Diapositiva 1

1
Trabajo publicado en www.ilustrados.com La mayor
Comunidad de difusión del conocimiento
Fundamentos de Espectrofotometría
Por M. en C. de Educ. Guadalupe E. Daleth
Guedea Fernández daleth.guedea_at_gmail.com
2
Introduccion

• En ocasiones al ver una serie en la t.v. de las
  policíacas o de médicos donde se hacen análisis a
  pequeñas muestras para averiguar si hay DNA y si
  este coincide con el de la víctima o con el
  malo o si cierta sustancia puede afectar a la
  salud etc.. entonces uno ve que los
  investigadores hacen una serie de estudios con
  las muestras que en ocasiones son muy pequeñas
  y dan resultados en la vida real sucede algo
  similar cuando se tiene en el laboratorio en
  una solución presencia de color o cuando se
  sabe que hay ciertas cantidades de algún elemento
  pero no se sabe cuanto se genera la inquietud
  de saber que elemento es en que cantidad está y
  es entonces que se producen una serie de
  preguntas tales como COMO LO MIDO y otras
  más entre ellas pueden estar Qué es la luz
  qué es longitud de onda cómo se mide que
  relación hay entre luz y color para que sirve
  esto de qué manera se mide una solución
  coloreada.
• En este trabajo se propone de orientar de manera
  sencilla sobre este tema tratando de dar una
  idea fundamental de las preguntas anteriores y
  otras más que se hacen en torno al tema que se
  está presentando espero este trabajo sea útil
  tanto a profesores como alumnos para orientarse y
  poder entender más acerca de la
  espectrofotometría a nivel laboratorio de
  ciencias biológicas.

3
Contenido

• Espectroscopía
• Características de la Luz
• Colores
• Qué es longitud de Onda
• Relación entre frecuencia velocidad y longitud
  de onda
• Absorción / Absorbitividad
• Las leyes de Lambert y Beer
• Espectrofotometría

4

• Colorimetría y Espectrofotometría como
  procedimientos analíticos
• Fotocolorímetro
• ESPECROFOTÓMETRO
• Curva Patrón
• Referencias e Imágenes

5
ESPECTROSCOPÍA
La espectroscopia es el estudio del espectro de
la luz que emiten los cuerpos sustancias y
elementos. De este estudio se puede conocer la
composición temperatura densidad velocidad de
desplazamiento y otros factores que les son
propios y componen a estos cuerpos sustancias o
elementos
6
Características de la LUZ
7

• La luz tiene una naturaleza dual
• Como onda
• Como una corriente de partículas o paquetes de
  energía (fotones)

8
Albert Einstein desarrolló en 1905 la teoría de
que la luz estaba compuesta de unas partículas
denominadas fotones cuya energía era
inversamente proporcional a la longitud de onda
de la luz.
9
3
1
Foton
2
10
La teoría electromagnética de la luz propuesta
por Maxwell La perturbación que se propaga como
ondas de luz está formada por fuerzas eléctricas
y magnéticas y la perturbación se produce en
cargas eléctricas en movimiento.
11
Efecto de la emisión electromagnética
12
El efecto fotoeléctrico demuestra el
comportamiento de la luz como partícula
(gránulos o corpúsculos)
13
La naturaleza corpuscular de la luz se observa en
fotos de objetos iluminados muy débilmente. La
imagen se forma punto a punto y muestra que la
luz llega a la película fotográfica por unidades
separadas que los producen.
14
Estos descubrimientos dieron origen a toda la
tecnología moderna de telecomunicaciones como la
televisión
15
En estas imágenes se puede apreciar debido a la
toma fotográfica los elementos puntuales que
apoyan a esta teoría
16
COLORES
17
Los seres humanos (y algunos animales) apreciamos
una amplia gama de colores que por lo general
se deben a la mezcla de luces de diferentes
longitudes de onda. Se conoce como color puro al
color de la luz con una única longitud de onda o
una banda estrecha de ellas.
COLORES
18
Cuanto más larga la longitud de onda de la luz
visible tanto más rojo el color. Asimismo las
longitudes de onda corta están en la zona violeta
del espectro.
COLORES
19
Así todos los elementos existentes poseen un
espectro

