

56
?????????????

• ??? 1994 ?????????????????,????????,???????,NNV
  ??????????,???? NNV ??????

57

• ?? (2001) ??,?????????????,???????????,???????????
  ??,??????????????
• ??????????????????? NNV ??,????????????????????

58

• ??????????????,?????????????,?????????????????
• ???????????????????????????,???????? (? 8)?

59
????????????

• ?????????? Enzyme-Linked Immunosorbant Assay
  (ELISA)
• ??????????? Reverse Transcriptase-Polymerase
  Chain Reaction (RT-PCR)

60

• ?????? Cell line isolation
• ?????? Immunofluorescent (IF) staining
• ?????? In situ hybridization

61

• ???????? Immunohistochemistry (IHC) staining

62
?????????? Enzyme-Linked Immunosorbant Assay
(ELISA)

• ELISA ?????????????????????????,??????????????????
  ?? (? 9)?

63

• Arimoto ? (1992) ??? SJNNV?????,?? indirect ELISA
  ???,????????????????????? SJNNV ??????
• Mushiake ? (1992) ??? ELISA ????????????? SJNNV
  ???,?????????

64

• Mushiake ? (1994) ? ELISA ?? RT-PCR ??????????????

65
??????????? Reverse Transcriptase-Polymerase
Chain Reaction (RT-PCR)

• RT-PCR ?????????????????? (primer)
  ?,????????????????????,?????????????????
• ????????????????????,????? 100 fg ?????
  (Nishizawa et al., 1994) ?

66

• ????????????,????????????????? PCR (nested
  PCR),??????????? 10-100 ? (Dalla Valle et al.,
  2000)?
• ???????????????????????? (? 10)?

67
?????? Cell line isolation

• ???? (striped snakehead, Ophicephalus striatus) ?
  SSN-1 ??? (Frerichs et al., 1991),? NNV
  ???????,??????????? 1010 TCID50/ml?
• ?,???????????? (retrovirus) ?????? (Iwamoto et
  al., 1999)?

68

• Iwamoto ? (2000) ?SSN-1 ????? E-11 ???,? SSN-1
  ??????,??????????????? (cytopathic effect, CPE)?

69

• ???????? GNNV,??????? (Epinephelus coioides,
  Hamilton) ???? GF-1 ?????????????,???????????
  108.3 TCID50/ml (Chi et al., 1999),??????????????
  (? 11)?

70

• Lai ? (2001) ??? (yellow grouper, Epinephelus
  awoara) ??????? GB ???,???? YGNNV (yellow grouper
  NNV),???????? 108.5 TCID50/ml?

71

• Chang ? (2001) ???? (Asian seabass, Late
  calcarifer) ??? (fry) ???? SF ???,?? GNNV
  ????,????????????? 104-107 TCID50/ml ???

72

• ????????????????,??? RT-PCR ???,?????????????????
  (Iwamoto et al., 2001)?

73
?????? Immunofluorescent (IF) staining

• ??????????????????,?????????????????
• NNV ? RNA ??,??????????????? (? 12)?

74
?????? In situ hybridization

• Comps ? (1996) ?? DIG ??????? (N 12),???????? (In
  situ hybridization)?
• ??????? NNV,?????? 10 pg?

75

• ??????????? (barramundi)???? (turbot) ????? (shi
  drum) ?NNV ???????????????
• ???? NNV ???????????????,??????????

76

• ??????????????????????????????????? (? 13)?

77
???????? Immunohistochemistry (IHC) staining

• ???????? (IHC) ?????????,?????????????????????,???
  ????????????? (? 14)?

78
??????????

• ??????????????????????
• ???????????????
• NNV ?????

79

• ????????????????????????
• ? NNV ???????
• ??????

80
??????????????????????

• Mushiake ? (1994) ??,???????????? (?? 10
  ?),????????????????????,??? RT-PCR ? ELISA
  ??????,????????? NNV ????

81

• ???????
• 1. ??????? NNV ????? NNV ???????,?? NNV
  ???????????
• 2. ??????????????????,?????????????????????

82

• 3. ?????????? RT-PCR ??????? NNV
  ?????,??????????????????
• 4. NNV ?????????,????????,?????????,??????,???????
  ????????,???????????????????

83

• ??????? sea bass (Breuil et al., 2000) ? barfin
  flounder (Watanade et al., 2000) ??????,?????????

