Bio. Semra Sertyel

1
Bio. Semra Sertyel ALMAN HASTANESI IVF
LABORATUARLARI
OVER DOKUSU VE OOSIT KRIYOPRESERVASYONUNDA YENI
STRATEJILER
2
Erken Over Yetmezliginin Nedenleri

• Genetik
• Enfeksiyon
• Otoimmun
• Iatrojenik

Dondurularak saklanan insan yumurtalik dokusunun
transplantasyonu ilk olarak 1999 yilinda
gerçeklestirilmistir. G, NEJM, 2000- Oktay
K
3
Yumurtalik Dokusunun Dondurularak Saklanma
Endikasyonlari
Çocukluk ve gençlik çagi kanserleri Üreme
çaginda görülen kanserler Kemik iligi
transplantasyonu olgulari Benign yumurtalik
hastaliklari Profilaktik ooferektomi
4
Yumurtalik Dokusunun Dondurularak Saklanma
Endikasyonlari
Çocukluk ve Gençlik Çagi Kanserleri
Lösemi Lenfoma Nöroblastoma Osteosarkoma Ewings
Sarkoma Rabdomyosarkoma Wilms Tümörü
Üreme Çaginda Görülen Kanserler
Meme Kanseri Serviks Kanseri Lösemi
5
Yumurtalik Dokusunun Dondurularak Saklanma
Nedenleri
Çocukluk ve Gençlik Çagi Kanserleri
Lösemi Lenfoma Nöroblastoma Osteosarkoma Ewings
Sarkoma Rabdomyosarkoma Wilms Tümörü
Üreme Çaginda Görülen Kanserler
Meme Kanseri Serviks Kanseri Lösemi
Premature ovarian failure (POF) Early pregnancy
loss.
6
NASIL DONDURMALIYIZ ?

• Kontrollü Yavas Dondurmasi
• Dokularin homojen dondurulmasi
• Cryotoksisitinin daha düsük olmasi
• Pahali bir cihaza ihtiyaç duyulmasi
• Zaman alici olmasi
• Vitrifikasyon
• Hizli
• Yüksek konsantrasyon CRP nedeni ile toksisite
  olasiligi
• Dondurma aparati üzerine bir konselsiyus
  saglanamadi
• Bu bu teknigin uygulanmasi üzerine tecrübeler
  sinirli

7
NASIL DONDURMALIYIZ ?
8
Medullar Removal

• Medulla kismi çikarilir
• Foliküller medulla-corteks sinirindan çikarilir

9

• Trimming gently
• No pressure or cuts on the cortical tissue
• Trimmed medullar tissue can be evaluated,
  digested and follicles can be isolated.
• In vitro maturation or cryopreservation can be
  performed on
• isolated follicles.

10
Oktem et al Fertil Steril
11
(No Transcript)
12
Theriogenology, 2011
Better development after IVF was observed in the
slow-freezing case than in the vitrified case
13
Cryo Letters. 2009 Nov-Dec30(6)449-54. Cryobanki
ng of human ovarian tissue for anti-cancer
treatment comparison of vitrification and
conventional freezing. Isachenko V, Isachenko E,
Weiss JM, Todorov P, Kreienberg R.

• For cryopreservation of human ovarian tissue,
  conventional freezing is more promising than
  vitrification

• Vitrification seems more favorable than slow
  freezing

14
Vitrification of human ovarian tissue Effect of
different solutions and procedures
Jacquez Donmez et al.2011
3 ayri vitrifikasyon sivisi konfugurasyonu ve3
ayri yükleme mekanizmasi tartismasi
VS1 2M DMSO ve 0.1 M Sucrose(5 dak/RT)
VS2 7,5DMSO ve 7.5 EG to BS)(20 dak/RT)
15 EG ve 15 DMSO to BS(3 dak /RT)
2M DMSO,2M PROH ,0.2M sucrose(5 dak/RT) 0,5M (5
dak/RT)
1.01M sucrose to SM (20 FBS to MEM-glutomax (3
dak/RT)
0,25 M sucrose TOBS (5 dak/RT)
0.5M sucrose to SM(5 min/RT)
0,125M sucrose to BS)(5dak/RT)
SM (10 dak/RT-2X)
BS(5 dak. /RT-3X)
15
Vitrification of human ovarian tissue Effect of
different solutions and procedures
38 EG ve 0,5M trehalose to BS (6FBS to
MEM-GlutaMAX) 10 (3 dak/RT)
50 (1 dak/RT)
100 (1 dak/RT) 0,5 sucrose to BS (5 min /RT)
0,25 M sucrose to BS (5 dak/RT)
0,125 M surose to BS (5dak/RT)
BS (5 dak/RT/RT-3X)
16
Vitrification of human ovarian tissue Effect of
different solutions and procedures

• of normal morp. Follicle
• FRESH97,7
• FRESHIVC98
• VS192
• VS288
• VS394

17
Vitrification of human ovarian tissue Effect of
different solutions and procedures

• PLASTIC STRAWS
• VS DROPLETS
• SSV
• FRESH81
• FRESHIVC85
• STRAWS32
• VS DROPLETS60
• SSV32

18
SONUÇ

• OTF kemoterapi veya radyoterapi öncesi üreme
  yeteneklerinin korunmasini isteyen hastalar için
  umut olmaktadir.
• Gelecekte prematür over yetmezligini önleme ve
  dogurganlik sürecini uzatma gibi farkli uygulama
  alanlaribulacaktir.
• Uygun vitrifikasyon sivilari ve carrier
  sistemleri ile sonuçlarin çok daha
  iyilestirilmesi mümkündür.