COLORES
20
Hay varios tipos de espectros los más comunes
son los espectros continuos espectros de emisión
y los espectros de absorción.
Si es colocado frente al espectroscopio se podrá
ver un elemento En situaciones en las que se le
somete altas temperaturas y presiones y no se
presentan líneas obscuras se trata de un
espectro continuo. En situaciones normales y se
observan unas líneas de colores frente a un fondo
negro se trata de un espectro de emisión. Y por
último si sucede la primer situación y entre el
elemento afectado y el espectroscopio se coloca
un elemento a menor temperatura que el primero
se obtiene el espectro de absorción
COLORES
21
COLORES
22
La luz blanca produce al descomponerla lo que se
llama un espectro continuo que contiene el
conjunto de colores que corresponde a la gama de
longitudes de onda que la integran.
COLORES
23
Todos los elementos poseen un espectro propio
que se puede medir al someterse a temperaturas
elevadas ya que producen espectros discontinuos .
Para ver espectros de la tabla periódica buscar
en esta página http//site.ifrance.com/okapi/quim
ica.htm
COLORES
24
Qué es longitud de onda
25
ONDA
26
La distancia entre dos picos (o dos valles) de
una onda se llama longitud de onda (
lambda).

27
CARACTERÍSTICAS DE LAS ONDAS
28
La longitud y la frecuencia de onda son
inversamente proporcionales y se relacionan
mediante la siguiente ecuación
29
U.V. X GAMMA
La luz visible es sólo una pequeña parte del
espectro electromagnético con longitudes de onda
que van aproximadamente de 350 nanómetros hasta
unos 750 nanómetros ltnanómetro nm
milmillonésimas de metrogt.
Luz visible
350 nm
750 nm
Infrarrojo Microondas Radio
30
(No Transcript)
31
La luz blanca está compuesta de ondas de diversas
frecuencias. Cuando un rayo de luz blanca pasa
por un prisma se separa en sus componentes de
acuerdo a la longitud de onda
32
Así la luz blanca es una mezcla de todas las
longitudes de onda visibles. En el espectro
visible las diferencias en longitud de onda se
manifiestan como diferencias de color.
33
La distribución de los colores se determina por
la longitud de onda de cada uno de ellos.
34
Las longitudes de onda mas largas que las del
rojo se les conoce como infrarrojas y las mas
cortas que el violeta ultravioletas.
Longitud de Onda
35
Relación entre frecuencia velocidad y longitud
de onda
36
Frecuencia natural Cualquier objeto oscilante
tiene una frecuencia natural (vibración en
ausencia de perturbación).
37
frecuencia es el Número de vibraciones por segundo

• Así Frecuencia es número de veces que la
  onda se repite por segundo.

La Frecuencia se mide en Hertz (Hz)
38
Quién es HERTZ
HEINRICH HERTZ (1857-1894) Investigador alemán
que construyó un dispositivo para generar y
detectar en un laboratorio ondas
electromagnéticas demostrando su existencia
así como se reflejan estas ondas se refractan
y se comportan como las ondas de luz Estimó
que la frecuencia f de la onda era de alrededor
de 3 x 107 Hz. Y determinó que su longitud l
era de 10 m. Con estos valores estableció que la
velocidad v de la onda es v f l (3 X 107
Hz) X (10 m) 3 X 108 m/s 300 000 km/s o
sea la velocidad de la luz.
39

• 1 Hz (o hercio) es igual a 1 ciclo u oscilación
  por segundo. (1 Hertz 1 ciclo/seg)
• Un kilohercio (kHz) mil de ciclos por segundo
• Un megahercio (MHz) un millon de ciclos por
  segundo
• Un gigahercio (GHz) mil millones de ciclos por
  segundo

40
Un péndulo de 1 m de longitud presenta una
frecuencia de 05 Hz es decir que el péndulo va
y vuelve una vez cada 2 segundos.
41

