Uso Racional y Manejo Integrado de Biol

1
Uso Racional y Manejo Integrado de Biológicos y
Antibióticos en Granjas Comerciales de Tilapias

• Dr. Jorge Martínez Aguayo
• Médico Veterinario
• Schering Plough Aquaculture

2
Tópicos

• Introducción
• Antecedentes Generales
• Quimioterápicos y Antimicrobianos
• Biológicos
• Consideraciones finales

3
Introducción

• Factores que afectan el rendimiento productivo
• - ambientales
• - metabólicos
• - infecciosos

4

• Prevención
• - Vacunas
• - Inmunomoduladores y/o
• Hepatoprotectores
• Terapéutica
• - interno
• - externo

5
Control según etiología

• Virus
• Vacunas
• Inmunomoduladores
• Bacterias
• Vacunas
• Inmunomoduladores
• Antibióticos
• Parásitos
• Antiparasitarios externos e internos
• Inmunomoduladores

6
Quimioterápicos y Antimicrobianos de uso en
Acuicultura Diversos Estudios
7
Antecedentes

• La Farmacocinética y la deplesión dependen de
• - Factores de la droga
• - Factores del pez
• - Otros

8
Antecedentes (2)

• I- Droga o producto farmacéutico
• - Ingrediente activo Síntesis de la droga,
  formas quirales
• - formulación -Tipos de excipientes
• - manufactura
• - Tamaño de partículas
• - Manufactura de la droga, excipientes y en
  conjunto.

9
Antecedentes (3)

• II- Pez
• - funcionalidad branquial, hepática y renal.
• - Especie
• - Genética
• - Peso
• - estado sanitario
• III.-Ambiente
• - T, O2, Salinidad

10
Drogas

• - Amoxicilina
• - Ac. Oxolínico
• - Flumequina
• - Sarafloxacino
• - Oxitetraciclina
• - Florfenicol

11
Amoxicilina

• B-lactámico
• Gram () y (-)
• Dosis 80-160 mg/kg por 14-21 días
• Presentación comercial 50
• MIC V. anguillarum 0,04-0,08 ug/ml
• MIC Pasteurella piscicida0,04-0,08 ug/ml
• Concentración plasmática 1 ug/ml

12
Amoxicilina (2)

• F oral 0,33 en peces. En mamíferos 60-70
• Baja distribución tisular
• Rápida eliminación
• Indicaciones terapia contra RTFS, Vibrio y
  Aeromona.
• 95 antibiogramas sensibles F. psychrophylum

13
Amoxicilina (3)

• Ensayo
• Ensayo T 22 C 32o
• dosis I.V 40 mg/kg
• oral 80 mg/kg
• Conc. En alimento 8 g/kg
• En la diapositiva siguiente I y II corresponden a
  la técnicas de detección de residuos.

14
Amoxicilina (4)
15
Solubilidad Quinolonas
16
Acido Oxolínico

• Quinolona, derivada del Acido Nalidíxico
• Anillo pirimidínico
• Una de las primeras quinolonas
• Menor difusión en tejidos en comparación a otras
  quinolonas.
• La metabolización es la misma vía en SW y FW
• Metabolitos se excretan por la bilis
• Metabolización por conjugación con ácido
  glucorónico

17
Acido Oxolínico Estudio N1

• Determinación de deplesión de OA, usando dosis de
  20 mg/kg IV en FW y SW
• Metabolización es similar en agua dulce y agua de
  mar.
• Cambia la tasa de excreción (función renal)

18
Concentración de OA
19
Concentración de OA
20
Acido Oxolínico Estudio N2

• Estudio de Biodisponibilidad
• Dosis oral única dos grupos en agua de mar
• Experimento 1 (T1) y experimento 2 (T2)
• Salares
• Post-administración alimento medicado
• Salinidad 25
• T1 9 mg/kg 9 w 1108 g 1g/kg
• T2 26 mg/kg 7,5 w 932 g 5g/kg

21
Acido Oxolínico Estudio N2

• T1 9 mg/kg 9C Cmax 1,7 ug/ml Tmax 10,8
  hrs
• T2 26 mg/kg 7,5C Cmax 2,1 ug/ml Tmax 24,3
  hrs
• Resultado
• La biodisponibilidad del OA disminuye al aumentar
  la dosis.
• Con producto micronizado aumenta a 50