19
Oocyte cryopreservationNe zaman ve nasil?

• Medical Sebepler
• Malignant Hastaliklar
• Surgical ovary removal
• Polycystic Ovary Hyperstimulation sydrome
• Islem Günü Yeterli Sperm Bulunamamasi

20
VITRIFIKASYON

• Solüsyon düsük isida sogutulurken viskositesini
  asiri derecede yükselterek sivi formdan camsi
  forma geçirmektir.
• Canli hücrenin stoplazmasindaki suyun viskozitesi
  attirilarak kristal yerine camsi forma geçmesi
  saglanir.

21
Kontrollü Dondurma ve/veya vitrifikasyon
Prospektif randomize çalisma sonuçlari farklilik
göstermemekte (Rienzi et al.,2010) Klinik
gebelik oranlari vitrifikasyon yöntemi ile 2
katina çikmakta (Tulandi et al.,2008)
22
Kontrollü Dondurma ve/veya vitrifikasyon
Vitrifikasyon Yavas Dondurma
Sivi penetrasyonunun kontrolü Evet Hayir
Dehidrasyon oraninin kontrolü Evet Hayir
Inkübatör disindaki süre 10 dakika 3 saat
Uzatilmis isi soku Hayir Evet
Zona Pellucida parçalanmasi Hayir Mümkün
Buz kristalleri olusumu Hayir Mümkün
Malzeme ve masraflar Ucuz Pahali
Cryotolarance Yüksek Düsük
Cryotoksisiti Düsük Yüksek
Kuleshova ve Lopata 2002, FertilitySterility
23
Kontrollü Dondurma
24
Oosit Kriyoprezervasyonu
Slow Freezing
25
Mekanik Hasar
Yavas dondurma Vitrifikasyon
Kristalizasyon
sekil degisikligi buz kristalleri
nedeni ile olusan mekanik hasar yüksek
düsük
26
Vitrifikasyon
Yüksek Kons. KP Yüksek sogutma orani Yüksek
viskosite
2.000C -20.000C/min
Vitrifikasyon düsük isida solüsyonun buz
kristalleri olusmadan katilasmasidir. Kolay, ucuz
ve hizli bir yöntemdir.
27
Vitrifikasyon Dewar Konteynir
Yavas Dondurma Programli Cihaz

28
Matür Oosit (M II) Kriyoprezervasyonu YAVAS
DONDURMA
29
MII oositlerin kriyoprezervasyonunda
basarisizliga neden olan faktörler

• Oosit kalitesi (membran geçirgenligi !!!)
• Klasik IVF sonrasi düsük fertilizasyon
• Düsük canlilik orani (25-40)
• Yüksek anöploidi
• Embriyolarin gelisim özellikleri

30
ÇÖZÜM ICSI ZP sertlesme problemini ortadan
kaldirir ICSI sonrasi döllenme orani (50
60) Porcu 1997, 1998, Tucker 1998,
Borini 1998 Fabbri 2001  
31

• Tubulin depolimerizasyonunun kaybolmasi sonucu
  kromozomlarin ayrilma hatalari (repolimerizasyon
  anomalisi). Sonuç Anöploidi artisi
• Sitoplazma yapisi, organeller ve moleküler
  hareketlerde meydana gelen degisiklikler. Sonuç
  Mayoz, fertilizasyon ve polarizasyon anomalisi

32
Yavas Dondurma (PROH 1.5M SUC 0.3M)

• Son zamanlarda gerçeklestirilen uygulamalarda
  oositler için verimli ve etkili bir metod oldugu
  gözlenmistir. Artan gebelik sayilari bu yöntem
  kullanilarak olusturulan oosit bankalarinin
  güvenli olduguna isaret etmektedir.
• 261 siklus
• 60-80 survival rate,
• ICSI ile yüksek fertilizasyon (60-64)
• Yüksek klivaj oranlari (gt90)
• IR 14, 46 gebelik PR (17) (Porcu,
  Taormina 2002)

33
Canlilik gösteren oositlerin 60inda spindle
organizasyonu normal olarak gözlenmistir.
Sitogenetik ve floresan teknikleri ile yapilan
arastirmada dondurma islemine bagli anöploidi
artisi gözlenmemistir Gook 1993 ve Van Blerkom
1994 Dondurma-çözme islemi sorasi FISH analizi
yapilan embriyolarda gözlenen kromozomal
anomalili embryo orani (29) kontrol
sikluslarindan farkli bulunmamistir (26) Cobo et
al. (2OO1)
34
Taze ve Dondurulup Çözülüp Oositlerin Laboratuvar
Sonuçlari
35
Oosit fizyolojisi ve moleküler Göstergelerin
Analizi
36
Oosit Güvenligi
37
Oosit Güvenligi
Taxol kullanimi Hücre iskeleti sabitleyici
Erimis Nitrojende dondurulma -210 0 C de
dondurma Sodyum tüketen besiyeri Immatür
oosit dondurulmasinda sodyum yerine Choline
kullanilmasi
38
SONUÇ
Yükek konsantrasyonda dondurma çözeltileri ve
asiri sogutmayi saglayan vitrifikasyon
teknikleri daha basit ve güvenli bir
tekniktir. Böylelikle ooplasmada buz
kristallerinin olusumu engellenir. Vitrifikasyon
sonrasi yüksek canlilik, devam etme orani,
fertilizasyon, klivaj, blastosist orani Ve normal
kromozomal yapilar elde edilmistir. Daha yüksek
devam eden gebelik ve canli dogum oranlari
gözlenmistir.
39
SONUÇ
Ne varki daha etkili, güvenli ve optimal
sonuçlar için çalismalar sürdürülmektedir
40
TESEKKÜRLER