TRANSFERENCIA DE LA INFORMACIN GENTICA: TRANSCRIPCIN - PowerPoint PPT Presentation

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TRANSFERENCIA DE LA INFORMACIN GENTICA: TRANSCRIPCIN

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La geometr a de los pares de bases tambi n puede jugar un papel en la selecci n ... Por tanto, sus pares de bases pueden formar una estructura en horquilla con un ... – PowerPoint PPT presentation

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Title: TRANSFERENCIA DE LA INFORMACIN GENTICA: TRANSCRIPCIN


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TRANSFERENCIA DE LA INFORMACIÓN GENÉTICA
TRANSCRIPCIÓN
  • Se denomina transcripción al proceso de trasvase
    de información, contenida en el ADN, a una
    molécula de ARN. Constituye el primer paso en la
    expresión de los genes y mediante esta ruta se
    sintetizan todos los tipos de ARN que existen en
    las células.
  • A primera vista, las cadenas de ARN y ADN pueden
    parecer similares, con un grupo OH en la posición
    2de la pentosa y la sustitución de la T por U
    como únicas diferencias. Sin embargo, al
    contrario del ADN, la mayoría de los ARN son de
    cadena sencilla. Estas cadenas se pliegan sobre
    sí mismas, dando lugar a una diversidad
    estructural mucho más amplia que la observada en
    el ADN, gracias a la cual el ARN es capaz de
    asumir una amplia variedad de funciones celulares.

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CARACTERÍSTICAS GENERALES DE LA TRANSCIPCIÓN
  • Desde el punto de vista del mecanismo, la
    transcripción es semejante a la replicación del
    ADN. Es una reacción de polimerización, se
    utilizan sustratos activados (nucleósidos
    trifosfato), se necesita un molde (de ahí el
    nombre de síntesis de ARN dependiente de ADN), la
    dirección de síntesis es también 5? 3 y
    transcurre en 3 etapas iniciación, elongación y
    terminación.
  • Existen también una serie de características que
    diferencian ambos procesos
  • La transcripción es un proceso monocatenario. Con
    pocas excepciones, sólo se transcribe una de las
    cadenas del ADN. La situación de los genes a
    copiar puede localizarse en cualquiera de las dos
    cadenas del ADN. Por convenio, a la cadena
    utilizada como molde se la llama hebra molde,
    antisentido, no codificante o hebra (-) y a la
    cadena complementaria se la denomina hebra no
    molde, con sentido, codificadora o hebra (). La
    doble cadena se escribe de izquierda a derecha en
    el sentido 5? 3 de la hebra codificadora. La
    hebra codificadora del ADN tiene la misma
    secuencia que la cadena de ARN transcrito excepto
    que la timina sustituye al uracilo (Figura 1).

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  • Es un proceso selectivo. La transcripción se
    limita a una porción del ADN. En una célula
    eucariota diferenciada, la parte del ADN total
    que se transcribe es muy pequeña. Incluso en los
    organismos unicelulares, en los que prácticamente
    todas las secuencias del ADN pueden
    transcribirse, en un momento dado se transcribe
    mucho menos de la mitad de los genes. En
    consecuencia, gran parte del interés por la
    transcripción se centra en los mecanismos
    utilizados para seleccionar determinados genes y
    cadenas molde, puesto que esta selección es la
    que gobierna en gran medida las capacidades
    metabólicas de una célula.
  • La transcripción es un proceso reiterativo, puede
    repetirse infinidad de veces durante la vida
    celular. A este respecto, existe una gran
    variabilidad en cuanto a la frecuencia de
    transcripción de distintas regiones del ADN.
  • Es un proceso conservador. No afecta a la
    estructura del ADN.
  • No requiere cebador.

