??????????????? ??????? - PowerPoint PPT Presentation

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??????????????? ???????

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... and charged residues for control of protein partitioning in PEG potassium phosphate aqueous two-phase systems//Bioseparation 9: 69 80, 2000. – PowerPoint PPT presentation

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Title: ??????????????? ???????


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RbCl 25 1,35
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M. Sardar M. N. Gupta. Alginate beads as an
affinity material for alpha amylases//
Bioseparation 7 159165, 1998.
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51
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58
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59
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60
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61
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Na-???????? c??????    ?????????????????, NaCl
Na-???????? c??????    ????????, NaCl
62
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?????????????? ??????????????
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Na-???????? c?????? ??????????????????????
63
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????? ???. ??? ????? 4000 6000 20000 40000
???????? ? 12384 0,17 0,17 0,13 0,12
?????????? 45000 1,25 0,85 0,50 0,50
??? 69000 0,52 0,34 0,14 0,11
??? 140000 0,13 0,08 0,05 0,10
???????? 250000 0,82 0,38 0,16 0,10
??????????? ?? ???. ???? ??? ? ?? ???????? ??????
?? ??????????????
64
?????? ?????????? ???????
??????????????? ???????????? ??? ???????????
?????????????
????????????? ????????????? ?????????
???????????? ??????????. ??????????? ????????
??????????????? ????????? ? ???????????????
??????????? ? ??????? ???/????
????? ????????? ??????????? ? ????????????????
????????? ??????? ? ?????? ?????????? ?????????
????.
Teresa Cunha and Raquel Aires-Barros. Large-Scale
Extraction of Proteins//MOLECULAR BIOTECHNOLOGY
Volume 20, 2002, ?. 29-40
65
???????? ?????? ? ????????? ?????????????
  • ????????????? ??????? ?????? ?????????????? ?
    ?????????? ???????? ??????? ???????? ???????????
    ???????? ?????????.
  • ???? ?? ????????? ???????????? ??????????? ?????
    ????????????? ? ???? ????????? ???????,
    ???????????? ? ????????????? ????? ??? ??????
    ??????. ??? ???? ????? ??????????? ???? ?????????
    ???????????? ?????????????.

66
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  • ??? ??????????????? ??????????? ?????? ????????
    ?????? ????????? ???????? ???????? ???????????,
    ?????????? ??????????????? ??? ???????????
    ??????? ????????? ????? ????????????? ????????
    ????????. ??? ??????????????? ???????????????
    ????? ? Staphylococcus aureus, ??????
    ????????????? ? ???????????????? ???????, ?
    ?????????????????? ???? ???? ????????????
    ?????????, ?????????? ???????, ???????????
    ????????? ??????????. ??? ????????????
    ???????????????? ???????????????? ???????????????
    ????? ? ????? ?? ???.

Kristina Berggren, Folke Tjerneld, Andres Veide.
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?????????????????? ??????
  • ??? ??????????????? ????????? ??????? ?????????
    ??????????????????? ???????? ??? ???????
    ?????????? ???????????? ?????????
    ???????????????? ???????? ????????????????,
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  • ??????? ?????????? ????? ??????
    ??????????????????? ???????????????? ???????
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68
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  • ????? ????????????? ??????? ?? ???? ?????????
    ?????? ?????? (????) ? ????? (????). ??????? ???
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    ??????????? ????? ????????, ? ???????? ??????????
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    ????????? ?????????? ??? ???????? ???????.

?????? ????????? ???? (18721919)
69
?????????????????? ??????
  • ? ????????? ????? ???????????? ????????? ????
    ??????????????????? ??????????, ?????????? ??
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    ??????????? ????? ? ????????
  • ????????????????? ?????????????
  • ????????????? ? ?????????? ?????
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  • ????????????? ?????????????
  • ????????????? ?? ???????????? ?????
    (????-??????????? ?????????????).