84

• ???????????????,?????,???????????,???????,????????
  ????????
• ??????,????????????,?????????????,????????,???????
  ??

85
???????????????

• Arimoto ? (1996) ?????? 0.2 µg/ml
  ????????????????
• Grotmol ? Totland ? (2000) ? 4 µg/ml
  ??????????????,??????????? NNV ????

86

• ?????????????,????????????
• Munday ? Nakai (1997) ???,???????????????????,????
  ?????????,?????????

87

• ????????????,?
• 1. 50 ppm ????? (sodium hypochlorite)
• 2. ????? (benzalkonium)
• 3. ? (iodine)
• ???? 10 ?? (Arimoto et al., 1996) ?

88

• ??????????????????,???????? (??????)
  ,???????????????

89
NNV ?????

• ??????,?????????????????????????????????????????
  
• ?????????????????

90

• ????????????????????,????????????????????????????,
  ????????????,??????????
• ????????????????????

91

• SJNNV ????????,????????RGNNV ??????,??????,??????
  ??,?????????,?????? (Munday et al., 2002)?

92

• ?? RGNNV ????????????,?? RGNNV ?????????
• ???????????????????????????? NNV ????

93

• ????????????????????? RGNNV ???,?????????????????
  RGNNV ?????????
• ?????,RGNNV ?????????????????????????? (Tanaka et
  al., 2001)?

94

• ?????????????????,????????????????????????????????
  ?????
• ???,?????????????,?????????????????????,???????

95

• ?????????,?????????????????????????
• ?,????????????????????????????????????????????????
  ?????,???????????????

96

• ????????,?????? NNV ????????,??????????????
• ???????????????????? 50,????????????????,????????
  ??? (Lin et al., 2001)?

97

• ?????????????????,?? NNV ??????????????????,??????
  ?????????????,??????? (Yang et al., 2003)?

98

• ????????????????????? NNV ?????,???????????????,??
  ????????
• ?????????? NNV ????????????,????????????? NNV
  ??????,???????

99

• ???????????????????? NNV ????,?????????????
• ?????????????????,????? NNV ??????????

100

• ??????????? NNV ????,??? Husgaro ? (2001) ??
  SJNNV T2 ?????????,????????? (trout)
  ???????,?????????,?????????????

101

• Sommerset ? (2001) ??????????????????????????,????
  ??????,???????????????

102

• ??,? AHNNV ? SJNNV RNA2 ??????? CMV promoter ?
  pcDNA3.1 vector ?,?? DNA ??,??????? CHSE
  ??,?????????????

103
????????????????????????

• ? masu salmon?Japnanese flounder?barfin flounder
  ???????,??????????????? (Yoshimizu et al., 2003)?
• ??????????? Aeromonas spp. ? Vibrio spp.?

104

• ?? Aeromonas ?????????????? BFNNV ???
• ?????????,???????,??????????????,??????????,??????
  ?????????,???????

105

• ??,????????????????????????????????????,??? GNNV
  ???,??????????????
• ??????????,????????,???????

106
? NNV ???????

• ??????????????????? NNV ??????????,???????????????
  ?,?????????,???????

107

• ??????,??????? NNV ??????
• ???????????????????????????????????,???????,??????
  ????????????

108
??????

• ?????????????????????????
• ?????????,??????????,???????????,?????????????????
  ????????,????????

109

• ??????????????????????,???????,???????????
• ??,?????????,????????????????????,????????????????

110
?rz,???
111
(No Transcript)
112
(No Transcript)
113
(No Transcript)
114
(No Transcript)
115
(No Transcript)
116
(No Transcript)
117
(No Transcript)
118
(No Transcript)
119
(No Transcript)
120
(No Transcript)
121
(No Transcript)
122
(No Transcript)
123
(No Transcript)
124
(No Transcript)
125
(No Transcript)
126
(No Transcript)
127
(No Transcript)
128
(No Transcript)
129
(No Transcript)
130
(No Transcript)
131
(No Transcript)
132
TCID50 (50 tissue culture infectious dose)

• ? 50 ????????,????????????
• ??????????? 50 ?,????????

133
?? RNA ? ? -

• ??? DNA ???????,RNA ??????? ? -?
• RNA ??? mRNA,????????
• - RNA ???? mRNA,?????????