22
Acido Oxolínico Estudio N2
23
Acido Oxolínico Estudio N2
24
Acido Oxolínico Estudio N2
25
Acido Oxolínico Estudio N3

• Comparación de biodisponibilidad y deplesión
  entre OA y UB.
• Salares w 425 g Temperatura 5 C, 30
• OA Cmáx 0,99 ug/ ml 25 mg /kg (oral)
• UB Cmáx 2,26 ug/ ml 25 mg /kg (oral)
• F() OA (25 mg/kg) 40
• OA( 50 mg/kg) 25
• UB (25 mg/kg) 40-45

26
Acido Oxolínico Estudio N3
27
Acido Oxolínico Estudio N3
28
Flumequina

• Quinolona 2a generación
• Altamente liposoluble
• Bactericida
• Ingreso a través de MC y canales específicos
• Eliminación riñón y branquia 90
• Eliminación por vía digestiva 10
• Circulación enterohepática

29
Flumequina

• Toxicidad 120-240 mg/kg, sin signos externos. No
  mortalidad
• Truchas hasta 150 veces la dosis terapéutica
  (10 mg/kg)
• LD50 1077 mg/kg

30
Flumequina

• Ensayo en FW, para demostrar que la deplesión es
  termodependiente.
• Truchas 498 gr promedio
• Temperatura de 3C y 13C
• Inyección IV única de 4,9 mg/kg

31
Flumequina Ensayo N1
32
Flumequina Ensayo N1
33
Sarafloxacino

• Aryl-fluoroquinolona
• MIC s
• Aeromona salmonicida
• Vibrio salmonicida
• Vibrio anguillarum
• Yersinia ruckerii
• Varian entre 0,0025-0,3

34
Concentración plasmática SFX y MIC
35
Concentración plasmática SFX y MIC
36
Sarafloxacino

• Estudio N1
• Salares T 8,5 C. W 163 g
• Dosis 10 mg/kg. Administración IV y oral
• C max 0,08 -0,7 ug/ml
• F() 3,6 a 23,9

37
Concentración plasmática SFX diferentes
formulaciones Estudio N1
Parámetros Farmacocinéticos
38
Concentración plasmática SFX diferentes
formulaciones Estudio N1
39
Concentración plasmática SFX diferentes
formulaciones Estudio N1
40
Conc. plasmática de quinolonas en salares a
diferente tiempo post-administración oral e iv
Estudio N2

• Salmo salar
• SW
• Temperatura 10C
• W 240 g

41
Conc. plasmática de quinolonas en salares a
diferente tiempo post-administración oral e iv
Estudio N2

• 1.- Adm. Oral
• OA y UB 25 mg/kg
• SFX y ENRO 10 mg/kg
• 2.- Adm. I.V
• OA y UB 25 mg/kg
• SFX y ENRO 10 mg/kg
• Determinación en suero usando
• HPLC-Fluorescencia

42
Conc. plasmática de quinolonas en salares a
diferente tiempo post-administración oral e iv
Estudio N2
43
Conc. plasmática de quinolonas en salares a
diferente tiempo post-administración oral e iv
Estudio N2
44
Conc. plasmática de quinolonas en salares a
diferente tiempo post-administración oral e iv
Estudio N2
45
Conc. plasmática de quinolonas en salares a
diferente tiempo post-administración oral e iv
Estudio N2
46
Conc. plasmática de quinolonas en salares a
diferente tiempo post-administración oral e iv
Estudio N 2
Parámetros Farmacocinéticos
47
Oxitetracilina

• Dosis 75-120 mg/kg por 15 a 21 días
• RTFS 300 mg/kg por 21 días
• Inmunosupresión mecanismo no claro. Posible
  inhibición de mitosis.
• Cmax 1,8-1,9 ug/ml en plasma
• 3,2 ug/ml en suero
• MIC para SRS 1-10 ug/ml

48
Oxitetracilina

• 1.- Ensayo en Chinook
• SW
• 75 mg/kg 21 días 9C
• 75 mg/kg 21 días 15C
• w 55 gramos