70
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    ????????? ?????????? ??????????? ?????.
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    ????????? ????? ? ?????? ?????? ????????
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    ??????????? ????? ????? ????????? ? ???????????
    ??????? ??????, ?????????? ??????????? ?? ????
    ???????? ? ????????????? ?????????????
    ??????????? ??????????? ????? ????? ????????? ?
    ??????????? ??????. ?????? ??????????? ???? ?????
    ???????. ???? ??????????? ???? ????? ??????????
    ????????????? ? ?????????? ????? (RPC Reversed
    Phase Chromatography).

71
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    ?????????? ????????? ??????? ???????????
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    (????-??????????? ?????????????,
    ????-??????????) ??????? ???????????? ?????
    ??????? ????, ??????? ????, ? ??????? ?????
    ????????? ???????? ??????????? ? ???????? ????
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    ????????????, ????????? ??? ??????? ???????
    ???????, ??????????? ????????? ????????????
    ????? ???????? ???????????? ??? ? ?????????????,
    ??? ? ?? ???????????????? ??????, ???????
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    ????????????? ????????????. ??????????
    ??????????? ?? ???? ?????? ???????? ???????????
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    ??? ???? ??????? ???????? ??????? ???????? ?
    ??????? ?????????

72
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  • ???????? ?????????????. ??????? ????????????
    ????? ??????? ????????, ? ???????? ?????????
    ???????????? ??????????? ??????????? - ???????,
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    ??????????? ??????????? ????? ?????????
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    ????????? ? ??????? ? ????????? ?????? ???????).
  • ?????????? ?????? ?????????????, ?????????? ? ??
    ?????? ?????????, ??? ??? ???????
    ?????????????????? ??????? ??????????
    ????????????.

73
???????????? ?????????????
  • ? ???????????? ????????????? ???????? ?????
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  • ??????????????? ?????????? ??????? ?
    ??????????????. ? ???????? ???????????? ????? ?
    ????? ???????? ?????? ???? ??????????? ?
    ??????????? ???????????? ?? ? ????????????
    ?????????? ??????????? (??? ????????? ???????
    ?????????), ???? ???????????? (??? ?????????
    ??????? ??????????) ???????????? ?????
    ?????????? ????????? ??????? ? ??????????????,
    ?????????? ??????? ???????????.
  • ??????????????? ???????????? ?????????,
    ?????????-?????? ??????????? ?????????, ???????,
    ???????????????? ????????? ? ????????? ??????????
    ??????????? ?????????? ??? ????????? ?????????.

74
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    ??????? ???????????? ??????? ??? ????????????
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    ???????????? ??? ?????????? ?????????????????
    ??????????? (????????????, ??????????,
    ??????????? ? ?. ?.).
  • ??????????? (?????, ??????????? ???????,
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    ??????????????? ???????? ??-?? ???????
    ??????????????? ? ??????????? ??????????? ???????
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    ???????????????? ??????????.

75
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    ???????????? ?? ?????????????? ?????????, ???????
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    ????? ???????, ????????? ?????? ?????????
    ???????? ????????????? ??? ???????? ???????.
    ????? ????????? ???????????? ??????????????
    ??????????? ?? ??????? ?????????? ?????.
  • ????? ???????? ??? ?????????????????? ???????
    ??????????? ???????????, ???? ???????
    ??????????????? ?????????? ? ????????? ????????
    ????????.

76
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-C2H4SO3- ??????????- SE-
-C3H6SO3 - ????????????- SP-
-PO32- ?????- ?-
?????? ????????? ?????? ????????? ?????? ?????????
-???- ????????- ?-
-??2???- ?????????????- ??-
77
???????????? ?????????????
??????? ???????? ???????????
??????? ???????? ??????? ???????? ??????? ????????
-CH2 N(CH3)3 ??????????????????- ???-
-C2H4 N(C2H5)3 ????????????????- ????-
-C2H4N(C2H5 )2 ?H2?H(OH)CH3 ??????-2-??????????- ?????????- QAE-
?????? ???????? ?????? ???????? ?????? ????????
-?2H4NH3 ?????????- ??-
-?2?4NH(C2H5)2 ???????????????- DEAE-
-(C2H4 N ?H2)nC2H4NH2 ??????????????- PEI-
-CH2-C6H4 -NH3 ???????????????- PAB-
78
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  • ????-?????????? ???????????? ??? ????????????????
    ??????????? ????????? ?????????? ??????????
    ??????, ? ?? ?????? ??????? ???????????
    ????????????? ???? ????????? ?????. ??????, ???
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79
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  • ???????? ????????????? ??????????????? ????????
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    ???????????? ???????? ????????? ? ???? ???????
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    ?????????????? ???????? ????????? ??? ??????????
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    ???????????????? ???????? ? ???????? ???????? ???
    ??? ??????????. ???????? ??????????????? ?????
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    ????????, ??? ???????? ??? ???????? ????????????
    ????? ?????????????? ?, ?????????????, ???
    ??????? ???????? ?????????? ?????????????? ????
    ???????. ??? ????? ????????? ? ?????????? ???
    ???????????????? ????????, ??? ? ????????.

