D.N.A.

1
D.N.A.

• El ADN (Ácido Desoxirribo Nucleico) es una
  molécula lineal polimérica, relativamente simple,
  que está formada por una cadena doble, integrada
  por dos ejes formado cada uno por un módulo
  repetido (monómero), constituido por un azúcar
  (deoxirribosa) unida por fosfato y una base
  nitrogenada (participan cuatro diferentes
  Adenina, Timina, Citosina y Guanina).

2
GENOMA

• Se denomina Genoma de una especie al conjunto de
  la información genética, codificada en una o
  varias moléculas de ADN (Acido Desoxirribo
  Nucleico) (en muy pocas especies ARN), donde
  están almacenadas las claves para la
  diferenciación de las células que forman los
  diferentes tejidos y órganos de un individuo. Por
  medio de la reproducción sexuada de los
  individuos esa información es permanentemente
  reordenada y transmitida a los descendientes,
  constituyendo una población dinámica

3
Los ácidos nucleicos son grandes moléculas
formadas por la repetición de una molécula unidad
que es el nucleótido. Un nucleótido está formado
por

• 1.- Una pentosa Ribosa o desoxiribosa
•  
• 2.- Una base nitrogenada púrica o pirimidínica.
•  
• 3.- Ácido Fosfórico.

4
De acuerdo con el modelo de Watson y Crick, el
ADN es una doble hélice, dextrógira, con las
bases dirigidas hacia el centro, perpendiculares
al eje de la molécula y un esqueleto exterior de
azúcar-fosfato a lo largo de los lados de la
hélice (que actúa protegiendo a las bases del
medio ambiente).

• Las hebras que la conforman son complementarias y
  antiparalelas. Complementarias porque las bases
  de cada cadena se aparean de forma complementaria
  Adenina con Timina (A-T) y Guanina con Citosina
  (C-G). Y antiparalelas porque una cadena está
  colocada en posición 5'- 3' y la complementaria
  en posición 3'- 5'.
•    Cada base púrica o pirimidinica establece
  puentes de hidrógeno con su complementaria,
  uniendo así las dos cadenas
•    La separación entre los pares de bases
  adyacentes es de 3,4 Å (0,34nm).
• La hélice completa una vuelta cada 10 pares de
  bases , es decir cada 34 Å (3,4nm)
• El diámetro de la hélice es de 20 Å.

5
BASES PURICAS Y PIRIMIDINICAS

• BASES PURICAS ADENINA Y GUANINA
• BASES PIRIMIDINICAS CITOSINA Y TIMINA

6
CONCEPTO DE LOCUS

• LUGARES ESPECIFICOS DEL CROMOSOMA DONDE SE
  ENCUENTRAN DETERMINADAS CARACTERISTICAS.
• POR EJEMPLO D1S80, HUDH01

7
LOCI

• PLURAL DE LOCUS

8
CONCEPTO DE ALELO

• CADA UNA DE LAS VARIANTES GENICAS QUE PUEDEN
  APARECER EN UN LOCUS CROMOSOMICO DETERMINADO Y
  QUE CONTROLAN EL MISMO CARÁCTER.

9
CONCEPTO DE POLIMORFISMO

• ES LA VARIABILIDAD QUE EXISTE DENTRO DE UN
  FRAGMENTO DE ADN EN OTRAS PALABRAS EL NUMERO DE
  ALELOS QUE PUEDE HABER EN UN LOCUS. COMO REGLA
  GENERAL, CUANTO MAS ALELOS HAYA MAYOR
  POLIMORFISMO, Y POR ENDE, MAYOR PODER DE
  IDENTIFICACIÓN.

10
CONCEPTO DE GENOTIPO

• EN IDENTIFICACIÓN FORENSE, ES LA PAREJA DE ALELOS
  EXISTENTES EN UN DETERMINADO LOCUS, CADA LOCUS
  EXISTE EN LOS DOS CROMOSOMAS (UNO QUE PROCEDE DEL
  PADRE Y OTRO QUE PROCEDE DE LA MADRE) QUE
  CONFORMAN CADA UNA DE LAS PAREJAS

11
HOMOCIGOTO

• CUANDO SE ANALIZA UN LOCUS SE OBTIENE INFORMACIÓN
  (ALELOS DE AMBOS CROMOSOMAS), EXPRESADA COMO
  NÚMEROS O LETRAS. CUANDO LOS DOS ALELOS COINCIDEN
  SE DICE QUE EL GENOTIPO ES HOMOCIGOTO