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ARN POLIMERASAS
  • El descubrimiento de la ADNp y su dependencia de
    un molde de ADN fue un estímulo para la búsqueda
    de una enzima que sintetizase ARN complementario
    de un molde de ADN. Hacia 1960, cuatro grupos de
    investigación independientes habían detectado una
    enzima en extractos celulares capaz de formar un
    polímero de ARN a partir de ribonucleótidos
    5-trifosfato. Investigaciones posteriores con la
    ARN polimerasa (ARNp) purificada de E. coli
    contribuyeron a definir las propiedades
    fundamentales de la transcripción.
  • La ARNp realiza múltiples funciones en la
    transcripción
  • Busca en el ADN los puntos de iniciación, también
    llamados secuencias promotoras o, simplemente,
    promotores.
  • Desenrolla una parte de la doble hélice del ADN
    para producir un molde de ADN de una sola hebra.
  • Selecciona el ribonucleótido trifosfato correcto
    y cataliza la formación del enlace fosfodiéster.
    Este proceso se repite tantas veces como la
    enzima se desplace unidireccionalmente a lo largo
    del molde de ADN. A este respecto, la ARNp es
    totalmente procesiva una única molécula de ARNp
    realiza la transcripción desde el inicio hasta el
    final.
  • Detecta las señales de terminación que indican
    dónde finaliza la transcripción.
  • Interacciona con las proteínas activadoras y
    represoras (factores de transcripción) que
    modulan en un amplio intervalo la velocidad de
    transcripción.

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  • La química de la síntesis del ARN tiene mucho en
    común con la síntesis de ADN. La ARNp elonga una
    cadena de ARN por adición de ribonucleótidos al
    extremo 3-OH de la cadena y sintetiza el ARN en
    dirección 5?3. El 3-OH actúa como nucleófilo,
    atacando el fosfato ? del ribonucleótido
    trifosfato entrante y liberando pirofosfato
    (Figura 2). La reacción global es
  • (NMP)n NTP ? (NMP)n1 PPi

  • ARN ARN alargado

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  • La ARNp requiere ADN para su actividad, siendo
    más activa con un molde de ADN bicatenario. La
    hebra molde es copiada en la dirección 3?5
    (antiparalela a la nueva cadena de ARN) al igual
    que en al replicación. Cada nucleótido en el ARN
    recién formado es seleccionado según las
    interacciones de apareamiento de bases de Watson
    y Crick en este caso los residuos de uridilato
    se insertan en el ARN para aparearse con residuos
    adenilato del ADN molde. La geometría de los
    pares de bases también puede jugar un papel en la
    selección de las bases, tal y como hemos visto en
    la replicación.
  • A diferencia de la ADNp, la ARNp no necesita un
    cebador para iniciar la síntesis. El grupo
    5-trifosfato del primer residuo de una cadena de
    nueva síntesis no es cortado para liberar PPi,
    sino que se mantiene intacto durante toda la
    transcripción.
  • La ARNp dependiente de ADN de E. coli es una
    enzima compleja y de gran tamaño formada por 6
    subunidades de 5 tipos distintos (?2????). El
    núcleo de la enzima está constituido por ?2??? y
    presenta la actividad catalítica. La subunidad ?
    se une transitoriamente al núcleo y dirige a la
    enzima hacia sitios específicos de unión en el
    ADN (promotores), participa en la iniciación de
    la síntesis y luego se disocia del resto de la
    enzima. Estas 6 subunidades contituyen la
    holoenzima ARNp. (Figura 3 y Tabla 1)

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  • Las ARNp carecen de actividad exonucleasa
    3?5correctora de pruebas. En consecuencia,
    durante la transcripción se produce un error por
    cada 104 o 105 ribonucleótidos incorporados en el
    ARN. Dado que de un solo gen se producen muchas
    copias de ARN y que todos los ARN son finalmente
    degradados y reemplazados, un error en una
    molécula de ARN tiene menos consecuencias para la
    célula que un error en la información permanente
    almacenada en el ADN.