80
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  • ?? ?????? ?????? ???????? ????????? ?????????
    ?????????, ?????????? ? ???????? ???????? ???????
    ?? ???????? ?? ?????????? ? ?????????? ?????????
    ? ?????? ?? ????????? ???????? ??????
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    ??????????? ?????????? ?????? ? ??????????.
    ??????????????? ?????????? ???????? ???????????
    ???????? ???????????? ?????????. ????? ?????
    ????????? ? ??????? ?????????? ???????????
    ???????? ??????????????? ???????????????? (??????
    ?? ?????????????? ????????) ?????????. ????????
    ???????, ????? ?? ???? ?????? ??????? ? ??????
    ??????????? ??????? ????? ? 1 500 ??? ???????????
    ??? ?????? ??????????.

81
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?????????? ???????? ? ??????????? ??????????,
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82
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  • ? ???????? ?????? ??? ??????? ???????? ?????????
    ???????????? ??????????? ????????, ???? ?????
    ????????????.
  • ????????? ?????????? ? ???????? ??????????????
    ???????
  • - ??????????????? ? ????
  • - ??????????? ????????????? ? ??????? ????????
    ???????????
  • - ??????? ????????? ? ?????????? ????? ??????
  • - ??????? (??? ???????????) ???????????
    ???????
  • - ?????????? ???????????? ? ????????
    ????????????? ???????, ?????????????
    ????????????? ? ???????????
  • - ???????????? ? ????????? ? ??????????????
    ??????????
  • - ??????????????.

83
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?)
?)
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??????? ???????? ????????? ?) ???????? ?)
????????? ?) ??????? ?? ?? ???????? ?????
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???????????? ??? ? ?????? ?????????
?)
84
???????? ?????????????
  • ????????????? ?????????? ???????????????
    ?????????????? ?????? ????????? ?????????? ? ??
    ????????? ????????, ??????????? ?? ???????????
    ??????????? ???????.
  • ? ????? ????????? ????????? ???????????
    ?????????????? ?????????????????? (????- tags)
    ?? ?????? ????????????? ???? ?????, ??????????
    ???????? ? ???????????? ????????, ??????????????
    ? ???????? ???????? ?????????.
  • ????? ?? ???????? ???????????????? ??????????
    ???????? ??????????????????, ??????? ?????????
    ?????????. ??? ???????????? ?? ???? ?????????????
    ????? ?????? ? ?????????? ?????? ??????????? ?
    ??????????, ??????????? ???? Ni2 ??? Co2.

85
???????? ?????????????
  • ??????? ??????? ? ??????? ??????????????
    ??????????? ????? ????????? ?? ??????????
    ?????????, ?????????? ? ?????? ????. ???????
    ????? ?? ??????????? ?? ??????? ?????. ?
    ????????? ??????? ??? ??????????? ?????????????,
    ? ????? ?? ????? ??????? ? ??????? ???????????
    ?????????? ???????, ? ?????????, ?????????????
    ????????? Novozym.