12
CONCEPTO DE HETEROCIGOTO

• GENOTIPO COMPUESTO POR ALELOS DIFERENTES, CADA
  LOCUS POSEE UNA SERIE DE ALELOS POSIBLES, DE LAS
  QUE SOLO SE MANIFIESTA UNO. CUANDO EL ALELO QUE
  SE MANIFIESTA EN EL CROMOSOMA DEL PADRE ES
  DISTINTO DE LA MADRE, SE DICE QUE EL GENOTIPO DE
  ESA PERSONA, PARA ESE LOCUS QUE SE ESTA
  ESTUDIANDO, ES HETEROCIGOTO. TRAS UNA
  ELECTROFORESIS SE OBSERVARAN DOS BANDAS
  DIFERENTES.

13
HAPLOIDE

• CALIFICACIÓN ATRIBUIDA A LA MITAD DEL GENOMA, ES
  DECIR EN EL OVULO Y EN EL ESPERMATOZOIDE SOLO
  EXISTE GENOMA HAPLOIDE ,YA QUE HAN DE CONTENER
  SOLO 23 CROMOSOMAS, PARA QUE UNIDOS A LOS QUE
  EXISTEN EN LAS CELULAS COMPLEMENTARIAS (OVULO
  PARA EL ESPERMATOZOIDE Y VICEVERSA), PUEDAN
  FORMAR LOS 23 PARES.

14
DIPLOIDE

• CONJUNTO FORMADO POR TODO EL ADN DE LA CELULA Y
  QUE SE COMPONE DE 23 PARES DE CROMOSOMAS, 22
  AUTOSOMICOS Y UNO SEXUAL ,EN EL GENOMA DIPLOIDE
  EXISTEN, PUES, 46 CROMOSOMAS

15
ENZIMA DE RESTRICCIÓN

• ENZIMA PRODUCIDA POR UNA BACTERIA QUE CORTA O
  FRAGMENTA EL ADN POR UN LUGAR DETERMINADO,
  ESPECIFICO PARA CADA TIPO DE ENZIMA. EXISTE
  CIENTOS DE ENZIMAS DE RESTRICCIÓN QUE PORTAN AL
  ADN POR LUGARES CONOCIDOS. APROPIADAMENTE
  UTILIZADOS PUEDEN SERVIR PARA SU POSTERIOR
  ESTUDIO. P.E. EcoR1

16
PARES DE BASES

• UNIDAD COMPUESTA POR UNA PAREJA DE NUCLEOTIDOS
  COMPLEMENTARIOS
• E. coli. Tiene 4.2 millones de p. de b.
• Levadura común 13 millones de p. de b.
• Mosca de la fruta 140 millones de p.de b.
• Especie humana 3,300 millones de p.deb.

17
RFLP

• FRAGMENTOS DE RESTRICCIÓN DE LONGITUD
  POLIMORFICA CONJUNTO DE FRAGMENTOS DE ADN QUE
  APARECEN TRAS CORTARLO CON ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
  (HaeIII) (HinfI)
• LOS PRIMEROS CASOS DE CRIMINALISTICA FUERON
  RESUELTOS GRACIAS A ESTA TECNICA.

18
VNTR

• COPIAS DE FRAGMENTOS DE SECUENCIAS IDENTICAS DE
  UNOS 30-50 PARES DE BASES QUE SE SUCEDEN
  ININTERRUMPIDAMENTE EN UN CROMOSOMA. LA
  EXISTENCIA DE LOS VNTR ORIGINA LOS DIFERENTES
  ALELOS Y ORIGINA EL POLIMORFISMO.
• SUSTITUYERON A LOS RFLP EN LA MEDICINA FORENSE.