49
Concentración (ug/ml) OTC Chinook post.tratamiento
50
Deplesión OTC
51
Oxitetraciclina

• OTC alcanza conc. similares a los 9 y 15C
• Los residuos de OTC en músculo caen bajo el LOD
  de 0,05 ug/g a los días 41 y 65 días post
  tratamiento a las temperaturas de 15C y 9C

52
ResumenBiodisponibilidad

• Amoxicilina 2
• Sarafloxacino 2
• Oxitetraciclina 3 (6-8)
• Ac. Oxolínico 25
• Flumequina 45
• Enrofloxacino 56
• Florfenicol 97

53
Florfenicol
54
Contenidos

• Aquafen
• Antecedentes
• Mecanismo de acción
• Cinética
• Toxicología
• Eficacia
• Medio Ambiente y Regulatoria

55
Antecedentes

• Acción bactericida
• Amplio espectro Gram () y Gram (-)
• Amplio margen de seguridad
• Mecanismo de Acción
• Acción bactericida
• Inhibición de la síntesis de proteínas
  bacterianas por acoplamiento a la sub-unidad
  ribosomal 50s

56
CLORAMFENICOL
OH-CH2OH O
C- C- N-C-CHOL2
O2N
H- H- H
El grupo Nitro es responsable de inhibir la
síntesis proteica en células de la médula osea de
humanos y otros mamíferos.
57
Molécula
58
Cinética

• Absorción
• Distribución
• Metabolismo
• Excreción

59
Cinética

• Estudios de cinética en varias especies
• Ratas presentan un metabolismo similar a los
  salmónidos A, D, M y E.
• Absorción intestinal con un 96
• Buena difusión en tejidos.
• Concentraciones máximas alcanzadas a las 12 hrs
  después de la dosis administrada.

60
Cinética

• Concentraciones máximas alcanzadas de FFC en
  músculo sobrepasan las CMI registradas para la
  mayoría de las bacterias patógenas.
• Máx. concentración 6 a 12 hrs después dosis
  final.
• Clearence termodependiente.
• Residuos más bajos en músculo que en piel

61
Cinética

• Llega a todos los tejidos (grasa, piel y cerebro)
• No se acumula en piel
• Atraviesa BHE
• Estudios hechos con dosis única de 10 mg/kg
• A mayor dosis, la Cmax alcanzada es mayor.
• Concentraciones séricas alcanzadas
  post-administración de 10 mg/kg vía oral varía de
  4,0 a 9,1 ug/ml

62
Concentración plasmática de Florfenicol
63
(No Transcript)
64
(No Transcript)
65
(No Transcript)
66
2004 Cod (Gadus murhua)

• W 65 12 g
• T 12 0,5 C
• SW 330
• Vía per. os.
• Vibrio sp.
• Cod.
• Bergen, Noruega.
• Dosis
• Acido Oxolínico 10 20 mg/kg
• FFC 10 20 mg/kg

67
2004 Cod (Gadus murhua)

• MIC para Vibrio
• FFC 0,5 ug/g
• OXO 0,016 ug/g

68
Mortalidad
Mortalidad
Dosis OXO FFC Control
10 mg/kg 34 31 87,5
20 mg/kg 28 20
69
Farmacocinética
Plasma Músculo
FFC (mg/l) (mg/kg)
10 mg /kg 24 hrs 5,0 1,6 4,6 0,9

20 mg/kg 24 hrs 6,8 1,3 7,0 2,7

OXO
10 mg/kg 24 hrs 0,8 0,2 1,9 0,4

20 mg/kg 24 hrs 1,4 0,6 3,4 1,1

70
Gourami Koi
71
2005 Koi Gourami

• 1.- Koi Cyprinus carpio
• W 144 44 g
• 2.- Three spot o Gourami Trichogaster
  trichopterus
• W 19 3 g
• T 24-25 C
• pH 7,8-8,0
• O2 6-8 ul/L
• NH4 0,8 mg/L
• NO2 0,04 mg/L

72
2005 Koi Gourami

• Koi Cyprinus carpio
• Three spot o Gourami Trichogaster trichopterus
• Vía IM y per os.
• Dosis oral ambas especies 50 mg/kg
• Dosis I.M ambas especies 25 mg/kg
• Universidad de Florida

