Title: Ontogeny of Hippocampal Corticosteroid Receptors : Effects on Antenatal Glucocorticoids in Human and
1Ontogeny of Hippocampal Corticosteroid Receptors
Effects on Antenatal Glucocorticoids in Human
and Mouse
- The Journal of Comparative Neurology 499
924-932 (2006)
2- Ontogénie développement de lindividu, depuis
luf fécondé jusquà létat adulte.
- Hippocampe structure faisant partie du système
limbique qui se divise en deux parties le gyrus
dentelé et la corne dAmmon (CA1, CA2, CA3).
Cette structure est impliquée dans la mémoire
épisodique.
3- Récepteurs de type I MR (Minéralocorticoïdes)
Expression système limbique, Haute affinité
pour la corticostérone activité basale
- - Récepteurs de type II GR (Glucocorticoïdes)
- Expression ubiquitaire
- Faible affinité pour la corticostérone stress
4Contexte général
- Ladministration prénatal de dex ?GC
plasmatique élevée et réduction des taux dARNm
GR-MR dans lhippocampe - Effets aigus sur les niveaux hippocampiques des
ARNm du GR et MR après lexposition prénatale aux
GC - Le lien caractéristique entre ontogénie et
récepteurs aux corticoïdes a été étudié chez le
rat, la souris et le singe
5Hypothèse
Lexposition ftale à la dexaméthasone influence
les niveaux hippocampique dARNm du GR et MR
durant le développement chez lhomme.
6Méthode
- Protocol chez la souris (comparable à celui chez
lhomme) - Souris C57bl6 recevant à 15,5 jours de gestation
une injection intraperitonéale de dexamethasone
(0,4mg/kg) - Étude de lexpression des récepteurs durant le
traitement à E14,5 / E15,5 / E18,5 / P1 / P5 et
adulte - Étude des niveaux dexpression des ARNm des
récepteurs après le traitement à E16 / E18 / P0 /
P5 / P10 / P20 et adulte
- Nouveaux-nés dont les patientes ont subi ou non
un traitement aux GC - 17 nouveau-nés de 24 à 34 semaines décédés 4
jours après leur naissance - Informations age de gestation, poids de
naissance, usage anténatal de GC, cause
principale du décès - Thérapie 2 doses intramusculaire (12mg) de
betamethasone à 24h dintervalle. Cette thérapie
est répétée si la mère na pas accouchée 14 jours
après.
7Technique
- Hybridation in situ
- - digoxigenin ontogénie du GR et MR
- - 33P quantification des ARNm GR et MR
Révélation de la DIG par un Ac anti-DIG marqué à
la phosphatase alcaline
Coupes fixées au PAF 4 (10 min) et acétylées
(10min)
Hybridation à 72C Solution contenant sonde
ARN-DIG tRNA et ADN pour la saturation des
sites non spécifiques
Lavages à 72C pdt 2 heures
Déshydratation des coupes, séchages et
exposition souris 3 jours homme 6 semaines
Coupes fixées au PAF 4 (10 min) et acétylées
(10min)
Hybridation ON à 55C sonde ARN-33P
Lavages 1- 30 min à 65C tp 1 2- 15 min à RT tp
2
Lavages stringents à 65C pdt 30 min
Traitement à la RNAse A
8? Détection dARNm GR au niveau des poumons suite
au traitement à la dexaméthasone
9- Pour le GR
- pas de modification du niveau dexpression des
ARNm au cours du temps - au niveau de la CA et du GD pas de modification
dû au traitement à la dexaméthasone comme prévu
- Pour le MR
- au niveau du CA la densité optique des ARNm
décroît jusquau stade P10 puis augmente à P20
qui est stabilisé à lage adulte. Et au niveau du
GD, on observe une augmentation du niveau
dexpression des ARNm à P20 qui est stabilisé à
lage adulte - le traitement à la dexaméthasone entraîne une
diminution de la densité optique des ARNm à E16
10- niveau dexpression de lARNm du MR est plus
important pour lanimal non traité
- pas de différence dexpression
11? Détection dARNm MR au niveau du GD et CA suite
au traitement à la dexaméthasone pas de
différence dexpression entre les patientes
traitées et non traitées
12Conclusion
- Les profiles ontogéniques de lexpression du GR
et MR montrent une différence pour la souris
(expression tardive du GR) mais pas pour lhomme
(24 semaines de gestation) - Pour lhomme comme pour la souris, lexpression
hippocampique du MR est plus élevée que celle du
GR - Diminution transitoire du taux dARNm des MR
après le traitement chez la souris
- Chez lhomme, le GR et MR sont présents au niveau
des poumons au cours du troisième trimestre de
gestation (lors du traitement anténatal par les
glucocorticoïdes). Les GCs sont importants pour
la maturation ftale des poumons car ils régulent
la production des composants pulmonaires. - Le GR et MR contribuent de manière équivalente au
développement pulmonaire de lhomme alors que le
GR est plus important pour le développement
pulmonaire de la souris.