19
STR

• REPETICIONES EN TANDEM CORTAS. SON LOCUS CUYOS
  VNTR ESTAN COMPUESTOS SOLO POR 2,3 O 4 PARES DE
  BASES, DE MODO QUE PUEDEN SER ANALIZADOS POR PCR
  USANDO FRAGMENTOS CUYA LONGITUD ES DE 100 A 200
  PARES DE BASES EN CONSECUENCIA TIENEN UNA GRAN
  ESTABILIDAD, SIENDO MUY UTILES EN CRIMINALISTICA

20
PCR

• REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERAZA PERMITE
  AMPLIFICAR MAS DE UN MILLON DE VECES EL ADN
  OBTENIDO A PARTIR DE UNA REGION SELECCIONADA DEL
  GENOMA SIEMPRE Y CUANDO SE CONOZCA UNA PARTE DE
  SU SECUENCIA DE NUCLEOTIDOS .

21
MATRICES PARA OBTENER ADN

• SANGRE
• SEMEN
• SALIVA
• CABELLO
• PULPA DENTAL
• PIEL
• HUESO

22
METODOLOGIA DE TRABAJO DEL A.D.N.

• I) EXTRACCIÓN DEL A.D.N.
• II) P.C.R
• III) OBTENCIÓN DE LOS GENOTIPOS
• TECNICAS RADIACTIVAS
• REVERSO DEL DOT-BLOT (NO RADIACTIVAS)
• QUIMIOLUMINISCENCIA

23
EXTRACCION DEL ADN

• ENZIMATICAS (PROTEINAZA K)
• NO ENZIMATICAS (TKM)
• RESINAS QUELANTES (CHELEX)

24
EXTRACCIÓN DE A.D.N. ENZIMATICA

• Extracción de ADN de sangre
• 1.- Pipetear 0.5 ml de Buffer de Digestión en
  tubos para microcentrifuga de 1.5 ml estériles.
  Adicionar uno de los reactivos siguientes y
  mezclar.
• 10 a 50 ?l de sangre total
• b) 2 a 10 ?l de (aproximadamente 105 células
  sanguíneas blancas)
• 1 cm2 de mancha de sangre
• 2.- Adicionar 15 ?l de solución de proteinasa K
  10 mg/ml. Mezclar suavemente. Incubar a 56C por
  al menos 1 hora.
• 3.- Remover el sustrato de las manchas de sangre
  con un palillo estéril o una punta para
  micropipeta estéril.
• 4.- A 0.5 ml de células lisadas, adicionar 0.5 ml
  de solución de fenol. Vortexee. Centrifugue en
  una microcentrifuga durante 3 a 5 min a 10000 a
  15000 xg (máxima velocidad). Transferir la fase
  superior acuosa a tubos de microcentrifuga de 1.5
  ml estériles.
• 5.- Adicionar 0.5 ml de solución de
  fenol-cloroformo. Vortexee. Centrifugue en una
  microcentrifuga durante 3 a 5 min a 10000 a 15000
  xg (máxima velocidad). Transferir la fase
  superior acuosa a tubos de microcentrifuga de 1.5
  ml estériles.
• 6.- Adicionar 0.5 ml de solución de cloroformo.
  Vortexee. Centrifugue en una microcentrifuga
  durante 3 a 5 min a 10000 a 15000 xg (máxima
  velocidad). Transferir la fase superior acuosa a
  tubos de microcentrifuga de 1.5 ml estériles.
• 7.- Agregar 1/10 parte de acetato de sodio 3M.
• 8.- Agregar 2.5 volúmenes de etanol absoluto
  frío.
• 9.- Dejar precipitando a 20C toda la noche o a
  70C durante 1 hr.
• 10.- Centrifugar 10 min a 14000 rpm. Decantar el
  etanol.
• 11.- Lavar el botón con 100 ?l de etanol al 70.
  Centrifugar 5 min a 14000 rpm. Decantar el
  etanol.
• 12.- Secar al aire el botón.
• 13.- Resuspender en agua destilada estéril.

25
Replicación del ADN

• El ADN tiene toda la información necesaria para
  el funcionamiento celular y de los caracteres
  específicos de una especie o individuo, por ello,
  es imprescindible que pueda ser copiado con
  fidelidad para que pueda repartirse entre la
  progenie, ya sean células que se regeneran o
  nuevos individuos de una especie. En el primer
  caso la replicación se realiza durante el proceso
  de mitosis, y en el segundo durante el proceso de
  la meiosis
• Se han emitido muchas hipótesis de como se
  duplica el ADN, pero Watson y Crick formularon la
  hipótesis semiconservativa que fue posteriormente
  demostrada por Meselson y Stahl en 1957. Según
  esta hipótesis, la nuevas moléculas de DNA
  duplexo contienen una hebra de material original
  y otra nueva.