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ETAPAS DE LA TRANSCRIPCIÓN EN PROCARIOTAS
INICIACIÓN, ELONGACIÓN Y TERMINACIÓN
  • 1) INICIACIÓN
  • La fase de iniciación comienza en los promotores
    del molde de ADN. Los promotores son secuencias
    de ADN que dirigen a la ARNp hacia secuencias
    específicas adyacentes para iniciar la
    transcripción.
  • Cuando se comparan las secuencias de muchos
    promotores de procariotas se pone en evidencia un
    patrón llamativo (Figura 4). Existen dos tramos
    de secuencias consensos situados a 10 y 35 pb
    antes del inicio de la transcripción.
  • Estas denominaciones hacen referencia a la hebra
    codificadora de ADN, aunque la hebra molde o no
    codificadora de ADN es la que se transcribe en
    ARN. Por convenio, se da el número 1 al par de
    bases en el que comienza la síntesis de ARN, y n
    será el último par de bases donde acaba la
    síntesis. Este último par de bases estará hacia
    el extremo 3 de la cadena codificadora, por lo
    que se dice que el movimiento de la ARNp en esta
    zona es aguas abajo. La secuencia promotora,
    situada hacia el extremo 5 de la cadena
    codificadora, se dice que está aguas arriba, y
    se expresa -1 a n.
  • Las secuencias promotoras consenso están a
    situadas a -10 (caja TATA o de Pribnow) y -35, ya
    que se localizan hacia los nucleótidos 10 y 35
    antes del punto de iniciación. Cada una de estas
    secuencias tiene una longitud de 6 pares de
    bases. A partir del análisis de muchos promotores
    se han deducido sus secuencias consenso
    (promedio), estas son
  • -35 -10
    1
  • 5'-TTGACA-------------TATAAT-----Punto de
    partida para la transcripción

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Figura 4. Típicos promotores de E. coli
reconocidos por el holoenzima de la ARN
polimerasa que contiene ?70. Se muestran las
secuencias de la hebra no molde que son leídas en
la dirección 3'? 5', como se acostumbra en
representaciones de este tipo. Las secuencias
varían de un promotor a otro, pero la comparación
de muchos promotores pone de manifiesto
similitudes, particularmente en las regiones -10
y -35. La secuencia consenso de los promotores
reconocidos por ?70 es la segunda por arriba. Las
regiones espaciadoras contienen un número
variable de nucleótidos (N). Sólo se muestra el
primer nucleótido que codifica el transcrito de
ARN (en la posición 1).
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INICIACIÓN
  • Los promotores difieren ampliamente en su
    eficacia. Los genes con promotores muy activos se
    transcriben con mucha frecuencia, tan a menudo
    como cada 2 segundos en E. coli, en tanto que los
    genes con promotores poco activos pueden
    transcribirse una vez cada 10 minutos o más. Las
    secuencias -10 y -35 de los promotores activos
    tienen secuencias muy similares a las secuencias
    consenso, en tanto que los promotores poco
    activos suelen presentar múltiples sustituciones
    en estas secuencias. En efecto, la mutación de
    sólo una base tanto en la secuencia -10 como en
    la secuencia -35 puede variar la actividad del
    promotor. La separación entre estas secuencias
    consenso también es importante la distancia
    óptima es de 17 nucleótidos. Por tanto, la
    eficiencia o actividad de una secuencia promotora
    sirve para regular la transcripción. Las
    proteínas reguladoras que se unen a secuencias
    específicas próximas a los promotores y que
    interaccionan con la ARN polimerasa ejercen
    también una marcada influencia sobre la
    frecuencia de transcripción de muchos genes.
  • El núcleo ?2?? de la ARNp es incapaz de iniciar
    la transcripción en las secuencias promotoras.
    Más bien, el holoenzima completo ?2??? es
    indispensable para la iniciación en el punto de
    partida correcto. La subunidad ? contribuye
    concretamente a la iniciación de dos maneras. 1º)
    Disminuye la afinidad de la ARN polimerasa por
    las regiones generales del ADN. En su ausencia,
    el núcleo del enzima se une al ADN fuerte e
    indiscriminadamente. 2º) La subunidad ? permite a
    la ARN polimerasa el reconocimiento de las
    secuencias promotoras. Se ha encontrado que un
    amplio fragmento de la subunidad ? presenta en su
    superficie una hélice ? ésta hélice se ha
    asociado con el reconocimiento de la secuencia de
    la región -10 (Figura 6). El holoenzima se une a
    la doble hélice del ADN y se desplaza a lo largo
    de ella en busca del promotor, haciendo una
    búsqueda unidimensional utilizando el ADN como si
    fuesen los raíles de un tren. La búsqueda es
    rápida ya que la ARN polimerasa se desliza a lo
    largo del ADN en vez de asociarse y disociarse.
    La subunidad ? se libera cuando la cadena
    naciente de ARN tiene una longitud de 9 ó 10
    nucleótidos. Tras esta liberación, la subunidad ?
    puede colaborar en la iniciación con otro núcleo
    enzimático. (Figura 7)