73
Koi Gourami
Vía Oral Intramuscular
Especie Koi Gourami Koi Gourami
Cmáx 12,3 ug/ml 2,6 ug/ml 18 ug/ml 28 ug/ml
Tmáx 3,0 5,0 25,0 3,0
Dosis 50 mg/kg 50 mg/kg 25 mg/kg 25 mg/kg
74
Toxicología

• DL50 gt2.000 mg/kg Oral e IP. (en ratas)
• El metabolismo de FFC en el salmón es
  cuantitativamente similar al metabolismo en
  ratas.
• No presenta problemas de palatabilidad ni
  reacción adversa o conducta clínica anormal aún
  administrando 10 veces la dosis.

75
Toxicología

• Se probaron dosis 10, 50 y 100 mg/kg. Las 2
  últimas alternando 10 días de medicación y 10
  días sin medicar (33 días de alimento medicado).
• Se evaluó mortalidad y cambios histológicos en
  branquias, riñón e hígado. Resultado No hay
  efecto en conducta, mortalidad ni cambios
  histológicos.

76
Impacto ambiental

• Estudios de FFC y metabolitos
• Fotólisis
• Biodegradación aeróbica realizada por bacterias
  presentes en el ambiente acuático.
• Vida media 5 días.

77
Impacto ambiental

• Fotólisis a pH 5 a 7 la droga no se degrada en
  presencia de luz natural.
• A pH 9 la vida media de FFC se determinó en 94
  días. (Metabolitos alcohol y ácido oxámico 3 a
  6 semanas a los distintos pH señalados. FFC
  amina 6 a 7semanas.
• Mayor efecto con bacterias en ambiente acuático.

78
Eficacia

• Eficacia sobre Gram () y Gram (-)
• MIC obtenidos en bacterias intracelulares (R.
  salmoninarum y P. salmonis).
• MIC obtenidos en bacterias extracelulares Gram
  (-) (V. salmonicida V. anguillarum Aeromona
  salmonicida Yersinia, Flavobacterium).
• Gram () Streptococcus.

79
Antibiogramas

• Resultados

80
Antibiogramas Flavobacterium psychrophilum
81
Antibiogramas Aeromona salmonicida
82
Antibiogramas Aeromona hydrophila
83
Antibiogramas Streptococcus phocae
84
Antibiogramas Vibrio ordalli atípico
85
Concentración Inhibitoria Mínima

• Agua de Mar

86
Eficacia Aquafen SRS
87
Eficacia Streptococcus
88
Eficacia Vibrio
89
Eficacia Aeromona
90
Eficacia BKD
91
Parámetros farmacocinéticosotros antibióticos
92
Concentración sérica y CMI SRS
93
Concentración sérica y CMI Streptococcus
94
Eficacia Acido Oxolínico SRS
95
Eficacia Flumequina SRS
96
Eficacia Oxitetraciclina SRS
97
Eficacia Sarafloxacino SRS
98
Conclusiones Florfenicol

• FFC y metabolitos no afecta el ambiente acuático.
• Droga segura al dosificarlo.
• No presenta problemas de apetencia.
• Las concentraciones alcanzadas en sangre y
  músculo son mayores a las MIC de la mayoría de
  los agentes bacterianos patógenos.

99
Comentarios Quimioterápicos

• Análisis de los productos ingrediente activo,
  naturaleza de los excipientes, formulación y
  proceso de manufactura.
• Análisis de los alimentos procesos.
• Análisis del medio
• Análisis de los peces
• Análisis del agente CIM-CMB
• Evaluación del tratamiento cinética y depleción.