26
P.C.R.

• permite amplificar más de un millón de veces un
  ADN obtenido a partir de una región seleccionada
  del genoma, siempre y cuando se conozca una parte
  de su secuencia de nucleótidos. Esta técnica fue
  ideada en 1989 por Kary B. Mullis que obtuvo el
  premio Nobel de Química en 1993 por dicho invento.

27
(No Transcript)
28

• Para la PCR se utilizan dos oligonucleótidos
  sintéticos de unos 15-20 nucleótidos que son
  complementarios a las zonas flanqueantes de la
  región que se quiere amplificar. Estos
  oligonucleótidos (habitualmente conocidos por su
  nombre en inglés, "primers") actúan como
  cebadores para la síntesis in vitro de ADN la
  cual está habitualmente catalizada por una enzima
  llamada Taq polimerasa. Dicha enzima se aísla de
  una bacteria termófila, denominada Thermus
  Aquáticus, que es capaz de crecer a temperaturas
  elevadas (79 - 85 º C). A esta temperatura dicha
  enzima es capaz de mantener una media de
  extensión de más de 60 nucleótidos por segundo en
  regiones ricas en uniones G-C. La temperatura
  optima a la que actúa la Taq polimerasa permite
  el uso de elevadas temperaturas para la unión de
  los primers y para la extensión, de esta manera
  se aumenta el nivel de exigencia de la reacción y
  se reduce la extensión de los primers unidos
  inespecíficamente al ADN.

29

• DESNATURALIZACIÓN Para que comience la reacción
  es necesario que el ADN molde se encuentre en
  forma de cadena sencilla. Esto se consigue
  aplicando temperaturas de 90 a 95ºC que producen
  la rotura de los puentes de hidrógeno
  intercatenarios y por lo tanto la separación de
  ambas cadenas. Para conseguir la completa
  separación de las hebras de toda la muestra esta
  temperatura debe mantenerse unos minutos. Si el
  ADN solo se desnaturaliza parcialmente éste
  tenderá a renaturalizarse rápidamente, evitando
  así una eficiente hibridación de los primers y
  una posterior extensión.
• HIBRIDACIÓN Esta fase se denomina también fase
  de annealing o de emparejamiento. Una vez que
  el ADN está desnaturalizado se disminuye la
  temperatura hasta un rango comprendido entre los
  40 y los 60ºC para que se pueda producir la unión
  de los primers a las secuencias flanqueantes del
  fragmento que se va a amplificar. La temperatura
  de fusión o annealing (Tm, melting temperature)
  depende de varios factores y es relativamente
  específica para cada primer. La longitud de los
  primers y la secuencia son críticas en la
  designación de los parámetros de una
  amplificación, una fórmula simple para calcular
  la Tm es la siguiente 
• Tm 4(GC) 2 (AT).
• No obstante, cada primer exige una serie de
  estudios experimentales para determinar su
  temperatura de annealing específica ya que si la
  temperatura es muy baja la unión se hará de forma
  inespecífica y si es muy alta no se producirá una
  unión completa.
• EXTENSIÓN Durante este paso la Taq polimerasa
  incorpora nucleótidos en el extremo 3' del primer
  utilizando como molde la cadena de ADN
  previamente desnaturalizada. La temperatura a la
  que se lleva a cabo este paso suele ser de 72ºC
  ya que es la temperatura a la que la Taq
  polimerasa alcanza su máxima actividad.
  Normalmente una extensión de 20 segundos es
  suficiente para fragmentos menores de 500 pb, y
  40 segundos para fragmentos por encima de 1.2Kb.
• Un factor importante en el transcurso de las
  diferentes fases es el tiempo de rampa. Este se
  define como el tiempo invertido en pasar de una
  temperatura a otra y depende del diseño y de las
  características del aparato donde se realiza
  automáticamente este proceso, el termociclador.
  En las nuevas generaciones de termocicladores
  este factor se ha ido optimizando para hacerlo
  mínimo.

