metodos

1
MÉTODOS
2

• Para este análisis , fueron requeridas.
• 97 cepa MDR-TB, aisladas en pacientes con TB
  Pulmonar.
• 6 cepas que fueron sensibles a INH y RIF y que
  no presentaron mutación. ( Se utilizaron como
  controladores.
• 56 Pertenecían a Px del estado del Rio de
  Janeiro.
• 41 Pertenecían a pacientes de otros 12 estados.

3
(No Transcript)
4

• Pernambuco (n6)
• Maranhao (n5)
• Pará (n5)
• Sao Paulo (n5)
• Ceará (n4)
• Paraná (n4)
• Bahia (n3)
• Goiás (n3)
• Amazonas (n2)
• Paraíba (n2)
• Espíritu
• Santo (n1)
• Minas
• Gerais (n1)

V
5

• 84 Casos el material fue recogido entre
  2002-2003.
• 13 Casos fueron recogidos entre 1995-1997.

6
Los patrones de resistencia a los medicamentos se
determinaron en el medio de cultivo Löwenstein-
Jensen
7

• Se inicia el análisis del gen KatG.
• - En dos regiones de interés.

REGION 1
Nucleótido 1 Codón 1
Nucleótido 357- Codón 119.
KatG sentido 5 Un CTT CGC GAT CAC ATC
CGT G 3 katG an tisentido 5 GCC GCG GTC
GTG GAT GCG GTA 3
8

• REGIÓN 2de 711 nucleótidos

Nucleótido 801 Codón 267
Nucleótido 1512- Codón 504.
KatG sentido 5 CGC CGG TCA CAC TTT CGG
TA 3 KatG anti sentido 5 CCC CTG GAC TGG
TTG CAG GC 3
9
Todas las PCR se lograron con un taq de platino.

• 1.5Mm de Mgcl2.
• 15 pmol de cada oligonucleótido.
• 0.2Mm de dNTP
• Por 1 de solución amortiguadora de pcr.
• 40ng de ADN genómico.

10
Parámetros de PCR
11
Amplificación de PCR
En gel de agarosa
Las secuencias de cada muestra se comparan con
las secuencias de la Mycobacteria del Gen KatG
Secuenciador automático MegaBACE 1000