• l c / u
• Donde c vel. de la luz en m. por seg.
• c l . u (m-1s-1)
• u c / l

42
Como la luz viaja a una velocidad de3 x 108
m/s
Frec Vel / l
Freclimite luz visible 3x108 (m/s) / 10-6 (m)
3x1014 Hz Es decir 300 000 000 000 ciclos por
segundo
43
(No Transcript)
44
Relación entre Medidas en valores Hertz y
Metros
45

• Las ondas electromagnéticas de frecuencias
  extremadamente elevadas como la luz o los rayos
  X suelen describirse mediante sus longitudes de
  onda que frecuentemente se expresan en
  nanómetros.
• Un ejemplo es Una onda electromagnética con
  una longitud de onda de 1 nm tiene
  aproximadamente una frecuencia de 300 millones de
  GHz.

46
l vel / u

• El sonido se propaga a una velocidad de 340 m
  cada segundo

La nota La tiene una frecuencia de 440 Hz l
340 (m/s) / 440 Hz (ciclos por seg) 0.77 m

• 4 x 10-5 cm 400 nm (luz violeta)
• 7 x 10-5 cm 700 nm (luz roja)

47
Algunas equivalencias
48

Comparación de las mediciones de las longitudes
de onda con la luz visible.
49
El color de un cuerpo depende de la luz que
recibe refleja o transmite. Por ejemplo el
color rojo se dá cuando absorbe en casi su
totalidad todas las radiaciones menos las rojas
las cuales refleja o deja pasar dependiendo su
estructura (sólida o transparente).
50
La energía UV es mayor que cualquier color del
espectro visible. Sin embargo los rayos X son
más energéticos que la luz UV como se puede
apreciar por su longitud de onda.
Con base a lo anterior se puede entender que
existe una relación inversa entre la longitud de
onda y la energía del fotón correspondiente.
51
Entonces las energías en el rango
ultravioleta-visible excitan los electrones a
niveles de energía superiores dentro de las
moléculas y las energías infrarrojas provocan
solo vibraciones moleculares
52
El color percibido de una solución depende de la
combinación de colores complementarios que la
atraviesan
53
Absorción Absorbitividad
54
Proceso de Absorción La energía de excitación a
una molécula proveniente de un fotón durante el
proceso de absorción se representa así A hn
A A calor donde A es el absorbente en su
estado de energía bajo A es el absorbente en
su nuevo estado de excitación energética hn
representan a la constante de Planck y la
frecuencia respectivamente  
55

• La energía del fotón incidente posee una longitud
  de onda (l)
•  
• A es inestable y rápidamente revierte a su
  estado energético más bajo perdiendo así la
  energía térmica correspondiente.
•  
• La absorción de determinadas longitudes de onda
  depende de la estructura de la molécula
  absorbente (absortividad a)

56
Cuando un rayo de luz monocromática con una
intensidad I0 pasa a través de una solución
parte de la luz es absorbida resultando que la
luz emergente I es menor que I0
Luz incidente (I0) Luz
absorbida Luz emergente (I)
I0
Longitud del medio absorbente o ancho de la celda
57

• Absortividad (a)
• a es una constante de proporcionalidad que
  comprende las características químicas de cada
  compuesto o molécula y su magnitud depende de
  las unidades utilizadas para b y c.

58
Cuando se expresa la concentración en moles por
litro y la trayectoria a través de la celda en
centímetros la absortividad se denomina
absortividad molar y se representa con el símbolo
e . En consecuencia cuando b se expresa en
centímetros y c en moles por litro. A e
bc Donde A representa la absorbancia del compuesto
59
Las leyes de Lambert y Beer
o los fundamentos de la interrelación de la luz
que se absorbe y la que se transmite
60
Ley de Lambert cuando un rayo de luz
monocromática (I0) pasa a través de un medio
absorbente su intensidad disminuye
exponencialmente (I) a medida que la longitud del
medio absorbente aumenta
I I0e-ab
Ancho de la celda
61
Ley de Beer Cuando un rayo de luz monocromática
pasa a través de un medio absorbente su
intensidad disminuye exponencialmente a medida
que la concentración del medio absorbente
aumenta I
I0e-ac
62
Lo que significa que combinando ambas leyes se
crea la Ley de Beer-Lambert donde la fracción
de luz incidente que es absorbida por una
solución es proporcional a la concentración de
soluto y al espesor de la sustancia atravesada
por la luz. La relación entre la luz incidente
(I0) y la reflejada (I) dará una idea de la
cantidad de radiación que ha sido absorbida por
la muestra.
63
Ley de lambert Beer I
I0e-abc Si despejamos I/I0 e-abc
64
Al cociente de las intensidades se denomina
Transmitancia T I/I0 e-abc Sacando
logaritmos Loge
I/I0 abc Convirtiendo a log10 Log10 I/I0
2.303 abc
Log10 I/I0 abc Absorbancia Log10 I/I0
abc
65
La Transmitancia (T) es la relación entre la
intensidad de luz transmitida por una muestra
problema (I) con la intensidad de luz incidente
sobre la muestra (Io) T I / I0 Se
expresa como T
66

