Diapositive 1

1
Hémochromatose
Excès d absorption du fer au niveau duodénal et
accumulation dans les organes parenchymateux
Fatigue chronique, douleurs articulaires
Retentissement sur trois organes principaux
le foie hépatomégalie, cirrhose,
hépatocarcinome le pancréas diabète le cœur
tachycardie, cardiomégalie
Traitement efficace (soustractions sanguines) si
débuté avant linstallation de complications
irréversibles ? importance du diagnostic précoce
2
Hétérogénéité génétique
Forme transmission gène impliqué
localisation protéine Type 2
AR HJV 1q21
hémojuvéline (juvénile) AR HAMP
19q13.1 hepcidine Type 3 AR
TFR2 7q22 récepteur 2
de la transferrine Type 4 AD
SLC40A1 2q32 ferroportine
Type 1 AR HFE 6p21.3
HFE
3
Hémochromatose génétique de type 1 (HFE)
maladie fréquente ou rare ?
3/1000 homozygotes C282Y mais pénétrance lt 10
Facteurs liés à lhôte Gènes modificateurs
4
3000
2000
Fer intrahépatique (mg/g poids sec)
WT
Hfe -/-
1000
0
B6 (C57BL/6)
D2 (DBA/2)
Des gènes modificateurs modulent laccumulation
du fer intrahépatique chez les souris Hfe -/-
5
Intercross F2
D2 Hfe -/-
B6 Hfe -/-
X
X
F1 Hfe -/-
F2 Hfe -/-
Distance moyenne entre lesrecombinaisons
denviron 30 cM
6
Fer intrahépatique (mg/g poids sec)
1000 F2 Hfe -/-
F1 Hfe -/-
B6 Hfe -/-
D2 Hfe -/-
7
Criblage du génome sur des animaux F2 obtenus à
partir du croisement entre souris B6 et D2 Hfe
-/- gt 40 000 génotypes sur la plate-forme
Génomique (Génopole de Toulouse)
8
Marqueurs microsatellites
Séquence répétée (ex CA)
Régions flanquantes uniques
Le nombre de répétitions est très variable entre
individus (ici entre souches)
9
Marqueurs microsatellites
10
Marqueurs microsatellites
11
Liaison significative avec 5 régions sur les
chromosomes 3, 7, 8, 11 and 12 Liaison suggestive
avec 5 autres régions
FOIE
12
Liaison significative avec une région sur le
chromosome 11 Liaison suggestive avec 4 autres
régions
RATE
13
Utilisation de lignées recombinantes consanguines
BXD pour réduire les régions candidates
X
D2
B6
F1
X
X
X
X
F2
89 lignées BXD génotypées pour 13 370 SNPs
14
Utilisation de lignées recombinantes consanguines
BXD pour réduire les régions candidates
44 cM on chr 3
15 cM on chr 7
28 cM on chr 8
64 cM on chr 11
40 cM on chr 12
BXD 9
BXD 21
BXD 33
Ces trois lignées consanguines BXD présentent
toutes une recombinaison dans au moins une des
régions dintérêt
B6
D2
15
Tests de ségrégation
BXD Hfe/
D2 Hfe-/-
B6 Hfe-/-
X
X
F1 Hfe/-
F1 Hfe/-
X
X
F2 Hfe-/-
F2 Hfe-/-
16
Système BeadXpress (Illumina)
Génotypage des descendants des 3 lignées (BXD9,
21 et 33)pour un jeu de 96 SNPs
17
Tests de ségrégation pour la lignée BXD33 et la
région candidate sur le chromosome 7
Hfe/
BXD33 B6 (F2 Hfe-/-)
BXD33 D2 F2 Hfe-/-
18
2 gènes candidats Hamp1 et Hamp2
Hep1
B6
D2
Hep2
B6
D2
variants influençant la structure vs. variants
influençant leniveau dexpression dun transcrit?
19
2 gènes candidats Hamp1 et Hamp2
20
19
18
17
16
B6
log2(expression génique)
15
D2
14
13
12
11
10
Hamp1
Hamp2
20
Lexpression de Hamp2 a été mesurée chez 78
souris (B6 x D2) F2 Hfe -/-
LightCycler 480 (Roche)
7900 HT Real-Time PCR System (Applied Biosystems)
21
Lexpression de Hamp2 a été mesurée chez 78
souris (B6 x D2) F2 Hfe -/-
Hamp2 cis-eQTL
Position du gène Hamp2
Lexpression de Hamp2 dans le foie est régulée en
cis
22
Lallèle B6 au locus Hamp2 est associé à une
faible expression du messager Hamp2 et à une
forte concentration en fer intrahépatique
23
-208
-194
GTGACACAACCCTGT GTGACACAACCCTGT GTGGCACAACCCTGT G
TGACACAACCCTGT
Hamp1
B6
D2
B6
Hamp2
D2
TGF-b inducible early gene (TIEG) responsive
element
24
120 souris (B6 x D2) F2 Hfe -/-
120 ADNs
25
F2 intercross (120 souris F2 Hfe -/-)
Niveaux dexpression génique (44,000 transcrits
dans le foie et la rate)
Traits quantitatifs cliniques (fer dans le
sérum, le foie, la rate)
Recherche de QTLs
Recherche de QTLs
Recherche de corrélations
cQTL
eQTL
Co-localisation génomique
Gènes modificateurs potentiels, à valider
26
Régulation du métabolisme du fer
4500
4000
3500
3000
Fer dans le foie (mg/g de poids sec)
B6
2500
2000
D2
1500
1000
500
0
C
N
R
Alimentation
Puces Agilent 4x44 K
25
20
15
Log2(gene expression)
10
5
0
Hamp1
Hamp2
27
13
12
11
B6
10
Log2(gene expression)
D2
9
8
7
6
Bmp6
Smad7
14
13
12
Log2(gene expression)
11
10
9
8
7
6
Id1
Atoh8
28
HJV
BMP6
P
BMPR-I
TFR2
HFE
BMPR-II
Membraneplasmique
Smad1/5/8
Smad7
P
P
P
Smad4
HEPATOCYTE
Hepcidine
Id1
HAMP
ID1
Noyau
29
Aude Saint Pierre
Maria Martinez
Hélène Coppin
MPR
Patricia Martinez
Olivier Rouquet
Léon Kautz
Delphine Meynard
Valérie Darnaud
Flavie Desneulin