86
???????? ?????????????
  • ? ???????? ??????? ???????????? ???????
    ?????????? ?????? MKHQHQHQHQ, ?????????????? ?
    N-????? ???????? ?????. ????? ????????? ????????
    ????? ??????? ????????? ??????????
    ?????????????????????????.
  • ???? ?????????????????? ???????? ?????
    ??????????? ???????????? ? ???????? ?????
    ????????, ??????? ??????????? ??? ?????
    ???????? Q, ??????? ????? ???????????? ?
    ????????????-??? ??????? (? ???????
    ???????????????), ? ????? ?????????
    ????????????-??????????????? ? ????? ??????????
    ???????? ??????? ?????.

?)
?)
Pedersen J., Lauritzen C., Madsen M.T., Dahl S.W.
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15. P. 389400.
87
???????? ?????????????
?????? ???????????? ????? ???????????? ? ??????
????????? ?????????
??????? ?????? ?????? (?. ?.) ?????????????????? ?????? (kDa)
????-Arg 56 (?????? 5) RRRRR 0.80
????-His 210 (?????? 6) HHHHHH 0.84
FLAG 8 DYKDDDDK 1.01
Strep-tag II 8 WSHPQFEK 1.06
c-myc 11 EQKLISEEDL 1.20
S-?????? ?????? ? 15 KETAAAKFERQHMDS 1.75
HAT 19 KDHLIHNVHKEFHAHAHNK 2.31
3x FLAG 22 DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK 2.73
88
???????? ?????????????
??????? ?????? ?????? (?. ?.) ?????????????????? ?????? (kDa)
??????????-??????????? ?????? 26 KRRWKKNFIAVSAANRFKKISSSGAL 2.96
?????????-??????????? ?????? 27189 ?????? 3.00-20.00
SBP 38 MDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQGQREP 4.03
?????-??????????? ????? 51 TNPGVSAWQVNTAYTAGQLVTYNGKTYKCLQPHTSLAGWEPSNVPALWQLQ 5.59
89
??????? ? ??????? ?????? ??? ????????? ????????
??????????
???????? ???????? ??????? ??????? ??????
Poly-Arg ??????????????? ????? ???????? ???????? NaCl (0 to 400 mM), pHgt8.0
Poly-His Ni2 -NTA Co2-CMA (Talon) ???????? 20-250 mM ??? ?????? pH
FLAG ????-FLAG ?????????????? ?? pH 3.0 or 2-5 mM EDTA
Strep-tag (AWRHPQFGG) Strep-Tactin (???????????????? ????????????) 2.5 mM ????????????
c-myc (EQKLLSEEDLN) ??? ?????? pH
S S-???????? ?????? ? 3 M ????????????????????, 0.2 M ??????, pH 2, 3 M MgCl2
HAT (????????? ???????????? ????????) Co2 -CMA (Talon) 150 mM ???????? ??? ?????? pH
90
??????? ? ??????? ?????? ??? ????????? ????????
??????????
???????? ???????? ??????? ??????? ??????
??????????- ??????????? ?????? ?????????? EGTA ??? EGTA ? 1 M NaCl
?????????-??????????? ????? ????????? ????????? I ???????? HCl ??? ???????? gt4 M ????????? II/III ?????????????
SBP ???????????? 2 mM ??????
???????????????? ????? ????? ???? ? ???????? 30-50 mM ??????????, ß-????????-?????? ??? ???????
????????? S-??????????? ????????? 5-10 mM ??????????????? ?????????
????????????????-??? ????? ????????? ?????? ??????? 10 mM ????????
91
?????????? ???????????
? 1990 ?. ? ?????? ?????? ??? ????????????
????????? ???? a-??????????? ?????????? ??????
????????? ??????? ???? ??????????, ??? N- ?
C-???????? ??????? ???? ??????????? ?????????
????? ?????? ??????????, ? ?? ????? ???
??????????? ????? ???? ????? ????????? ??
?????????. ???? ???????? ???? ???-??? ??????
?????? ?? ????????? ????????? ???? ?? ???????,
??????????? ????????????. ??? ?? ????????
????????. ?????? ?????????? ???????? ? ????? ????
??????????????????? ??????????? ??????, ? ????
???????? ?????????? ???????? ?????????
?????????? ????????? ???????? ??????????,
????????? ???????????? ?????????, ?????????
???? ?? ????????????? ???? ? ?????????????
??????????? ???????? ?????????? ????????? ?
???????????? ????????? ????????? ????????. R.
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?????????? ???????????
????? ??????????? ????????????? ????????? ????? ?
???????? ????????? ??????????
????-????? ?????????? ?????????.
93
?????????? ???????????
????????? ???????????? ? ?????? ??????????
???????????????????. ?????? ????????????
N-????????? ??????? (?) ? ?-????????? ????????
?????, ??????? ??? ???????, ???? ??????????? ?
??????? ??????? ? N-??????? ????? ??????????.
???????????? ?? ?-????? ??????? (???? G) ????
????? ?????????, ???????????? ??? ????????. ?,
???????, ? ????? N-???????? ????? ??????? ??????
???????????? ?????????????????? Thr-x-x-His. ???
???????????? ?????? ????????????? ???? ?
????????? ??????? ? ????????? ?????????
??????????.
94
?????????? ???????????
  • ?????? ??????????? ?????? ??????????????????
    ???????. ?????? ??? ???????????? ??? ?????? ??
    ????????????? ?????. ????????? ??????
    ?????????? ??????????????? ? ????????????
    ?????????? ????????? ?????.
  • N-X-???????? ???????? ????????????? ?????
    ??????? ??????? ???????, ??????????????
    ???????????? cys/ser, ?? ???????? ????????????
    ??????? ????????
  • ???????????????? ?????????????? ???????
    cys/ser/thr ?? N-????? ?-???????? ? ???????? 1
    ??????? ????? ???????????? ????????????? ?????? ?
    ????? ??????????
  • ?????????? ??????????. ??????? ???????????
    ??????? ???? ?????????? ?? ?-????? ????
    ?????????? ??????? ??????????? ????????????
    ??????? .??????? ?????????? ??????????? ?
    ???????????? ?-????????? ????????????????
  • ???????? ????????? ??????? ?? ????????? ? ????? ?
    ???????????? ?????????? ??????? (?????????) ?????
  • ??????? ? ???? ????????????? ????????? ?????