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(No Transcript)
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INICIACIÓN
  • Aunque la ARN polimerasa puede localizar las
    secuencias promotoras cuando está unida a la
    doble hélice de ADN, antes de comenzar la
    síntesis se debe desenrollar un segmento de la
    hélice. Se debe desaparear una región de la doble
    cadena de ADN de tal modo que los nucleótidos de
    una de sus cadenas sean accesibles para
    emparejarse con los ribonucleósidos trifosfato
    entrantes. La cadena de del ADN molde selecciona
    al ribonucleósido trifosfato correcto mediante la
    formación de pares de bases Watson-Crick, al
    igual que en la síntesis del ADN.
  • Qué longitud de la cadena de ADN molde
    desenrolla la ARNp? Cada molécula de ARNp unida
    desenrolla un segmento de ADN formado por 17
    pares de bases. La transición desde el complejo
    promotor cerrado (en el cual el ADN está como
    doble hélice) al complejo promotor abierto (en el
    cual un segmento de ADN está desenrollado) es un
    suceso esencial de la transcripción. En este
    momento todo está preparado para la formación del
    primer enlace fosfodiéster de la nueva cadena de
    ARN.
  • A diferencia con la síntesis del ADN, la síntesis
    del ARN puede comenzar de novo, sin ser necesario
    un cebador. La mayoría de las cadenas nuevamente
    sintetizadas portan en un extremo 5una etiqueta
    muy diferenciadora la primera base en ese
    extremo es pppG o pppA. La presencia de un
    residuo trifosfato sugiere que la síntesis del
    ARN comienza por el extremo 5. Al igual que en
    la síntesis del ADN, la cadena de ARN crece en
    sentido 5? 3.

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ELONGACIÓN
  • La fase de elongación en la síntesis del ARN
    comienza nada más formarse el primer enlace
    fosfodiéster. Un cambio importante es la pérdida
    de ? recuérdese que el núcleo enzimático sin ?
    se une con mayor fuerza al molde de ADN. En
    efecto, la polimerasa permanece unida a su molde
    hasta que se alcanza una señal de terminación. La
    región que contiene la ARN polimerasa, ADN y la
    cadena creciente de ARN se denomina burbuja de
    transcripción. La cadena de ARN en crecimiento
    forma una hélice híbrida con la hebra molde de
    ADN. Esta hélice ARN-ADN tiene una longitud
    aproximada de 8 pares de bases, lo cual se
    corresponde, aproximadamente, con una vuelta de
    la doble hélice. En esta hélice híbrida el grupo
    3'-OH del ARN está posicionado de tal modo que
    pueda atacar al átomo de fósforo ? de un
    ribonucleósido trifosfato entrante. Al igual que
    en la fase de iniciación, durante la fase de
    elongación se desenrollan aproximadamente 17
    pares de bases del ADN. La burbuja de
    transcripción recorre unos 170 Å (17 nm) en un
    segundo, lo que equivale a una velocidad de
    elongación de aproximadamente 50 nucleótidos por
    segundo. Aunque rápida, es mucho menor que la
    velocidad de síntesis de ADN (800 nucleótidos por
    segundo). (Figura 8)