13Localization of dopamine D2 receptors on
cholinergic interneurons of the dorsal striatum
and nucleus accumbens of the rat
- Brain Research, 986 (2003) 22-29
14- Récepteurs dopaminergique D2 appartiennent à la
sous-famille des récepteurs couplés à la
protéine Gi/o
- Interneurones cholinergique neurone à
acétylcholine intervenant dans des boucles
locales de régulation, ceux sont des modulateurs
du fonction- nement ou disfonctionnement du
striatum
15- Système mésolimbique
- Striatum dorsal régulation de la fonction
motrice - Noyau accumbens shell (récompense) et core
(aspect moteur)
16Contexte général
- Les interneurones cholinergiques modulent le
signal corticostriatal et sont des modulateurs de
la fonction striatale - Laction dopaminergique sur les interneurones
cholinergiques sont médiés par deux classes de
récepteur D1(D1,D5) et D2(D2,D3,D4) - Lactivation des récepteurs D2 entraîne une
inhibition de la libération de lacétylcholine
17Hypothèse
Existence dun substrat neuroanatomique des
influences (motrices et de récompense) médiées
par la dopamine sur les réseaux neuronaux
cholinergique du striatum dorsal et du noyau
accumbens
18Méthode et Technique
- Rat Sprague-Dawley
- Perfusion intracardiaque PAF 4 / glutaraldehyde
0,1 - Coupe 70µm
- Immunocytochimie récepteur dopaminergique D2 et
ChAT (choline acetyltransferase)
Incubation 24h à 4C avec les Ac Iaire
Récepteur D2 et ChAt
Incubation 1h dans la solution de blocage (SN de
lAc IIaire)
Lavages avec la solution PBS
Incubation séquentielle avec les Ac IIaire
biotinylés
Révélation de la présence de la peroxydase
Produit marron ChAT Produit blue récepteur D2
Lavages avec la solution PBS
19Les interneurones cholinergiques du striatum sont
groupés, ont un corps cellulaire de 30 à 50µm
Bregma 1.60mm
Bregma 2.70mm
Bregma 0.70mm
20Présence dun double marquage ChAT- D2R au
niveau du corps cellulaire et des prolongements
dentritiques des interneurones cholinergique dans
le striatum dorsal
Présence dun double marquage ChAT- D2R au
niveau du corps cellulaire et des prolongements
dentritiques des interneurones cholinergique dans
le noyau Accumbens
21Présence du marquage axonal ChAT au niveau du
noyau Accumbens
Présence du marquage axonal D2R au niveau du
noyau Accumbens
Présence dun double marquage ChAT- D2R au
niveau de laxone des neurones cholinergiques du
noyau accumbens
22Conclusion
- Les récepteurs D2sont impliqués dans les
mécanismes soulignant les troubles daddiction
ainsi que les troubles relatifs au striatum
(schizophrénie, parkinson ) - La localisation cellulaire des récepteurs
dopaminergique D2 sur les interneurones
cholinergiques (soma, dendrite, axone) au niveau
du striatum dorsal et du noyau Accumbens va
permettre le développement de traitement cible
spécifique