30

• Componentes de la PCR
• 2.2.1  BUFFER DE AMPLIFICACIÓN
• Los buffer de PCR que se utilizan normalmente
  contienen KCl, Tris y MgCl2. El MgCl2 es el
  componente que más influye en la especificidad y
  rendimiento de la reacción ya que los iones Mg2
  son necesarios para la actividad de la Taq
  polimerasa, es decir, actúan como cofactores de
  la polimerasa. 
• La concentración óptima de MgCl2 está en torno a
  1.5 mM si se emplean concentraciones de 200 mM de
  cada uno de los dNTPs. No obstante, a veces es
  necesario probar con diferentes cantidades de Mg
  ya que un exceso del mismo origina una
  acumulación de productos inespecíficos y una
  cantidad insuficiente hace que disminuya el
  rendimiento de la amplificación.
• 2.2.2  PRIMERS
• A la hora de elegir unos primers para amplificar
  un determinado fragmento de ADN hay una serie de
  reglas a seguir
• La longitud de cada uno de los primers debe estar
  comprendida entre 18 y 24 bases ya que se ha
  comprobado que primers de mayor longitud (30-35
  bases) no aumentan el rendimiento y los primers
  cortos carecen de suficiente especificidad.
• Ambos primers deben tener una Tm similar (como
  mucho la diferencia entre ambas temperatura debe
  ser de 5ºC).
• La relación bases púricas bases pirimidínicas
  debe ser 11 (o como mucho 40-60).
• La secuencia de los primers debe comenzar y
  terminar con 1-2 bases púricas.
• Para evitar la formación de dímeros de primers es
  necesario comprobar que los primers no contengan
  secuencias complementarias entre sí.
• Los dímeros de primers consisten en fragmentos de
  doble cadena cuya longitud es muy próxima a la de
  la suma de los primers y se producen cuando un
  primer es extendido a continuación del otro. El
  mecanismo exacto por el que se forman estos
  dímeros no está completamente determinado. La
  observación de que primers con los extremos 3'
  complementarios favorecen su formación sugiere
  que el paso inicial se debe a interacciones
  transitorias que aproximan los extremos
  complementarios. Algunas polimerasas, incluida la
  Taq, han mostrado una débil actividad
  polimerizadora no dirigida por un ADN patrón, la
  cual puede unir nucleótidos adicionales al doble
  extremo apareado. Si esta actividad puede
  producirse sobre una hebra sencilla de
  oligonucleótidos, resultaría una buena
  oportunidad para que la extensión formara un
  corto solapamiento en el extremo 3' con el otro
  primer, suficiente para promover la formación del
  dímero.
• 2.2.3  DESOXINUCLEÓTIDOS TRIFOSFATOS
• Las concentraciones de dNTPs que suelen usarse
  están en torno a 200 µM para cada uno de ellos.
  En un volumen de reacción de 25 µl con esta
  concentración de dNTPs se sintetizarían entre
  6-6.5 µg de ADN. La concentración de dNTPs y de
  MgCl2 va relacionadas ya que el Mg se une a los
  dNTPs con lo que concentraciones elevadas de
  dNTPs inhibirían la reacción al no tener la Taq
  polimerasa suficiente Mg como para incorporar
  dNTPs. Para una concentración de 200 µM de cada
  dNTP se suele añadir MgCl2 a una concentración de
  1.5 mM.
• 2.2.4  TAQ-POLIMERASA
• Las cantidades óptimas de Taq polimerasa
  necesarias para la síntesis de ADN están
  alrededor de 2 unidades en 25 µl de volumen final
  de reacción. La actividad de este enzima se ve
  influenciada por la concentración de dNTPs, de
  Mg2 y de algunos iones monovalentes de manera
  que concentraciones elevadas de los mismos
  inhiben dicha actividad.
• Por otro lado, pequeñas concentraciones de KCl
  estimulan la actividad sintética de la Taq en un
  50-60 con un máximo aparente cuando su
  concentración es de 50 mM. Existen algunos datos
  relacionados con la influencia de ciertos
  reactivos que se emplean antes de la
  amplificación y que alteran la actividad de la
  Taq. Por ejemplo concentraciones 1M de urea
  estimulan la actividad, el SDS a bajas
  concentraciones que la inhibe al igual que
  concentraciones mayores del 10 de etanol. 
• 2.2.5  ADN MOLDE O TEMPLATE"
• Es el ADN del cual queremos copiar un determinado
  fragmento, es, por tanto, el ADN que la Taq
  polimerasa utiliza como molde para la síntesis de
  nuevas cadenas polinucleotídicas. La cantidad de
  ADN necesaria para la PCR depende de varios
  factores

