Bйta-lactamases а spectre йtendu (BLSE)

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Béta-lactamases à spectre étendu (BLSE)

• Intérêt porté aux CTX-M
• Olivier Vidon
• Clarisse Bourdin
• Mars 2005

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Historique

• Fin de la 2ème guerre mondiale, introduction de
  la pénicilline, apparition rapide de souches de
  S.aureus résistantes à la pénicilline
• 1965 découverte de la ?-lactamase TEM-1 en
  Grèce chez une souche d E.coli
• Découverte de la ?-lactamase SHV-1 chez
  K.pneumoniae et E.coli
• 1985 1ère épidémie à entérobactérie productrice
  de BLSE due à une souche de K.pneumoniae
• De nos jours, plus de 200 BLSE décrites, chez de
  nombreuses espèces bactériennes, partout dans le
  monde

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Mécanisme d action des ?-lactamases
Les ?-lactamases hydrolysent le pont amide du
cycle ?-lactame de l antibiotique pour donner un
acyl-enzyme qui sera ensuite dégradé en acide
inactif.
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Deux types de ?-lactamases

• Serine b-lactamases
• TEM
• SHV
• OXA
• CTX-M
• Metallo-b-lactamases

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Serine ?-Lactamases
Classe C
Classe A
Classe D
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b-Lactamases de la classe A
TEM
SHV
Autres enzymes de la classe A (souvent
inductibles)
CTX-M
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Classification des ?-lactamases

• De nombreuses classifications existent, qui
  prennent comme critère
• le phénotype classification utilisée en routine
  qui sépare les enzymes en pénicillinases,
  céphalosporinases, ?-lactamases à large spectre
  et ?-lactamases à spectre étendu
• la nature du site actif (classification
  d Ambler)
• la séquence d acide aminé
• les caractéristiques physiques
• l origine (plasmidique ou chromosomique)
• Les classifications d Ambler et de
  Bush-Jacobi-Medeiros sont aujourdhui les plus
  pertinentes.

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Classification d Ambler

• Classe A
• Enzymes à sérine
• Actives sur les pénicillines et à un moindre
  degré sur les céphalosporines
• Inhibées par l acide clavulanique
• Médiation chromosomique ou plasmidique
• Comprend les ?-lactamases de type TEM, SHV, CTX-M
• Classe B
• Métallo-enzymes comportant un atome de zinc
  divalent
• Actives sur les céphalosporines et les
  carbapénèmes
• Insensibles à l acide clavulanique
• Médiation chromosomique ou plasmidique
• Inhibées par l EDTA

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Classification d Ambler

• Classe C
• Enzymes à sérine céphalosporinases
• Actives sur les céphalosporines (C1G C2G et
  C3G)
• Insensibles à l acide clavulanique
• A médiation chromosomique le plus souvent
• Classe D
• Enzymes à sérine
• Actives sur les pénicillines et plus
  particulièrement les pénicillines M
• Plus ou moins sensibles à l acide clavulanique
• Comprend les enzymes de type OXA

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Classification de Bush-Jacobi-Medeiros
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Classification d Ambler
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Les ?-lactamases à spectre étendu (BLSE)

• ?-lactamases ayant une résistance à l ensemble
  des ?-lactamines à l exception des céphamycines
  et des carbapénèmes
• Inhibées par l acide clavulanique in vitro
• Le plus souvent d origine plasmidique ? rapidité
  de diffusion et d évolution
• En France, la première épidémie à entérobactérie
  productrice de BLSE a été décrite en 1985 il
  s agit d une souche de K. pneumoniae résistante
  aux amino-, carboxy- et ureido-pénicilline et à
  l ensemble des céphalosporines à l exception
  des céphamycines.

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Les ?-lactamases à spectre étendu (BLSE)

• Depuis, plus de 200 BLSE naturelles ont été
  décrites elles ont été classées en 11 familles
  différentes sur la base de leur séquence
  d acides aminés TEM, SHV, CTX-M, PER, VEB, GES,
  TLA, BES, SFO, FEC et OXA.
• Les 4 familles majeures sont représentées par les
  enzymes de type TEM, SHV, CTX-M et OXA.

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BLSE de type TEM

• Les BLSE de type TEM dérivent toutes à l origine
  de TEM-1, ?-lactamase la plus fréquemment
  rencontrée chez les bacilles Gram-
• Habituellement co-résistantes aux aminosides
  tétracyclines et fluoroquinolones
• Retrouvées surtout chez Klebsiella spp. et E.
  Coli
• Plus de 100 BLSE TEM ont été décrites

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BLSE dérivées de TEM
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?-lactamases de type TEM
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BLSE de type SHV

• Les BLSE de type SHV proviennent toutes à
  l origine de la BLLS SHV-1, retrouvée chez K.
  pneumoniae
• Habituellement co-résistantes aux aminosides
  tétracyclines et fluoroquinolones
• Retrouvées surtout chez Klebsiella spp. et E. Coli