• La absorbancia es directamente proporcional a la
  longitud del recorrido b a través de la solución
  y la concentración c del color absorbente. Estas
  relaciones se dan como
• A abc
• A menudo b es dada en términos de cm. y c en
  gramos por litro entonces la absortividad tiene
  unidades de lg1cm1.

67
Qué relación guardan la transmitancia y la
absorbancia
De acuerdo a las características de la sustancia
analizada la luz que no se absorbe atraviesa la
solución
T I/I0
68
Por lo tanto la absorbancia es reciproca de la
transmitancia
Absorbancia contra concentración (comportamiento
lineal)
Transmitancia contra concentración (pendiente
con signo negativo y comportamiento exponencial)
Transmitancia
Concentración
69
Absorbancia
De lo anterior se desprende que la Absorbancia
(A) o luz que es absorbida por la muestra es
igual al logaritmo en base diez del recíproco de
la transmitancia (T) o bien al -log10 de la
transmitancia en el que el disolvente puro o
(blanco) es el material de referencia esto
es A log10 1/T log101- log10 T 0 log10
T log10 T
70
La representación gráfica correspondiente a
absorbancia y transmitancia en un gradiente de
concentraciones es la siguiente
71
Obtención de TRANSMITANCIA utilizando valores de
Absorbancia Con base en la relación T
10-abc y considerando que T se menciona en
porcentaje () T 10-abc x 100. Aplicando
logaritmos a la expresión anterior log10 T
-abc log 10 10 log10 100 Invirtiendo
términos log T log10 100 -abc log 10 10 2
abc 1 log10 T 2 abc Como abc
Absorbancia A log10 T 2 A.
72
log10 T 2 A. Ejemplo Una absorbancia de
0.6 a que equivale en T Log10 T 2 0.6
1.4 Log10 T 1.4 T 1 / Log10101.4
Aplicando antilog. a 1.4 15 de
transmitancia
73
Obtención de absorbancia a partir de un valor de
de transmitancia
RECORDANDO A log10 1/T Ejemplo de cálculo T
30 T 0.30 Sustituyendo (1/T) 1/0.30
3.33 Log10 3.33 0.523 de absorbancia
74
ESPECTROFOTOMETRÍA
75
Se le llama espectrofotometría a la medición de
la cantidad de energía radiante que absorbe un
conjunto de elementos o un elemento en su estado
puro en función de la longitud de onda de la
radiación lumínica y a las mediciones a una
determinada longitud de onda.
Arco iris en Marte
76
Cómo se puede medir la radiación que emiten o
absorben los cuerpos. Un aparato capaz de
obtener el espectro de una radiación es decir
de separar la radiación en sus componentes se
llama un espectroscopio. Si el aparato es capaz
de fotografiarla se llama un espectrógrafo y Si
es capaz de medirla diremos que se trata de un
espectrómetro. Cuando es capaz de medir también
la intensidad de la radiación se llama
espectrofotómetro.
77
(No Transcript)
78
(No Transcript)
79
Colorimetría y Espectrofotometría como
procedimientos analíticos
80
Las técnicas colorimétricas se fundamentan con la
medición de la absorción de radiación visible
por sustancias coloreadas. Sin embargo cuando
una muestra a determinar no posee coloración es
necesario llevar a cabo un tratamiento de color
empleando substancias que que reaccionen de forma
proporcional con el compuesto de interés
81
Las diferentes sustancias se analizan mediante
reacciones coloreadas. Cuanto mayor es la
concentración de la sustancia a analizar mayor es
el color de la reacción.
82