95
???????????? ?????????? ??????????????????
?????????
  • ???????? ?? ??????? ????????????
    ?????????????????? ??????? ?? ?????????
    ?????????? ??????????? ????????? ???????
    ???????????? ? ??????? ??????????.
  • ????????? ?????????? ????????????? ??????????
    ??????????????????? ???????? ????????
  • ?????????????????? ???????
  • ????????? ? ????????
  • ????? ??? ?????? ???????
  • ????????????? ?????????? ??? ??????????? ?????? ?
    ??????? ??????????? ??????????? ?????
  • ????????? ???????.

96
???????????? ?????????? ??????????????????
?????????
  • ???????? ?? ??????? ????????????
    ?????????????????? ??????? ?? ?????????
    ?????????? ??????????? ????????? ???????
    ???????????? ? ??????? ??????????.
  • ????????? ?????????? ????????????? ??????????
    ??????????????????? ???????? ????????
  • ?????????????????? ???????
  • ????????? ? ????????
  • ????? ??? ?????? ???????
  • ????????????? ?????????? ??? ??????????? ?????? ?
    ??????? ??????????? ??????????? ?????
  • ????????? ???????.

97
???????????? ?????????? ??????????????????
?????????
  • ????? ????????? ???????? ????????? ???????
  • ??????? ?????????? ?????????? ?? ??????? ?
    ????????? 1, ???? ?????? ????????? ???????????
    ?????
  • ??? ??????????? ??????????? ??? ??????????
    ??????????? ??????? ???????? ???????? 4
  • ??????? ??????? ???????? ?? ?????? 5 (?????????),
    ? ? ?????? 6 (?????????) ????? ?????????? ??????
    ? ????????????, ??????? ?????? ????????????
    ?????? ?????????? ? ??????? ???? ???????????
    ?????. ?? ???? ????????????????? ??????????
    ????????? ? ?????????? ? ????????? ????????????
    ??????? ?????????? ????????, ??? ??? ??????????
    ????? ??????????? ? ??????? ?????????? ?
    ??????????? ?? ????????? ?? ?????????? ?
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