100
Uso de Biológicos en Acuicultura
101
Inmunoprofilaxis

• Inmunoestimulantes y/o Inmunomoduladores
• Vacunas

102
Modo de Acción de diferentes Tipos de
Inmunomoduladores
Ergosan
103
ERGOSAN

• Inmunomodulador
• Ac. Algínico y Alginatos-Polisacáridos
• Algas Laminaria y Ascophyllum
• - estimula los mecanismos inmunes
  no-especificos.
• - relación con mecanismos más específicos- da
  protección no-especifica contra un sinnúmero de
  enfermedades
• - respuesta de corto plazo
• - dosis y tiempo son importantes

104
Qué es AquaVacTM Ergosan?
105
Mecanismos de Respuesta Inmune
106
Como trabaja Ergosan?
ACTIVIDAD ALGINICA Aumenta el ingreso de
Oxígeno y transferencia a través de la membrana
celular? capacita a las células a realizar su
rol más eficientemente
107
Cómo trabaja Ergosan?
108
Enfermedad Branquial Nodular (NGD) Peces
Calidad Crecimiento

• Ensayo en Chinook salmon
• (O. tschawytscha)
• Dirigido por King Salmon (NZ)
• Regimen del Ensayo
• Tres Ergosan tres control Raceways (110 000
  148 000 por raceway _at_ lt1g)
• Peces alimentados por 10 días _at_ 0.5
  incorporación(2 pulsos con 25 días)
• Grupos separados en la mitad del ensayo en 6
  estanques.
• Datos recolectados Mortalidad, Peso, FCR
• Peces graduados y ensayo finalizado

109
Enfermedad Branquial Nodular (NGD) Peces
Calidad Crecimiento
Pre - División Pre - División Pre - División Post - División Post - División Post - División
Mort () Peso (g) F.C.R (Mean) Mort () Peso (g) F.C.R (Mean)
ERGOSAN 1.6 6.3 0.79 0.05 11.8 0.89
CONTROL 2.1 5.1 0.90 0.15 9.5 0.98
Graduación
Grande Chicos Descarte
ERGOSAN 34 35 32
CONTROL 20 31 49
110
Saprolegnia parasitica Ensayo Infección

• Ensayo en estanques en salmón Atlántico
• Ensayo realizado en una multi-nacional
• Regimen Ensayo
• Peces alimentados por 10 days _at_ 0.5
  incorporación
• Desafío
• Infección permitida para llegar a etapa 3
• Sacrificio
• Recopilación de Datos

111
Saprolegnia parasitica Ensayo de Infección
Progreso de la Enfermedad 10 días
post-infección
TRATAMIENTO ETAPA 1 ETAPA 2 ETAPA 3 ETAPA 4
ERGOSAN 43 7 50 0
CONTROL 1 0 0 100 0
CONTROL 2 0 20 80 0
112
White Spot (I. multifiliis) Ensayo de Infección

• Ensayo en Estanques en Truchas
• Dirigido por Universidad de Stirling
• Régimen del Ensayo
• Peces alimentados por 10 días _at_ 0.5
  incorporación
• Peces control agregados
• Desafío
• Infección
• Conteo de Parásitos

113
White Spot (I. multifiliis) Ensayo de Infección
Resultados Término de la infección
No. PARASITOS
ERGOSAN 400.4 108.5
CONTROL 537.5 101.7
114
Piscicultura

• Salmón Atlántico
• N 240.000 T1 Ergosan T2 Control
• T 7,8 C
• Ergosan Wi 8,32 g 3,9 (CV 44)
• Control Wi 8,50 g 3,9 (CV 42)
• Diferencia 2,1 No significativo
• 3 réplicas cada uno.

115
Peso promedio
116
Peso promedio

• Ergosan Wf 22,22 g 6,18 (CV 30)
• Control Wf 19,11 g 5,54 (CV 32)
• Diferencia 14 Diferencias significativa

117
Mortalidad
118
Mortalidad

• Mortalidad Acumulada
• Ergosan 12,21
• Control 11,38
• No significativa
• Diferencia 6,8
• Causas infecciosas Saprolegnia parasitica IPNv
  y Flavobacterium psychrophylum

119
FCR
120
FCR

• Ergosan 1,75 (Acumulada)
• Control 2,68 (Acumulada)
• 35 diferencia
• No diferencia estadística.

121
SGR
122
SGR

• Ergosan 0,44 (Acumulada)
• Control 0,33 (Acumulada)
• 25 diferencia
• No diferencia estadística.

