??? DNA???

1
??? ????
2

• ??? ??
• ??? ?????
• ??? ???????????
• ??? DNA????
• ??? ???????
• ??? ????

3

• ?????????
• ??,?????????????
• ??,??????????????????
• ??????????DNA???????????DNA??????????,????DNA?????
  ?

4
(No Transcript)
5

• ?????
• (1)???? (homologous recombination
  )??????(generalized recombination )
• ?????DNA????????
• ??????????????????
• ???????????????????????,?????????,?????????
• ????????RecA??????

6

• (2)???????(site-specific recombination)
• ??????????,???????????,????????
• ??
• ???????
• ??????
• ???????
• ???????????att????E.coli??????

7

• (3)????(transposition recombination)
• ???????DNA????????,??????????
• ???????,????DNA???,
• ??????????????
• ?????????????
• ????????????????????

8

• (4)????
• ????,?????????
• ??????????????????,????????????

9
?? ????? ?RecA?? ????????
?? -
????? -
?? - -
?? - - ?
10
??? ????
11
1 ??
1.1 ????(homologous recombination)
?????DNA?????
1.2 ??-???????????
1) ??????????????????????????,??????????DNA?????
DNA???????????? 2) ??DNA???????????? 3) ??? 4)
??????????DNA?????????????????????????????
12

• e.g.
• Euk.????????????????????,??,??,?????

???
???

• ???????????,????????????????????DNA??????????????
• ????????????????DNA???
• ?????????????????,DNA??,??????

???
???
???
13
2 ???????
2.1 ?????Holliday??????
? ????????DNA????--????
? Holliday?? ?????????DNA??????????4?DN
A?, ?????????????????????
? Holliday?????????(????????)
?Holliday?????????????????????????
14
1) Holliday??????
??-- ?????????? ????????
15
2) ??????(?????) Meselson-Radding??
Loop????
??
3?
5?
????
??
???
??
????
16
3) ????????
17
2.2 ?????Holliday?????
1)????(branch migaration) --?????????????????
?
18
2)Holliday????
Holliday???????? ????????--????
heteroduplex DNA
?????????? ?????????
????????
19
Holliday??????
3,4??
1,2??
DNA???
DNA???
DNA???
DNA???
??????????DNA??
?????
20
???
???
21
Holliday?????????
22
(No Transcript)
23

• 3 ?????????????
• ???????????????(synaptonemal complex, SC)
• SC??????,?????????
• 4 ????
• ????(gene conversion)??????????????
• Lindegren(1949)???????????Aa????,??????????(3A
  1a),????????
• 50????Mitchell??????????????????,?????????????
  ??,?????????
• Olive??????????????????????????????,???????(postm
  eiotic segreation)?

24
(No Transcript)
25
??? ???????????
26
1 ??(E.coli)??????---????

• 1)???????(conjugation) ?
• ??????????????????????????????
• 2)???????(genetic transformation)?
• ????????????DNA(????)?????????????
• 3)??????(transduction)
• ????????????????????????
• 4)???????(cell fusion) -??????
• ??????(recipient cell)??????????
• ?????????????????????

27
? ?????DNA?????
????????DNA??????DNA???DNA?? ????????????
2 RecBCD(??????)? Chi ?? 2.1 ??
? ?????(??)???ATPase???????????
?????????????
? ??????????????DNA??????????? ---RecA?????
? RecBCD???????
28
2.2 RecBCD?????
a?RecBCD???DNA?? ???(???????)
b? ???????? (ATP)
c???? loop ???? (????????????)
d?RecBCD ? loop ???? chi ??3?46NT?
????(?????)
? chi??GCTGGTGG ????????? E.coli ?
1009 ??Euk.
29
e?RecBCD ????3????
30
3 RecA ??

• RecA??????????SOS?????DNA?????(assimilation) ?
• ??????????????????????,????????DNA???Holliday????
  ??,????????????
• 3.1 ??

a? RecA ????? DNA ????
b? RecA ? NTPase ??(??????), ??? DNA
???????---??? DNA
c? RecA ???????????????????? ???,?????
DNA (??? DNA ?????--??DNA)?
31
RecA?????????38000,???DNA?????????????????
32
3.2 ????

• 1)RecA?????DNA???
• 2)????????????????,????????Holliday(5??)?
• 3)??????????DNA????????????????
• ???????6 bp/s,????5?3?
• ??????????,RecA?????????????
• RecF?RecO?RecR????RecA?????????

33
RecBCD?RecA ?????
34
3.3 ???????????
?? E.coli ????? ruvA,ruvB ? ruvC ???
a? RuvA ?? Holliday ??????
b? RuvB ?????????(ATPase 1020bp/s)
c? RuvC ?????---????? Holliday
????????????????????
d ?RecG????????Hollidy?????,????????
35
? E.coli ?????? (????)
??DNA??????
RecA???
??????
DNApol??DNA??????
RuvA,B????
RuvC??Holliday???
36

• ??? ???????

37
1 ???????( site-specific recombination)
1.1 ?????????????????DNA???????
????????????????????????
1.2 ??
? ??????????,??????????? ----?????DNA??
? ??????????????
a?????????---????????????DNA
b??????????DNA?????????????
Euk. ????????????
38
2 ?DNA??????
2.1 ????
????---??DNA??DNA???????????
2.2 ????-----????(attachment site att)
? E.coli attB ?BOB??? 23bp
? ?DNA attP ? POP??? 240bp
? ???? O???? 15bp (????)
---????????????
? B,B,P,P---?
39
2.3 ???????
? ????????? attL(BOP) attR(POB)
? ????---attB?attP ????---attL?attR

• ? ????
• ??????????(integrase Int)(???)??????????IHF(integ
  ration host factor)?????
• ?????????Xis???????Int?IHF?

40
1) ???(integrase) ????int????
????POP?BOB ?? ?POP??
?????I?? 2)??????(IHF) (integration
host factor) ?????? ????????POP?BOB???
3)???(excisonase) ????xis????
???????????POB?BOP,??O??,????POP?BOB? 4)?????
?(FIS) ?????????
41
(No Transcript)
42
2.4 ??????
? ????O??15bp,??A-T
? ???O?????????? 7bp?
? attP?????????????---???Int?IHF????
-----???????????????????
? ????????attP 240bp?attB 23bp(???????)?
? Int?? ----?????????(????)
----???att??(???????)
43
(No Transcript)
44

• attB?attP??????Int????????
• ??????????????????

• Int?????DNA,???????,???holliday????
• ???attP?attB??????,?????????????

45
(No Transcript)
46
??? ????

• ????( Illegitimate recombination)
• ????????DNA????????
• ????????????DNA???????????
• ???????????RecA??????

47
???
???? ???? ???? ??????? Holliday ??

• ???
• ?????????????
• ??????????Holliday??????????
• ??????????????????????????
• ?DNA???????????(?????????????)?
• ????????????????,???????????

48
?-DNA?????? 1,???(att??) attB
???????,?B,O,B???? attP ?-DNA???,?P,O,P????
2, ????(O??) 15bp,? attB?attP?????
-GCTTTTTTATACTAA-
-CGAAAAAATATGATT- 3,B,B,P,P?????????????