• También es posible que la muestra pueda ser
  leída cuando su espectro de absorción se
  encuentra en las regiones no visibles del
  espectro como las referentes a las regiones de
  UV o infrarroja

83
La diferencia entre colorimetría y
espectrofotometría consiste en el tipo de
instrumental empleado El colorímetro es un
aparato en los que la longitud de onda se
selecciona por medio de filtros ópticos que son
insertados en este. En el espectrofotómetro la
longitud de onda es seleccionada mediante
dispositivos monocromadores los cuales están
integrados a la máquina.
84
Algunos de los procedimientos colorimétricos o
espectrofotométricos con los que se cuenta para
precisar la concentración de una sustancia en
solución son los siguientes

• Referencia de color
• Colorímetro Klett
• Espectrofotómetro

85
(No Transcript)
86
(No Transcript)
87
Fundamento de colorímetro Klett
88
Una solución que absorbe el rojo pero no el
amarillo y el azul con la combinación de estos
dará un color verde.
89
Por lo anterior podemos aplicar un sencillo
método para precisar con cual filtro podríamos
leer una solución dependiendo el color de esta
Cuando la solución sea roja no se deberá utilizar
un filtro de color rojo porque justamente ese es
el color que no absorbe.
En relación a esto en el manual del
fotocolorimetro Klett aparece la siguiente tabla
que se puede utilizar para determinar que filtro
se debe emplear de acuerdo al color de la
solución a estudiar
90
(No Transcript)
91
A menudo se hace referencia a la estrella de
colores para facilitar el recordar la elección
del color de filtro para lectura colorimétrica.
Para soluciones de color azul verde y amarilla
correspondería un filtro rojo. Para soluciones de
color rojo naranja o amarrillo seleccionaríamos
un filtro color azul. Finalmente para soluciones
con color verde azul o amarilla elegiríamos un
filtro rojo.
92
Manejo del Fotocolorímetro
93

• Confirmar que el filtro (A) adecuado se
  encuentre dentro del portafiltros (B) y este en
  su lugar (C)
• Compruebe que la aguja indicadora (D) este en el
  centro en cero si no es así ajuste a cero con
  la perilla (E) que se localiza en la parte
  superior siempre y cuando la lámpara se
  encuentre apagada

94

• La lámpara (F) se enciende con el apagador (G)
  deje calentar entre 5 y 10 minutos.
• Ajuste la escala del potenciómetro (H) con la
  perilla correspondiente (I) a cero
• Coloque la cubeta (limpia) (J) con el blanco
  en su sitio (K) y encienda con el interruptor
  (L)

95

• Mediante la perilla (M) del galvanómetro se
  acopla la lectura a cero lo que implica que la
  aguja (D) y la escala (H) deben estar en cero.
• Para leer las soluciones problema Hay que
  retirar de la cubeta el blanco y colocar la
  solución problema la aguja (D) se desviará de su
  posición es necesario nuevamente ajustar (con
  I) a cero la lectura que proporcione la escala
  (H) es la correspondiente al problema

96

• U.K / 500 Absorbancia
• U.K. X 500 Transmitancia

• Las lecturas se realizan en U.K. (unidades Klett)
• Las lecturas que se mayores a 500 U.K y las
  menores a 25 U.K. no se usaran para calcular
  concentraciones

97
CUIDADOS

• Las muestras no deben tener burbujas encontrarse
  turbias o con precipitados.
• El volumen de la muestra no debe ser excesivo
  para evitar que se desborde en caso de que
  sucediera se debe limpiar con un paño limpio o
  papel absorbente suave para evitar rayarla.
• La cantidad a adicionar es máximo hasta ¾
  partes de la cubeta

• No se deben derramar líquidos sobre todo
  solventes ácidos o álcalis dentro del
  contenedor de la cubeta se puede dañar parte del
  mecanismo
• El fotocolorímetro nunca se debe encender sin
  filtro.
• No deje que se sobrecaliente mantenga apagado si
  no lo utiliza.