123
Conclusiones

• - Enfermedades bacterianas, virales, fúngicas y
  parasitarias.
• Uso en varias especies
• - truchas
• - salmón atlántico
• - sea bass
• - camarones
• - tilapias
• - seriola
• Cualquier etapa productiva
• Producto orgánico
• GRAS
• Período de retiro no tiene

124
APLICACIÓN DE VACUNAS

• Vías de aplicación
• a) inmersión a.1) baño
• a.2) diping
• b) Oral
• c) Inyección

125
Inmersión

• ERM (Yersinia) Salmones
• Garvetil (Streptococcus/Lactococcus) Tilapia
• Vibrio (Vibrio)
• Furovac 5 (Aeromona)

126
Oral

• ERM (Yersinia)
• Garvetil (Streptococcus/Lactococcus) Tilapia
• Vibrio (Vibrio)
• Furovac 5 (Aeromona) Salmónidos, Turbot, Sea
  bass, ciprínidos
• IPN Salmones
• Vibromax camarones

127
Inyección

• Furovac 5 Salmones y Ciprínidos
• Vibrio salmones, Turbot, Cod, halibut,
  Sea bass
• IPN Salmones

128
Resultados Vacunas Comerciales
129
Vibromax

• Vacuna inactivada 5 cepas de Vibrios
• Vibrio anguillarum biotipo I
• Vibrio anguillarum biotipo II
• Vibrio harveyii
• Vibrio vulnificus
• Vibrio parahaemolyticus
• Administración oral
• 10 días
• 1 litro 1.000.000 Post-larvas.
• A partir de PL 4

130
Vibromax

• Vehículo Protección Antigénico
• Bioencapsulación
• Ensayo de Laboratorio
• Ensayos de campo
• 3 réplicas y 3 control

131
Vibromax
132
Vibromax
133
Vibromax
134
Vibromax
135
Garvetil

• Vacuna inactivada
• - Lactococcus garviae
• - Streptococcus iniae
• Presentación inmersión y oral.
• Inmersión 1 lt /100 kg biomasa
• Oral 1 lt/ 5.000

136
Ensayo A

• Alevines 1 g
• 100.000 peces vacunados
• 100.000 peces control
• 5 réplicas por tratamiento c/u 20.000
• Vacuna inmersión
• Transferencia al Lago Taal, Filipinas, 4 días
  después de la vacunación.
• Mortalidad acumulada 84 días después de la
  vacunación.
• RPS 80,2

137
Ensayo A
138
Ensayo B

• Alevines 2 g
• 40.000 peces con vacuna.
• 40.000 peces control
• 2 tratamientos, 5 réplicas (c/u 8.000 peces)
• Vacuna inmersión
• Transferencia al Lago Taal, Filipinas, 4 días
  después de la vacunación.
• Mortalidad acumulada 54 días después de la
  vacunación.
• RPS 71,3

139
Ensayo B
140
Ensayo C

• Alevines 7-8 g
• 24.000 vacunados y 24.000 control
• Vacuna oral
• Mortalidad acumulada 84 días después de la
  vacunación.
• RPS 51,1

141
Ensayo C
142
Vibrio

• Vacunación IP
• Truchas w 9 g
• PDI 28 días
• Tratamientos 5 n 30 peces
• Vacuna comercial
• Desafío con
• Vibrio anguillarum biotipo I
• Vibrio anguillarum biotipo II
• Vibrio ordalli (aislado chileno) v-2-2
• Vibrio sp. V-2-1
• Control. PBS

143
Vibrio
144
Vibrio
145
Vibrio
146
IPN

• Vacuna recombinante Vp2 y Vp3
• APV
• Peces pequeños
• Primo vacunación y booster
• Administración oral
• Resultados productivos FCR, SGR, Mortalidad
• RPS 61-81

147
Resultados en Piscicultura
148
(No Transcript)
149
Resumen de experiencia en Chile
60 millones de dosis entregadas
Ensayo N Peces Mort. vac Mort. control RPS campo
1 375.000 6,89 21,36 (5,4-100) 68
2 590.000 6,57 16,9 (11-22) 61
3 400.000 5,67 16,8 (8,75-70) 66
150
(No Transcript)
151
(No Transcript)
152
Comentarios finales

• APV Sistema probado
• Inyectables seguridad y eficacia
• RPS altos según el agente