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(No Transcript)
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ELONGACIÓN
  • Las longitudes del híbrido ARN-ADN y de la región
    desenrollada del ADN permanecen bastante
    constantes mientras la ARN polimerasa se desplaza
    a lo largo del molde de ADN. Este hecho indica
    que la velocidad de enrollado del ADN en la parte
    posterior de la ARNp es aproximadamente igual a
    la velocidad de desenrollado en su parte frontal.
    El híbrido ARN-ADN debe rotar también cada vez
    que se añade un nucleótido de tal modo que el
    extremo 3'-OH del ARN permanezca en el centro
    catalítico. La longitud del híbrido ARN-ADN está
    determinada por una estructura de la propia
    enzima que fuerza la separación del híbrido
    ARN-ADN, lo que permite a la cadena de ARN
    separarse de la enzima y a la cadena de ADN
    reunirse con su complementaria. La continua
    apertura por delante y cierre por detrás, de la
    burbuja de replicación, genera superenrollamientos
    positivos por delante y negativos por detrás que
    tienen que ser disipados por la acción de
    topoisomerasas.

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TERMINACIÓN
  • Al igual que su iniciación, la finalización de la
    transcripción viene controlada de un modo
    preciso. En la fase de terminación de la
    transcripción, cesa la formación del enlace
    fosfodiéster, el híbrido ARN-ADN se disocia, la
    región de ADN fundido se enrolla y la ARNp se
    desprende del ADN. Qué es lo que determina dónde
    debe finalizar la transcripción? Las secuencias
    transcritas de los moldes de ADN contienen
    señales de parada. La más sencilla es una
    secuencia palindrómica rica en GC, seguida de una
    secuencia rica en AT. El ARN transcrito de esta
    secuencia palindrómica es autocomplementario. Por
    tanto, sus pares de bases pueden formar una
    estructura en horquilla con un vástago y un
    bucle, estructura favorecida por su alto
    contenido en residuos G y C. Los pares de bases
    G-C son más estables que los pares de bases A-T
    ya que tienen un puente de hidrógeno extra en
    cada par de bases. Esta horquilla estable es
    seguida por una secuencia de cuatro o más
    residuos de uracilo, los cuales son también
    cruciales para la terminación. La transcripción
    del ARN finaliza en ellos o justo detrás (Figura
    9)
  • Cómo finaliza la transcripción en esta
    estructura combinada horquilla-oligo(U)? Primero,
    parece que la ARNp se detiene inmediatamente
    después de sintetizar la secuencia de ARN que se
    pliega en horquilla. Aún más, la hélice híbrida
    ARN-ADN que se forma tras la horquilla es
    inestable ya que sus pares de bases rU-dA son las
    más débiles de los cuatro tipos existentes. Por
    tanto, la parada en la transcripción causada por
    la horquilla permite al ARN en crecimiento
    débilmente enlazado disociarse del ADN y luego de
    la enzima. La hebra sencilla de ADN se reasocia a
    su complementaria para regenerar la doble hélice
    de ADN y se cierra la burbuja de transcripción.
  • La ARNp no siempre precisa ayuda para finalizar
    la transcripción en una horquilla seguida de
    varios residuos U. En otros casos necesita la
    colaboración de un factor adicional para
    terminar, la proteína ro (?). Esta proteína es un
    hexámero que se une específicamente a una hebra
    sencilla de ARN en un tramo de 72 nucleótidos, de
    tal forma que el ARN pasa a través del centro de
    la estructura. La proteína ? se activa mediante
    secuencias ricas en citosina y pobres en guanina
    situadas en el ARN en crecimiento. La actividad
    ATPasa de ? le permite tirar del ARN naciente
    mientras que sigue a la ARNp. Cuando ? alcanza a
    la ARNp en la burbuja de transcripción, corta la
    hélice híbrida ARN-ADN actuando como una ARN-ADN
    helicasa. (Figura 10)W3

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Figura 10. Terminación de la transcripción
dependiente del factor ?.
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