FLUORESCENCIA

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FLUORESCENCIA

• BASES TEORICAS
• USO DE PAM

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FLUJO DE ENERGÍA
Calor (17 18)
Luz (100)
Fotosíntesis ( 80)
Fluorescencia (1 2)
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Back 1
Back 2
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QA-
QA
En
e-
Fm
Fo
hv
P680
P680
C.R. Cerrado
C.R. Abierto
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Porque medir la fluorescencia?
Luz emitida como fluor.
Rendimiento cuántico de la fluorescencia
Luz absorbida

• Como forma de inferir sobre los otros procesos
  relacionados a la fotosíntesis

Como medir el rendimiento cuántico de la
fluorescencia?

• Sistemas de medición modulada o sea fuente
  luminosa es activada y desactivada a una alta
  frecuencia y un detector mide la luz emitida como
  fluorescencia (685 nm)

Phyto - PAM
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Luz emitida como fluorescencia
Rendimiento Quántico de la Fluorescencia (FF o
FPSII)

Luz absorbida
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De la luz absorbida, cual proporción es usada en
la fotoquímica INDICADOR DE EFICIENCIA DEL PSII
Proporción de CR abiertos
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Que hace variar a qP?

• CR que se cierran, debido a saturación de los CR

Que hace variar a Fv/Fm?

• Cambios en la eficiencia de qN
• Valores están alrededor de 0.7 (P/fitoplancton)
• Valores inferiores se relacionan a stress
  (fotoinibicion !!!)

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NPQ qn

• Sus cambios están relacionados a cambios en la
  eficiencia de disipación de calor en comparación
  a la muestra aclimatada a oscuridad
• Su incremento se relaciona a procesos de
  protección al exceso de luz
• Se puede evaluar a través del tiempo que cada
  proceso toma para regresar a su estado de
  oscuridad o estacionario (relaxation time)
  después de un tiempo de iluminación minutos a
  horas
• Se divide en qE, qT y qI.

El principal qE

• qE high energy state quenching
• pH bajo en el lumen y formación de zeaxanthina
• Que pasa? Si alga vuelve a estar en oscuridad qE
  va a disminuir en cuestión de minutos

TODOS LOS PROFESOS QUE SE RELAJAN EN POCOS
MINUTOS DESPUES DE ENTRAR EN OSCURIDAD REFLEJAN
MECANISMOS DE FOTOPROTECCION
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Serodio et al., 2005
LA
Dark
LB
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ETR Tasa de Transferencia de Electrones (TTE) -
mmol electrones. m-2. s-1
k cte. que depende de la especie o grupo e
indica la fracción de la luz absorbida que es
direccionada para PSII (en comparación a PSI).
Luz absorbida (PFDa Photon Flux Density)
o
Diatomeas 0.80 (80 de la Cla esta asociada a
PSII) Clorofitas 0.50 Dinoflagelados 0.80
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Unidades

• ETR mmol electrones. m-2. s-1
• fPSII mol separación de cargas. mol quanta-1
• mmol. m-3. h-1
• af (400-700 nm) m-1
• E (Irradiancia PAR) mmol quanta. m-2. s-1

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mg C. mg Chla. h-1 mg O2. mg Chla. h-1
(mg C. mg Chla-1. h-1)(mmol. m-2. s-1)-1 (mg O2.
mg Chla-1. h-1)(mmol. m-2. s-1)-1
Irradiancia, E (PAR)
fCO2 fO2
aB/ af
mg C. mg Chla. h-1 mg O2. mg Chla. h-1
(mg C. mg Chla-1. h-1)(mmol. m-2. s-1)-1 (mg O2.
mg Chla-1. h-1)(mmol. m-2. s-1)-1
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ETRmax
ETR
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Como comparar?
Porque comparar?

• son necesarias 4 separaciones de carga
  (electrones) para producir 1 molécula de O2

fO2 0.25 fPSII

• t 0.25

(Máximo valor teórico)

• PPB (mmol O2. m-2. s-1) ETR x t

• PPB (mg O2. m-2. s-1) ETR x t x 0.032

• PPB (mg C. m-2.s-1) ?

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En Gilbert et al, 2000
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(No Transcript)
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(No Transcript)
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(No Transcript)
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Phyto-PAM
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(No Transcript)
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(No Transcript)
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(No Transcript)
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Phyto-PAM

• Luz de medida para determinar el nivel basal de
  fluorescencia de alga adaptada a oscuridad

Canal 1 470 nm Canal 2 520 nm Canal 3 645
nm Canal 4 665 nm
0.3 mE.m-2.s-1
655 nm hasta 2000 mE.m-2.s-1

• Luz Actínica

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(No Transcript)
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EJEMPLO
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HPLC
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Coeficiente de Absorcion normalizado
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(No Transcript)
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(No Transcript)
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(No Transcript)