98
ESPECTROFOTÓMETRO
99
Un espectrofotómetro es un instrumento que
descompone un haz de luz (haz de radiación
electromagnético) separándolo en bandas de
longitudes de onda específicas formando un
espectro atravesado por numerosas líneas oscuras
y claras semejante a un código de barras del
objeto con el propósito de identificar
calificar y cuantificar su energía
100
Distribución de la luz en el espectrofotómetro
101
  Espectrofotómetro Mecanismo Interno
102
(No Transcript)
103
(No Transcript)
104
 
Met.Cient. I
105
Es usual que al seguir una receta para la
determinación de la concentración de un compuesto
en particular se indica una longitud de onda (l)
específica a la que hay que leer con el
colorímetro o espectrofotómetro.
Porque leer a diferentes l (longitudes de onda)
compuestos parecidos pero diferentes
La explicación radica en el hecho de que cada
producto químico se caracteriza por zonas del
espectro visible o no visible en el cual absorbe
con mayor o menor intensidad conformando en su
conjunto el espectro de absorción de tal
sustancia.
106
Cada compuesto (de complejo a simple) presenta un
espectro de absorción característico Las
longitudes de onda con mayor absorción (picos)
corresponderán de forma general a aquellas con
las que se leerá la muestra para determinar su
concentración La relación entre la
absorbancia por una sustancia a una l determinada
y su concentración es directamente proporcional
es decir a mayor concentración mayor proporción
de luz absorbida.
107
Así el espectro de absorción de la clorofila es
108
(No Transcript)
109
Colorante común la Rodamina 6G en Metanol..
Espectro de Absorción (línea contínua) y Espectro
de Transmisión (línea discontínua).
110
La muestra se coloca en una cubeta de forma
prismática
111
Se asume que el tubo celda o cubeta en la cual
se vierte la solución a leer no debe desviar la
trayectoria de la luz como requisito para el
cumplimiento de la ley de Beer
112
Como el cuarzo aparte de ser muy transparente
presenta un comportamiento constante ante la
variación de la longitud de onda es común que las
celdas del espectrofotómetro o colorímetro sean
de este material .
113
Curva Patrón
El razonamiento para el proceso de determinación
de una concentración desconocida es A partir de
concentraciones conocidas de las cuales también
se sabe su absorbancia (curva patrón) es posible
interpolar (intercalar) la concentración del
problema sabiendo su absorbancia (línea roja en
figura siguiente)
114
AB S 0 R B A N C I A
Absorbancia del problema
Interpolación
115
Con base en que la Absorbancia guarda una
relación lineal con la concentración se
comprende la existencia de una relación de
proporcionalidad entre la Absorbancia y la
concentración A1 / A2 C1 / C2 Donde A1
Absorbancia del problema. A2 Absorbancia de un
estándar de concentración conocida. C1
Concentración del problema. C2 Concentración
del estándar. Si despejamos C1 Conc del
problema
116
Ejemplo de curva patrón para la determinación de
safranina donde se solubiliza este colorante
únicamente en agua siendo por tanto el agua misma
el tubo blanco o de referencia para la
calibración del equipo (colorímetro o
espectrofotómetro)
117
En este ejemplo de determinación de Glucosa en
la preparación de los tubos para la lectura de la
curva patrón se incluyen más elementos y por lo
cual el tubo blanco (0) contiene todos los
componentes excepto la glucosa con el fin de de
poder calibrar la absorbancia del equipo a cero
118
RESULTADO de la curva patrón anterior
Absorbancia en el Espectrofotómetro a 490 nm
119
Un aspecto importante de la evaluación
espectrofotométrica es que muchas moléculas
orgánicas no absorben en el intervalo del
espectro visible sino en el rango de longitudes
de onda acordes al ultravioleta o al infrarrojo
Por lo que es común actualmente que la mayoría
de los espectrofotómetros actuales se
encuentren provistos con lo necesario para leer
en de tales intervalos
Así los grupos carbonilo presentes en los
aldehídos (RCHO) cetonas (RCOR) ácidos
carboxílicos (RCOOH) l ésteres (RCOOR) y
amidas (RCONHR) dan lugar a absorciones intensas
en la región del espectro de infrarrojo situada
entre 1780-1640 cm-1.
120
Absorciones máximas (picos de absorción) de
algunos compuestos que absorben en la región
ultravioleta
121
Grupos funcionales cuyos picos de absorción se
localizan en la región del infrarojo
122
Tipos de Espectrofotómetro