31
(No Transcript)
32
(No Transcript)
33
(No Transcript)
34
Las Pruebas de Paternidad en la Historia

• Es de conocimiento histórico que la determinación
  de la paternidad era una preocupación inclusive
  en tiempos precristianos. Es clásico el caso del
  hijo que Cleopatra llevó desde Egipto hasta Roma
  imputando su paternidad a Julio César y creando
  un problema político en Roma que terminó con el
  asesinato del propio Julio César. Desde esas
  épocas hasta exactamente el año1900 el "parecido
  físico" era el único parámetro concreto mediante
  el cual se podía tratar de dilucidar si un hombre
  era o no el padre biológico de un niño.
  Obviamente, éste era un método sujeto a
  interpretaciones muy subjetivas que sólo en casos
  muy específicos daba resultados creíbles para la
  comunidad.

35
HLA

• El descubrimiento de los antígenos asociados a
  los glóbulos blancos llamados sistema HLA (Human
  Leukocyte Antigen) permitió que hubiera un método
  más sofisticado para determinar paternidad ya que
  estos también seguían un patrón hereditario
  mendeliano. Sin embargo, recién cuando se pudo
  usar la tecnología del ADN aplicada a los
  antígenos HLA se pudo conseguir probabilidades de
  paternidad que se aproximaban al 80. Sin
  embargo, este era un valor aún insuficiente para
  contar con la capacidad de designar
  inequívocamente al verdadero padre biológico. Es
  importante resaltar que hoy en día hay algunos
  laboratorios que equivocadamente persisten en
  ofrecer pruebas de HLA hechas por ADN para
  determinación de paternidad, siendo la verdadera
  utilidad actual de este método el determinar
  histocompatibilidad previa a transplantes de
  órganos.

36
RFLPs

• En 1985 se describió por primera vez el uso de la
  técnica conocida como RFLP (restriction fragment
  length polymorphisms) para análisis de
  paternidad. En esta técnica, se utiliza enzimas
  llamadas de restricción por ejemplo, HaeIII 
  para cortar el ADN en sitios previamente
  conocidos por su gran variabilidad  (regiones
  hipervariables) en la búsqueda de una secuencia
  específica. Los fragmentos resultantes se colocan
  en una matriz hecha de un gel. Una corriente
  eléctrica se aplica al gel y los fragmentos (que
  tienen carga negativa) migran a lo largo del gel
  (dirigiéndose al polo positivo), de manera tal
  que los fragmentos pequeños logran movilizarse
  más lejos, y los fragmentos más grandes son más
  lentos. Los fragmentos así separados son
  transferidos a una membrana de nylon, la cual es
  luego expuesta a una sonda de ADN marcada la
  cual es un pequeño segmento sintético de ADN que
  reconoce específicamente - y por tanto se une
  específicamente - a un segmento único (locus)del
  ADN de la persona que se está examinando.
• La técnica RFLP se sigue usando en algunos
  laboratorios pero tecnológicamente hoy en día es
  considerada prácticamente obsoleta por una serie
  de razones.

37
(No Transcript)
38
S.T.R.s

• Hoy en día - y desde mediados de los 1990s - la
  técnica que es considerada como tecnología de
  punta es la que hace uso de la hipervariabilidad
  natural de ciertas regiones "silenciosas" del ADN
  conocidas como STR (short tandem repeats).

39
Caso de estudio biológico de la paternidad
realizado con electroforesis capilar. Cada pico
corresponde a un alelo, el hijo (H) debe poseer
un alelo de la madre (M) y otro del padre (P)
para que la paternidad sea compatible
40
A.D.N. MITOCONDRIAL

• Las mitocondrias son organelos intracelulares
  presentes en todas las células humanas (excepto
  los glóbulos rojos maduros). Las mitocondrias son
  esenciales para la producción de energía, están
  presentes en el citoplasma de las células y - lo
  que es relevante aquí - poseen su propio ADN. 
• Sucede que cuando ocurre el proceso de
  fecundación del óvulo por el espermatozoide, sólo
  el núcleo del espermatozoide logra penetrar el
  óvulo. En consecuencia, las mitocondrias (y su
  ADN mitocondrial) del nuevo ser engendrado
  provienen exclusivamente del óvulo, es decir de
  la madre