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BLSE dérivées de SHV
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?-lactamases de type SHV
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BLSE de type CTX-M

• BLSE de type non-TEM, non-SHV
• BLSE caractérisées par une activité hydrolytique
  plus élevée envers le céfotaxime que la
  ceftazidime à quelques exceptions près (CTX-M-15,
  CTX-M-16, CTX-M-19, CTX-M-27)
• Plus fortement inhibées par le tazobactam que
  lacide clavulanique
• Haut degré dhomologies entre la ?-lactamase
  chromosomique de Kluyvera ascorbata et certaines
  CTX-M, les CTX-M du groupe 1
• Retrouvées surtout chez Salmonella Typhimurium,
  E. coli, K.pneumoniae

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Les CTX-M

• Divisées en 5 groupes phylogénétiques sur la base
  de leurs séquences d acides aminés
• groupe 1 CTX-M-2, 4, 5, 6, 7, 20 et Toho-1
• groupe 2 CTX-M-1, 3, 10, 11, 12, 15, 22, 23 et
  28
• groupe 3 CTX-M-8
• groupe 4 CTX-M-9, 13, 16, 14, 17, 18, 19, 21,
  24, 27 et Toho-2
• groupe 5 CTX-M-25 et CTX-M-26

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BLSE de type CTX-M
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Diagnostic différentiel BLSE VS
céphalosporinase déréprimée
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Diagnostic d une BLSE

• De nombreuses méthodes de détection peuvent être
  utilisées pour détecter une BLSE
• Des bandelettes Etest ont été mises au point
• Les automates d identification et
  d antibiogrammes permettent d identifier les
  BLSE comme le Phoenix de Becton Dickinson ou le
  Vitek de Biomérieux
• La technique de double diffusion sur gélose dite
  des  bouchons de champagne  recommandée par le
  CASFM reste la plus utilisée

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Les bandelettes Etest spécifiques

• Principe
• Elles contiennent d un coté un gradient de
  ceftazidime ou de céfotaxime et de l autre un
  gradient de la même molécule associée à l acide
  clavulanique
• Matériel
• Bandelette Etest
• Gélose Mueller-Hinton

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Les bandelettes Etest spécifiques

• Méthode
• Mise en culture des souches d entérobactéries 24
  heures sur milieux usuels
• Préparation d une suspension bactérienne
• Ensemencement sur gélose Mueller-Hinton par
  écouvillonnage séchage 10 à 15 minutes
• Dépot de la bandelette
• Lecture après 18 à 24 heures dincubation
• Interprétation
• Si au moins 3 dilutions de CMI décart entre CMI
  C3G et CMI C3G acide clavulanique
• ? présence dune BLSE

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(No Transcript)
28
(No Transcript)
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Algorithme décisionnel mis en œuvre sur le
Phoenix pour la détection des BLSE (d après
Becton Dickinson)
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Test de double diffusion (1)

• Principe
• Consiste à rechercher une synergie sur gélose de
  Mueller-Hinton entre un disque d amoxicilline
  acide clavulanique et des disques (placés à 2 ou
  3 cm du disque central) de ceftazidime, de
  céfotaxime, de céfépime et d aztréonam.
• Le céfépime, naturellement plus résistant aux
  céphalosporinases permet de mettre en évidence
  l éventuelle association d une BLSE à une
  céphalosporinase hyperproduite
• Le céfotaxime permet de mettre en évidence les
  BLSE de type CTX-M
• La détection des BLSE chez Proteus spp, M.
  morganii et P. stuartii est légèrement
  différente ces espèces sont plus sensibles aux
  ?-lactamines in vitro que les autres
  entérobactéries les disques périphériques sont
  placés à 3 ou 4 cm du disque central.

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Test de double diffusion (2)

• Matériel
• Géloses Mueller-Hinton
• Disque d antibiotiques
• Méthode
• Mise en culture des souches d entérobactéries 24
  heures sur milieux usuels
• Préparation d une suspension bactérienne à 0.5
  MacFarland en eau physiologique
• Dilution au 1/100 de la suspension bactérienne
• Ensemencement sur gélose Mueller-Hinton par
  inondation ou écouvillonnage séchage 15 à 20
  minutes

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Test de double diffusion (3)

• Dépôt des disques d antibiotiques.
• Incubation 18 à 24 heures à l étuve à 37C.

• AMC amoxicilline ac.clavulanique
• CAZ ceftazidime
• CTX céfotaxime
• FEP céfépime
• AZT aztréonam

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Test de double diffusion (4)

• Interprétation
• Il y a présence d une BLSE ou  bouchon de
  champagne  si la zone d inhibition de la pousse
  bactérienne est élargie entre le disque d AMC et
  le disque de Céfépime ou Céftazidime (effet de
  synergie) ou d AZT.

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(No Transcript)
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Exemples de BLSE
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(No Transcript)