• Existen en la actualidad diversos tipos de
  aparatos con los mismos principios los hay
  mecánicos y digitales unos miden solo la luz
  visible otros son más precisos y miden también
  luz U.V. Infrarroja de absorción atómica (AA)
  flurescencia de rayos-X de emisión de plasma
  (ICP) multipropósitos (para medir directamente
  la solución con suspensión muestras sólidas y
  biológicas) acoplado a masasetc..

123
MCI
MCI
Para medir Luz Visible
Para medir Luz Visible y U.V.
MCI
Para medir Luz Visible y U.V.
Diferentes tipos de espectrofotómetros
124
Spectronic 20 D
Spectrónic 20
125
Partes del Spectronic 20 D
126
Manejo de espectrofotómetro
En la siguiente diapositiva se les proporciona el
instructivo para el manejo el espectrofotómetro
Modelo Spectronic 20.
127
Manejo de espectrofotómetro

• Prender el aparato (a)10 minutos antes de
  utilizarse se activará la luz roja de encendido
  (b).
• Seleccionar la longitud de onda con el botón (c).
• Ajuste (con a) a 0 de transmitancia con la
  tapa cerrada y sin muestra.
• Insertar la cubeta con el blanco en su sección
  (d).

b
d
c
a
128

• Ajustar (con e) a 100 transmitancia (0
  absorbancia)
• Retirar el blanco de la cubeta agregarle la
  muestra problema e insertar en su espacio bajar
  la tapa.
• La aguja (d) del lector se deslizará sobre la
  escala (f) se lee en de transmitancia ó en
  unidades de absorbancia

f
d
e
129
CUIDADOS

• Las muestras no deben tener burbujas encontrarse
  turbias o con precipitados.
• El volumen de la muestra en la cubeta no debe
  ser excesivo para evitar que se desborde en caso
  de que sucediera se debe limpiar con un paño
  limpio o papel absorbente suave para evitar
  rayarla.
• La cubeta se sujeta por los lados opacos.
• La cantidad a adicionar es máximo hasta ¾
  partes de la cubeta
• No se deben derramar líquidos sobre todo
  solventes ácidos o álcalis dentro del
  contenedor de la cubeta se puede dañar parte del
  mecanismo
• Se debe mantener el espectrofotómetro limpio y
  libre de humedad

130
Referencias e Imágenes de

• ciencianet.com/ espectros.html
• http//es.wikipedia.org/wiki/Color
• http//edison.upc.es/curs/llum/luz_vision/luz.html
  
• www.uam.es/.../ Guiones/Practica1.htm
• http//www.pnte.cfnavarra.es/publicaciones/pdf/qui
  _dg.pdf
• www.unicrom.com/Tut_unidades.asp
• omega.ilce.edu.mx3000/sites/ ciencia/volumen3/cie
  ncia3/112/htm/sec_17.htm
• www.chemkeys.com elementos de espectroscopia.
  Leyes de los procesos de absorción de la
  radiación por João Carlos de Andrade Rogério
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  para Met. Científica 1 Biología FES Iztacala
  UNAM. Sin publicar
• Imagenes proporcionadas por Carlos S. Chinea
  casanchi_at_ya.com
• Las imágenes señaladas con MCI fueron tomadas en
  el 2005 de los aparatos que se encuentran en el
  Laboratorio de Metodología Científica I de la
  Carrera de Biología en la Facultad de Estudios
  Superiores Iztacaca UNAM México.

135
AUTOR

• Maestra en Ciencias de la Educación Guadalupe
  Eugenia Daleth Guedea Fernández. México 2006
• Correo daleth_guede_at_yahoo.com.mx
• dalethguedea_at_hotmail.com y/o daleth.guedea_at_gmail.
  com